人类诱导多能干细胞体外定向分化为神经干细胞的方法

王 乐，马丹丹，徐 盼，张 茜，崔 勇，叶放蕾

1)郑州大学第一附属医院耳科 郑州 450052 2)广东省医学科学院·广东省人民医院耳鼻咽喉科 广州 510080

诱导多能干细胞是体外通过一定条件将成体细胞重新编程到多能干细胞状态，具有胚胎干细胞相似的形态及增殖分化能力。人类诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cell，hiPSC)[1]完全克服了胚胎干细胞在临床应用时涉及的伦理及免疫排斥问题，具有重要的临床应用价值，成为干细胞治疗的主要细胞来源。目前hiPSC已逐渐被应用到治疗中枢神经系统性疾病的研究[2-3]中，体外诱导hiPSC定向分化为神经干细胞的方法各不相同，效率低。本研究拟应用小分子化合物A8301和DMH1体外诱导hiPSC分化为神经干细胞，为进一步的细胞治疗提供帮助。

1 材料与方法

1.1 细胞滋养层细胞系CF-1和hiPSC细胞来源于中国科学院广州生物医药与健康研究院。

1.2 主要试剂及仪器DMH1和A8301购自R&D公司，兔抗人Nestin多克隆抗体和鼠抗人Pax6多克隆抗体购自Santa Cruz公司，bFGF、Trizol试剂、DMEM/F12培养基、N2、B27、matrigel胶、血清替代物和2.5 g/L胰蛋白酶等购自Invitrogen公司，DMEM高糖培养基和GlutaMax等购自Gibco公司；紫外分光光度计和离心机为Eppendorf公司产品，光学显微镜和倒置荧光显微镜为Zeiss公司产品。

1.3 培养基与实验分组各个阶段应用的培养基及其组成成分见表1。细胞根据悬浮阶段所用培养基的不同分为实验组和对照组。悬浮阶段对照组用基础的无血清悬浮培养基培养；实验组用加入小分子化合物A8301和DMH1的无血清悬浮培养基培养。两组贴壁阶段均用维持神经分化的贴壁培养基。……