艰难梭菌A毒素诱导人黏液表皮样癌MEC-1细胞DNA双链损伤研究

尤培蒙, 王丽丽, 杨宇琴, 王晨曦, 赵 晋, 郭 忠

(西北民族大学 医学部, 甘肃 兰州 730030)

艰难梭菌(Clostridiumdifficile)属厌氧革兰阳性杆菌,目前不再被认为是人类肠道正常菌群,而是由于长期卧床或住院等环境因素改变,机体肠道菌群失调而造成患者出现腹泻症状的最常见的主要病原菌。该菌感染后前期大多数无明显症状,但该菌若数量突增,产生的各类毒素大量进入肠道,则可引起伪膜性肠炎(pseudomenbranous colitis,PMC)、盆腔炎和菌血症等疾病,在这些可引起感染性疾病的诸多毒素中艰难梭菌A毒素(Clostridiumdifficiletoxin A,TcdA)最为特殊[1]。艰难梭菌毒素A对SMMC-7721细胞有明显的增殖抑制活性作用,此作用通过诱导细胞凋亡机制产生[2]。它可以诱导多种肿瘤细胞发生程序性死亡,其最主要的原因便是引起肿瘤细胞DNA双链断裂(double strand break, DSB)。DSB造成的细胞DNA双链断裂修复损伤灶点不及时会使细胞周期检查点停滞,从而导致细胞死亡。黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma)来源于腺管的上皮细胞,为口腔唾液腺恶性肿瘤,其中低分化型的黏液皮样癌具有恶化程度高、放射治疗不敏感和预后生存率低的显著特点[3]。本文采用人黏液表皮样癌MEC-1细胞作为研究对象,探究艰难梭菌A毒素诱导其DNA双链损伤的机制,旨在为以艰难梭菌A毒素作为抗肿瘤的化疗药物提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

人黏液表皮样癌细胞系MEC-1(空军军医大学口腔医学院);艰难梭菌A毒素(西北民族大学医学院傅思武团队实验室);高糖培养基DMEM(Gibco GlutaMAX公司);胎牛血清(Lonsera公司);噻唑蓝MTT、二甲基亚砜DMSO(SIGMA公……