威尼克何德霉感染14例

郑文爱， 徐和平， 乔 凤， 吴伟伟， 杨先旭， 唐小正， 林昌炎

威尼克何德霉（Hortaea werneckii）可引起皮肤角质层感染，是传统意义上的掌黑癣（tinea nigra）的致病菌。掌黑癣临床表现为表面棕色到黑色无鳞片和不突起的斑疹，一般无自觉症状，主要影响手掌表面，也见其他部位感染的报道，包括足底、颈部和胸部，尚未发现感染指（趾）甲的文献报道。

1 材料与方法

1.1 临床资料来源

回顾性调查2016—2020年海南省第五人民医院诊断为威尼克何德霉感染患者的诊治经过，对其人口学资料、临床表现、治疗和预后进行分析。

诊断标准：临床表现+实验室检查结果。根据文献[1]，掌黑癣患者临床表现为发生于手掌、足跖或其他皮肤浅表、棕或黑色无鳞屑的斑疹。实验室检查以皮屑组织检测出威尼克何德霉即可确诊。

1.2 实验室检测

1.2.1 真菌镜检 取皮损处皮屑滴加10%氢氧化钾溶液涂片和钙白荧光染色镜检。

1.2.2 真菌培养 取皮损处皮屑或病甲屑接种于沙氏葡萄糖琼脂（SDA）培养基上，25～28℃培养5 d，观察菌落生长情况和镜下特点。见图1。

图1 威尼克何德霉的镜下特征Figure 1 Microscopic morphology of Hortaea werneckii

1.3 药敏试验

复苏上述培养分离到的威尼克何德霉，经分子生物学复核鉴定后作药物敏感性试验。

1.3.1 分子生物学鉴定 菌株转种至马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养5～7 d后，提取DNA进行基因测序。引物ITS1：5'-CGTAGGTGAACCTGCGG-3'，ITS4 ：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'，由北京睿博兴科生物技术公司合成。扩增体系：2×Taq Mix 15 μL，ITS1、ITS4（3.2×10-5mol/L）各 0.5 μL，模板 2 μL。PCR 参数：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，35 个循环；72 ℃ 7 min。用 3730x1DNA analyzer 测序仪（ABI公司） 进行测序，结果经基因库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）比对。

1.3.2 药物敏感试验 菌株于PDA培养5～7 d后，用肉汤微量稀释法测定特比萘芬、伊曲康唑、伏立康唑、氟康唑、酮康唑MIC值，操作方法按CLSI M38-A2 和M27-A3标准进行检测。……