可视化单引物等温扩增技术检测发酵乳制品中沙门氏菌的研究

王妙姝，范春刚，3，郑玮丽，3，王 震，马晓燕

（1. 河北新希望天香乳业有限公司，河北保定 072159；2. 河北农业大学食品科技学院，河北保定 071001；3. 河北省益生功能性乳制品技术创新中心，河北保定 072159）

沙门氏菌是世界上最常见的引发食源性疾病爆发的病原菌[1]。沙门氏菌引起的食物中毒事件位列榜首，具有高检出率、高发病率和高死亡率的特点[2]。2019 年，欧盟发布的食品安全事件统计数据显示，由沙门氏菌污染造成的食物中毒事件占50%以上[3]。营养丰富的发酵乳制品日益受到消费者的青睐，其食用安全性受到人们的高度重视。在乳制品的生产和加工环节中，原料乳极易被沙门氏菌等多种致病菌污染[4-5]。

目前，检测沙门氏菌传统的微生物培养方法存在着耗时长、步骤繁琐等问题[6]。因此，建立一种快速、可靠的检测方法显得尤为迫切和必要。随着分子生物学技术的发展和应用，聚合酶链式反应（PCR） 和环介导等温扩增（LAMP） 等核酸扩增技术以其快速灵敏和特异的优势，逐渐取代传统检测方法，但PCR 技术始终无法摆脱依赖昂贵的热循环仪的局限[7]。LAMP 方法需要4 条或6 条引物，容易造成假阳性结果。

单引物等温扩增技术（Single primer isothermal amplification，SPIA） 是近年来发展的一种新型线性核酸等温扩增技术，具有扩增效率高、忠实性强、有效防污染等优点。试验在SPIA 技术的基础上，结合荧光染料（SYBR Green II） 建立可视化SPIA 检测发酵乳制品中沙门氏菌的方法，可应用于沙门氏菌的风险监测和快速筛选检验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

试验所用菌株见表1。……