复方甲砜霉素注射液的研制

李 香，陈胡羚，陈 莹，王虹雅，侯巧弟，王萍萍，郭珊珊，李引乾*

(1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨陵 712100；2.陕西省动物疫病预防控制中心，陕西西安 710016；3.宝鸡市凤翔区畜牧兽医技术推广站，陕西宝鸡 721400)

甲砜霉素(Thiamphenicol，TAP)是氯霉素类广谱抗菌药物，TAP为白色的结晶性粉末，pH呈中性，无臭味。TAP对光及热的稳定性好，但具有引湿性。室温下的溶解度为5 g/L～10 g/L，较氯霉素略大，在乙醇中的溶解度为50 g/L，TAP几乎不溶于乙醚与氯仿[1-2]。TAP是一种肝微粒体酶抑制剂，因抑制许多药物(如降糖药、抗凝剂、抗癫痫药和环磷酰胺)在肝中的代谢而增加其作用时间和毒性[3-4]，此外，TAP在较低血药浓度时，可降低青霉素的抗菌活性，故应将青霉素先于TAP数小时使用[5]。为防止用药合并症的发生，应注意TAP与其他药物的相互作用。

乳房炎作为我国养殖业发展始终面临的难题，目前有许多相关药物投入使用。理想的治疗药物应满足以下特点：①最小抑菌浓度低；②肌内注射时药物利用度高；③药物在血液中呈游离状态；④药物的脂溶性高；⑤药物与蛋白质结合率低；⑥药物的半衰期长；⑦药物活性不受炎性分泌物的影响；⑧药物在体内不蓄积[6]。目前，除了抗生素疗法，中药疗法、激素疗法、物理疗法、封闭疗法、生物疗法等都可用于乳房炎的治疗。根据乳房炎类型不同，治疗药物或方法也有所不同[7]。急性乳房炎常采用红霉素、四环素、磺胺嘧啶钠或其他抗生素进行全身治疗，也可用青霉素、链霉素、庆大霉素、环丙沙星、卡那霉素等抗生素进行乳室灌注。慢性乳房炎常采用卡那霉素或环丙沙星配合青霉素共同灌注治疗。隐性乳房炎常通过提高家畜自身免疫力来预防，尽量避免使用抗生素，必要时可采用青霉素和链霉素联合灌注治疗[8]。

目前，大多都使用单种抗菌药用于预防和治疗家畜乳房炎，其制作的工艺简单易操作，但效果发挥较为缓慢，且使用也较为复杂。将药物研制成复方注射液，可以有效提高药物的作用效果，减少药物使用量，增强药物安全性，有利于药物的临床使用。因此，本研究以TAP为主药，辅以氟尼辛葡甲胺[9-10]及其他辅料，研制出复方TAP注射液，并对该注射液进行质量控制研究和体外抑菌试验，为其在兽医临床上的应用提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品及试剂 TAP(批号20180611)，武汉贝尔卡生物医药有限公司产品；氟尼辛葡甲胺(批号20170921)，河北佰品生物科技有限公司产品；聚乙二醇400(分析纯，批号20180318)、乙醇胺(分析纯，批号20170926)、无水亚硫酸钠(批号20170307)和N，N-二甲基甲酰胺(批号20180118)，陕西盘龙翊海医药有限公司产品。

1.1.2 试验用菌 无乳链球菌、大肠埃希氏菌及金黄色葡萄球菌，西北农林科技大学动物医学院兽医药理实验室分离并保存。

1.1.3 仪器设备 pH计(Bante210)，上海般特仪器有限公司产品；大容量恒温水浴箱(DZ-75 L)、澄明度检测仪(YB-Ⅲ)，成都华衡仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 复方TAP注射液的研制

1.2.1.1 复方TAP注射液的处方 复方TAP注射液以TAP为主药，分别以氟尼辛葡甲胺、N，N-二甲基甲酰胺、聚乙二醇400、无水亚硫酸钠和活性炭作为辅药，助溶剂、稳定剂、抗氧化剂和吸附剂，通过预试验，确定主药和附加剂的用量。

1.2.1.2 处方工艺 根据处方进行配液，利用活性炭吸附，采用滤膜滤过溶液后，进行灌装、灭菌、以及查漏，制得复方TAP注射液，即按照一般注射液的生产工艺进行制备[11]。

1.2.1.3 质量控制 澄明度检查，利用澄明度检测仪对所制备的复方TAP注射液进行澄明度检测，对其外观特征进行描述，主要观察有无可见异物；pH 检查，利用pH计对制备的复方TAP注射液的pH进行测定。

1.2.2 复方TAP注射液的药敏试验

1.2.2.1 抗菌药液的制备 以本试验研制的复方TAP注射液为试验药(记为A液)。以TAP注射液为对照药(记为B液)，按配方制备TAP注射液，搅拌澄清后再加入活性炭，振荡均匀，20 min后用过滤，用乙醇胺调节pH至7.0～7.5，最后用微孔滤膜过滤，灌封，灭菌得TAP注射液。

