LSS基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定

李名聪，孙晓梅，李昱昊，周 宏，罗 欣，张胜权

甲羟戊酸代谢途径是生物体内重要的代谢途径之一，该途径在各种酶的作用下利用乙酰辅酶A产生一系列产物包括甲羟戊酸(mevalonic acid，MVA)、羊毛固醇(lanosterol，LAN)等。LSS编码羊毛甾醇合酶，这是上述途径中的关键酶，能够将氧鲨烯环化形成羊毛固醇。LSS双等位基因突变会引起脱发伴智力低下(alopecia with mental retardation，APMR)综合征、广泛的先天性白内障。近期研究表明，LSS双等位基因突变导致的组织羊毛固醇合成酶缺乏会引起稀毛症和白内障。开发LSS缺陷状态的动物模型可以从整体水平研究LSS蛋白的功能。由于LSS null小鼠胚胎致死性，尚未有白内障或稀毛症小鼠模型。该研究针对LSS基因敲除小鼠的繁育饲养和基因型鉴定，对其方法进行探讨和优化，为相关机制研究提供更好的LSS基因敲除动物模型。

1 材料与方法

1.1 实验动物

2017年12月从南京大学南京生物医药研究所引进3只无特定病原体(specific pathogen free，SPF)级C57BL/6品系小鼠，8 周龄，(20±2)g，2只雌鼠基因型是LSS基因敲除型杂合子(LSS)，1只雄鼠基因型是野生型(wide type，Wt)，实验动物许可证号：SCXK(苏)2015-0001。所有实验动物的饲养与操作均符合国标及安徽省实验动物中心管理饲养条例。

1.2 主要试剂

鼠尾基因型鉴定试剂盒(上海碧云天生物公司)；DL2000 bp DNA marker和Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0 Plus dye)(大连宝生物工程有限公司)；琼脂糖粉、引物和溴化乙锭(Ethidium bromide, EB)(上海生工生物工程股份有限公司)；抗β-actin抗体、抗LSS抗体(美国Santa Cruz公司)；辣根酶标记山羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.3 仪器

DYY-6C电泳仪(北京市六一仪器厂)，普通PCR仪(美国赛默飞公司)，全自动数码凝胶图像分析仪(上海勤翔科学仪器有限公司)

1.4 小鼠的饲养和信息记录