RNA m6A甲基化修饰对三氧化二砷抑制肝癌细胞发生的作用研究

伍鑫 张琰君 国滨 徐振华 肖静丽

广州中医药大学金沙洲医院 510000

通信作者：伍鑫，Email：8035192@qq.com

m6A甲基化修饰是RNA修饰中普遍存在的一种方式，其对维持mRNA的功能方面具有重要作用。m6A甲基化修饰具有可逆性，其发生三种调节因子如甲基转移酶14/3（METTL14/METTL3）、去甲基化酶（FTO/alkbh5）和阅读蛋白（YTHDF1/YTHDF2）等进行调节［1］。目前大量研究发现，m6A不仅参与正常细胞的生长调控，同时还参与肿瘤细胞的发生及发展，m6A甲基化紊乱容易增加肿瘤细胞的癌变［2-3］。肝癌是危害性较大的恶性肿瘤疾病，有研究发现FTO通过调控m6A修饰从而影响肝癌的发生，肝癌组织中FTO水平上调可有效抑制肝癌的生长，METT14表达水平降低可引起肝癌细胞中m6A修饰水平下降［4］。基于m6A修饰及调控因子与肿瘤细胞发生相关性，许多肿瘤治疗药物的药效评定中多以m6A修饰及调控因子变化为参照，如三氧化二砷（ATO）是目前治疗肝癌的常用药物，但其抗肝癌的机理目前尚不清楚，有少量研究发现m6A甲基化修饰参与ATO抑制肝癌治疗过程，但这些信号分子调控m6A抑制肝癌细胞生长的还需进一步研究［5］。

1 材料与方法

1.1 试剂及仪器 高糖DMEM培养基（美国Gibco公司，11054001）、FBS（美国Gibco公司，12483020）、ATO（美国Sigma公司，CAS#1327-53-3）、噻唑蓝（MTT）（碧云天，C0009）、二甲基亚砜（DMSO）（碧云天，ST1276）、CCK-8检测试剂盒（英国Abcam公司，ab228554），总RNA提取试剂盒（德国Qiagen公司，74204）、m6A RNA甲基化定量检测试剂盒（美国Epigentek公司，P-9010）、RIPA细胞裂解液（碧云天，P0013B），人肝癌细胞株HepG2（中科院生物化学与细胞生物学研究所）；METTL3兔抗（英国Abcam公司，ab195352）、METTL14兔抗（英国Abcam公司，ab252562）、FTO兔抗（英国Abcam公司，ab126605）、YTHDF1兔抗（英国Abcam公司，ab252346）及CDC42兔抗（英国Abcam公司，ab187643），GAPDH鼠抗（英国Abcam公司，ab8245）；酶标仪……