1.2.2.2 药敏试验 按参考文献[12]方法进行。

2 结果

2.1 复方TAP注射液质量控制结果

2.1.1 澄明度检查结果 制备的复方TAP注射液澄清，未见异物，符合兽药典对注射液澄明度要求[13]。

2.1.2 pH检查结果 复方TAP注射液pH检测结果为7.3，在规定的4.0～9.0范围内[13]，符合兽药典注射液对pH的要求。

2.2 药敏试验结果

2.2.1 MIC测定结果 A液对无乳链球菌、大肠埃希氏菌及金黄色葡萄球菌的MIC试验结果如图1。A液(复方TAP注射液)对3种细菌的MIC分别为12、12、8 mg/L表1。B液对3种细菌的MIC结果如图2。B液(TAP注射液)对3种细菌的MIC分别是16、12、16 mg/L见表1。

表1 两种注射液对3种致病菌的MIC结果

A.无乳链球菌; B.大肠埃希氏菌; C.金黄色葡萄球菌A.S.agalactiae; B.E.coli; C.S.aureus

A.无乳链球菌; B.大肠埃希氏菌; C.金黄色葡萄球菌A.S.agalactiae; B.E.coli; C.S.aureus

结果显示，复方TAP注射液(A液)对无乳链球菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌呈现良好的抑菌效果，优于TAP注射液(B液)。

2.2.2 MBC测定结果 A液(复方TAP注射液)对金黄色葡萄球菌的MBC是32 mg/L，见表2。A液对金黄色葡萄球菌的MBC试验结果如图3。A液对大肠埃希氏菌的MBC试验结果如图4。A液(复方TAP注射液)对大肠埃希氏菌的MBC是32 mg/L，见表2。A液(复方TAP注射液)对无乳链球菌不杀菌，见表2。A液对无乳链球菌的MBC试验结果，如图5。

表2 两种注射液对3种致病菌的MBC结果

A～F.A液浓度4、8、16、32、64、128 mg/LA-F.The concentrations of liquid A are 4,8,16,32,64,128 mg/L

A～C.A液浓度8、16、32 mg/LA-C.The concentrations of liquid A are 8,16,32 mg/L

A～C.A液浓度32、64、128 mg/LA-C.The concentrations of liquid A are 32,64，128 mg/L

B液对金黄色葡萄球菌的MBC试验结果，如图6。B液(TAP注射液)对金黄色葡萄球菌的MBC是64 mg/L，见表2。B液对大肠埃希氏菌MBC试验结果，如图7。B液(TAP注射液)对大肠埃希氏菌的MBC是32 mg/L，见表2。B液对无乳链球菌的MBC试验结果，如图8。B液(TAP注射液)对无乳链球菌不杀菌，结果见表2。复方TAP注射液(A液)与TAP注射液(B液)对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌均具有明显的体外杀菌作用，而对无乳链球菌则无体外杀菌作用。

A～F.B液浓度4、8、16、32、64、128 mg/LA-F.The concentrations of liquid B are 4,8,16,32,64,128 mg/L

A～C.B液浓度8、16、32 mg/LA-C.The concentrations of liquid B are 8,16,32 mg/L

A、B.B液浓度64 mg/L and 128 mg/LA，B.The concentrations of liquid B are 64 mg/L and 128 mg/L

3 讨论

本试验对最佳处方的选择采用了正交试验和极差法两种方法。本试验考虑溶剂性质及性价比最终确定以水作为溶剂。N，N-二甲基甲酰胺[14]和N，N-二甲基乙酰胺均可作为本试验处方的助溶剂，而以N，N-二甲基甲酰胺效果最为明显，因此选N，N-二甲基甲酰胺作助溶剂。PEG-400[15]无毒无刺激，且能很好地保持溶液的稳定性，故选其作为稳定剂。无水亚硫酸钠与本试验处方不会发生配伍禁忌，故选其作为抗氧化剂。质量控制是注射液生产必检的项目内容，本试验以注射液生产要求分别对澄明度、酸碱度进行进行了评价。结果表明，本试验制备的复方甲砜霉素注射液各项检查均合格，符合药典要求。

TAP是一种广谱抗生素，对革兰氏阳性和阴性菌都有作用[16]。本试验结果得出，复方甲砜霉素注射液与甲砜霉素注射液对金葡菌和大肠埃希氏菌的杀菌效果明显，对无乳链球菌无杀菌作用。分析可能是由于氟尼辛葡甲胺为解热镇痛剂，主要起解热镇痛的作用，而无抑菌作用，但在实际应用中，氟尼辛葡甲胺可对疾病的恢复起着一定的促进作用。