变应性鼻炎患儿血清IL-33，ST2水平及IL-33基因rs3939286 G/A位点多态性与疾病程度相关性分析

林李娜，何 微，刘国栋，凌秀婷，王小青，梁玉玲，王晶晶，梁丕凤

（深圳市龙华区人民医院 a.全科门诊；b.检验科，广东深圳 518109）

变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是机体接触变应原后主要由免疫球蛋白E（(immunoglobulin E，IgE）介导所引起的一种鼻黏膜非感染性炎性疾病[1-2]。有研究表明，AR是由基因与环境互相作用而诱发的一种多因素疾病，其中基因多态性在AR发病中发挥了重要的作用[3]。白细胞介素-33（interleukin-33，IL-33）是最新发现的一种细胞调控因子，多种组织及细胞中广泛存在。同时有研究表明，IL-33基因多个位点存在多态性，与过敏性、自身免疫性及多种炎性等疾病的发生有关[4-6]。特异性受体肿瘤发生抑制蛋白2（specific receptor suppression of tumorigenicity 2，ST2）是IL-33的一种特异性跨膜受体，主要存在于辅助型T细胞2(T helper 2 cell, Th2)、肥大细胞及嗜酸性粒细胞等免疫细胞中，与 IL-33 结合后可导致细胞活化，从而参与过敏性和自身免疫性等多种疾病的发生与发展[7-9]。AR患者血清IL-33水平表达情况已见少数报道[10]，但其基因多态性在AR发病中的作用机制及与IL-33水平的相关性未见报道。为此，本研究对AR患儿和健康儿童IL-33及ST2水平及IL-33基因rs3939286G/A位点SNP与疾病程度进行了对比分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2020年3月～2021年6月深圳市龙华区人民医院AR确诊患儿135例作为AR组，年龄5～12岁，平均年龄7.16±2.39岁；其中男性79例，女性56例。纳入标准：①AR患儿均符合《儿童过敏性鼻炎诊疗-临床实践指南》[11]诊断标准，并根据病情程度分为轻度AR患儿（n=56）和中-重度AR患儿（n=79）；②患儿及家属均知情同意；③变应原点刺实验阳性或特异性IgE阳性者；④1个月以上未服抗组胺、激素等药物者。排除标准：①伴有其它鼻部疾病者；②伴有严重实质器官疾病者；③伴有其它免疫系统疾病者；④不自愿参与者。同时选取体检健康儿童116例作为对照组，年龄4～13岁，平均年龄6.85±2.78岁，体检均未见明显异常；其中男性69例，女性47例。确保两组的年龄、男女人数比例等一般性资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器与试剂 IL-33和ST2酶联免疫试剂盒（上海江莱生物科技有限公司），AE275酶联免疫分析仪（深圳市爱康生物科技有限公司），脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）全血基因组提取试剂盒（深圳亚能生物科技有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 IL-33和ST2水平测定：采集2.0～3.0ml不抗凝静脉血，室温30min后分离血清，3 500r/min离心5min，采用酶联免疫吸附法（(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）对IL-33和ST2水平检测。所有操作按仪器和试剂盒说明书进行。

1.3.2 DNA提取：抽取2.0～3.0ml乙二胺四乙酸二钾（ethylenediamine tetraacetic acid dipotassium，EDTA-2K）抗凝静脉全血，运用DNA提取试剂盒提取全血基因组DNA，并将合格的DNA提取物储于-20℃备用。

1.3.3 IL-33基因rs3939286 G/A位点SNP分析：利用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应（restriction fragment length polymor-phism-polymerase chain reaction，RFlP-PCR）法对IL-33基因rs3939286 G/A位点SNP进行分析，具体操作参照文献[5, 12]。

1.4 统计学分析 采用SPSS20.0软件。计量资料以均值±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，两组间比较采用χ2检验；遗传平衡采用Hardy-Weinberg检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组IL-33和ST2水平比较 AR组IL-33和ST2水平分别为251.67±39.15pg/ml, 5.23±0.29pg/ml,明显高于对照组（108.24±20.63pg/ml，2.06±0.11 pg/ml），差异均有统计学意义（t=7.3416, 8.0197，P=0.0295, 0.0273）。

2.2 不同程度AR患儿IL-33和ST2水平比较 中-重度AR患儿IL-33和ST2水平分别为374.95±58.32pg/ml，7.98±0.54pg/ml，明显高于轻度AR患儿（164.28±30.37pg/ml，3.28±0.17pg/ml），差异均有统计学意义（t=7.6027，8.3150，P=0.0274，0.0251）。

2.3 电泳图 见图1。AR组和对照组IL-33基因rs3939286 G/A位点SNP均出现GG，GA和AA三种基因型，经Hardy-Weinberg平衡检验，两组差异无统计学意义（χ2=1.203 8，P=0.065 4），表明抽样具有样本代表性。

图1 IL-33基因rs3939286 G/A位点电泳图

2.4 AR组与对照组、不同程度AR患儿IL-33基因rs3939286G/A位点SNP比较 见表1。AR组IL-33基因rs3939286 G/A位点AA基因型和A等位基因频率明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。中-重度AR患儿IL-33基因rs3939286 G/A位点AA基因型和A等位基因频率明显高于轻度AR患儿，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 两组及不同程度IL-33基因rs3939286 G/A位点SNP比较 [n（%）]

2.5 不同基因型AR患儿IL-33水平比较 AA基因型AR患儿IL-33水平（303.12±41.60pg/ml）明显高于AG基因型（214.38±33.15pg/ml），而AG基因型明显高于GG基因型（129.06±23.78pg/ml），不同基因型之间差异有统计学意义（χ2=3.505 4，P=0.039 4）。

3 讨论

变应性鼻炎（AR）是儿童最常见的过敏性疾病之一，不仅出现喷嚏、鼻涕及鼻塞等症状，还常伴有头痛、恶心及记忆力减退，且治愈后若再次接触过敏原后易引起复发，严重影响学习，若症状控制不佳还可导致睡眠障碍和哮喘，严重影响患儿身体健康和生活质量[13-14]。随着大气污染、SO2浓度增高、饮食结构及生活方式的改变，AR 发病率呈逐年上升趋势。有研究表明，工业化国家儿童AR发病率可高达40%[15]，但AR发病机制十分复杂，目前尚未完全明确，且过敏原种类繁多，对AR预防和治疗造成很大困难。因此，探索AR发病机制对AR的预防和治疗具有重要的指导意义。

有研究表明，辅助性T细胞1/辅助性T细胞2（helper T cell 1/helper T cell 2，Th1/Th2）比例失衡引起细胞因子动态平衡失调是导致AR患儿发生和发展的重要因素之一。IL-33是一种具有多种生物学效应的细胞调控因子，一方面可通过与ST2受体结合，打破Th1/Th2比例平衡，增强效应Th2细胞的优势地位，导致IL-4，IL-5及IL-13等细胞因子分泌增加。另一方面可促进肥大细胞脱颗粒释放IL-4，IL-5及IL-13，从而在哮喘、AR，炎性肠病、糖尿病、自身免疫性疾病、脑炎及心脑血管等多种疾病中发挥重要的作用[9，16-18]。本研究结果显示，AR患儿IL-33和ST2水平比健康儿童明显升高，且以中-重度AR患儿升高更为明显（P＞ 0.05），与有关报道基本一致[10]，这说明IL-33和ST2可能参与AR的发生和进程，这可能与IL-33通过IL-33/ST2信号通路活化核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB），促进炎性细胞增殖、活化及脱颗粒释放Th2炎性细胞因子，诱导鼻黏膜中杯状细胞的不可逆性增生和慢性炎症等有关。此外，还可能与IL-4和IL-5促进嗜酸性粒细胞表达有关[9，17，19]。

AR病因和发病机制十分复杂，至今尚未完全阐明。但有研究表明，AR患儿具有特应性体质，有家族聚集性，是由遗传、免疫及环境等多种因素共同作用所导致的一种疾病，其中遗传基因多态性在AR的发病中发挥了重要的作用，已有研究发现多种基因突变与AR发生和进展有关[20-21]。IL-33是最新发现的一种细胞调控因子，其基因多个位点存在多态性，与过敏性、自身免疫性及炎性等疾病的发病机制有关[4-6]。本研究结果显示，AR患儿IL-33基因rs3939286 G/A位点AA基因型和A等位基因频率比健康儿童明显升高，且以中-重度AR患儿升高更为突出（P＜ 0.05），这表明AR发生和进展可能与IL-33基因rs3939286 G/A位点多态性有关，其中AA基因型可能与AR发病和疾病程度有密切关系。此外，不同IL-33基因rs3939286 G/A基因型AR患儿IL-33水平存在很大差异（P＜ 0.05），其中以AA基因型AR患儿含量最高，这说明IL-33基因rs3939286 G/A位点多态性可能是通过影响IL-33水平而在AR发病中发挥作用的，但具体作用机制有待进一步深入研究。

综上所述，AR患儿血清IL-33和ST2水平明显升高，与疾病严重程度有关。同时AR患儿IL-33基因rs3939286 G/A位点呈多态性，其中AA基因型和等位基因频率升高明显，以中-重度AR升高更为突出，且不同基因型IL-33水平存在差异，可能与AR的发生和发展有密切关系。