胸腺素β10在食管癌中表达的病理意义*

刘尚国 李汉臣 赵宝生 王忠民 秦秀广 齐 博

胸腺素最早是从牛胸腺中提取出来的一类蛋白质，因当时认为与胸腺的免疫功能有关而得名[1]。后来发现其普遍存在于多种组织细胞中，Santelli等[2]研究表明胸腺素 β10（thymosin β10，Tβ10）在食管癌中高表达，并且与肿瘤的发生、发展密切相关，因此胸腺素是评估肿瘤的一个重要参考指标。国内有关β族胸腺素研究相对较少。本研究旨在探讨Tβ10蛋白表达水平与食管癌发生、浸润及转移的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本组为2004年7月—2005年2月入住我院的70例食管鳞癌患者，年龄38～78岁，平均（52.61±12.91）岁。制作食管鳞癌组织病理标本，经HE染色复证。同时随机抽取30例癌旁正常食管黏膜组织标本作为对照组。

1.2 方法 主要试剂：一抗鸡抗人Tβ10 IgY、免疫组织化学SP染色试剂盒及3，3-二氨基联苯胺（DAB）显色剂等购于北京中山生物技术有限公司，为美国Santa Cruz生物公司产品。采用免疫组化SP法检测Tβ10在70例食管癌和30例癌旁正常食管黏膜中的表达。常规脱蜡至水，3%过氧化氢（H2O2）封闭30 min，正常山羊血清阻断30 min，一抗孵育1 h，二抗孵育1 h，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片，以PBS代替一抗做空白对照。染色步骤按照试剂盒说明书进行，阳性显色为棕黄色，以细胞浆出现棕黄色染色为阳性细胞。在400倍显微镜视野下每张切片随机观察4个视野，切片中无阳性细胞为0分，阳性细胞<25%为1分，阳性细胞25%～50%为2分，阳性细胞>50%为3分；染色深度以多数细胞为准，无阳性细胞为0分，淡黄色显色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将阳性染色强度评分和阳性细胞所占百分比评分相加，结果分为4级：0分为-，1～2分为＋，3～4分为++，5～6分为+++。评分过程由2名病理科高年资医生完成。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计分析软件，采用χ2检验分析Tβ10表达与临床病理因素的关系，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

70例食管癌中Tβ10的阳性表达率 75．71%（53/70）高于30例正常食管黏膜中的阳性表达率23．33%（7/30），差异有统计学意义（χ2＝ 28．492，P ＜0．01）。Tβ10阳性表达于食管鳞癌细胞浆中，肿瘤间质细胞中未见表达，见图1、2。不同分化程度食管癌之间Tβ10阳性率差别有统计学意义，中分化和低分化食管癌Tβ10的阳性表达率均高于高分化组（χ2分别为 6．047 和 7．736，均 P ＜ 0．05）；淋巴结有转移者的Tβ10阳性表达率高于无转移者（P＜0．05）；浸润深度到肌层以上者的Tβ10阳性表达率高于浸润到黏膜或黏膜下层者（均P＜0.05），见表1。

表1 食管癌组织中Tβ10的表达与临床特征的关系

3 讨论

胸腺素可分为α族和β族两类，胸腺素β（thymosin β，Tβ）是指中等电点位于 pH5．0～7．0 的一组分子。至今，已发现的Tβ有15种，人体内存在3种，即 Tβ4、Tβ10 及 Tβ15。Tβ10 由 43个氨基酸组成，分子质量约为4.8 ku[3]。后来人们陆续发现Tβ家族的成员是一类肌动蛋白单体结合蛋白，广泛存在于哺乳动物除红细胞以外的所有细胞内，在维持肌动蛋白的动态平衡、肿瘤的发病、转移、细胞凋亡、炎症、血管生成和创伤愈合等很多生理、病理过程中发挥重要作用。

本研究发现在食管鳞癌组织中的Tβ阳性表达率高于癌旁正常食管黏膜，表明Tβ10的高表达可能与食管癌的发生有关。Tβ10对细胞分化的调节机制可能是：细胞骨架在细胞分化过程中承担重要作用，G-肌动蛋白（G-actin）和F-肌动蛋白（F-actin）的动态平衡变化影响细胞骨架结构，进而影响细胞的分化[4]。刘从容等[5]应用免疫组化法检测10例乳腺增生症、76例原发性乳腺癌及27例淋巴结转移性乳腺癌中Tβ10的表达情况，发现乳腺增生组织表达为阴性或仅在肌上皮内有非常微弱的表达，乳腺癌患者的阳性率为100%，早期浸润的原位癌弱于普通浸润癌，高分化组染色弱于中低分化组，且Tβ10蛋白在乳腺组织发生癌变和浸润的过程中逐渐增高，并与癌的组织学分级具有一定的相关性，对乳腺癌的诊断和预后判断具有一定的参考意义。Chiappetta等[6]研究甲状腺癌组织发现，Tβ10在正常甲状腺无表达，甲状腺腺瘤部分表达，甲状腺癌高表达，在低分化甲状腺癌中表达更高。本研究发现Tβ10在食管鳞癌组织中随高、中、低分化癌中的表达呈逐渐增高趋势，进一步证实了Tβ10表达与肿瘤细胞分化的相关性。

Tβ10具有与G-actin结合的能力，在细胞中能结合游离型的肌动蛋白单体，抑制它们的聚合，从而破坏肌动蛋白聚合与解聚的平衡，以均匀的速度降解肌动蛋白聚合体[7]。可见，Tβ10参与细胞骨架的形成，是潜在的肌动蛋白调节因子。加速肌动蛋白聚合体的解聚，或延迟肌动蛋白的聚合，都会增强细胞的运动性，而细胞的运动性是肿瘤转移的重要因素。细胞运动能力增强与肿瘤特性的演进具有相关性，浸润和转移是肿瘤最具危害性的特征。国外学者发现β族胸腺素在多种肿瘤组织和细胞中呈高表达，与肿瘤侵袭、转移及预后密切相关[2]。刘从容等[5]研究发现Tβ10蛋白表达与人肺癌、恶性黑色素瘤及乳腺癌转移潜能呈正相关。笔者通过对70例食管鳞癌组织中Tβ10的检测，发现其在转移肿瘤细胞中的表达85.37%明显高于非转移肿瘤细胞中62.07%。刘从容等[4]对不同转移潜能的肿瘤细胞进行Tβ10表达水平的研究，证实与无转移、低转移潜能的肿瘤相比，Tβ10蛋白在转移能力较高的肿瘤细胞表达量增加，这一现象为Tβ10对肿瘤转移具有促进作用提供了有力证据。

本研究表明，随着食管癌外侵深度增加，Tβ10阳性表达率增高。Tβ10在胞浆中通过与G-actin结合，防止后者自发聚合形成F-actin，使胞浆内具有充足的G-actin储备。当细胞运动时，需要胞浆皮质部位呈网状分布的F-actin协调而快速地解聚和组装，在某些机制的调节下，迅速释放G-actin，从而促进了微丝的组装过程，并因此可能会促进细胞的运动能力，并且可能与肿瘤的浸润能力具有相关性。

综上所述，Tβ10是一种新的肿瘤标志物，与食管癌恶性程度及转移密切相关。通过对受检组织中Tβ10的检测，对早期诊断肿瘤将有帮助。

[1]Low TL,Thurman GB,McAdoo M,et al.The chemistry and biology of thymosin.Lisolation characterization,and biologica activities of thymosi alphal and polypeptide beta l from calf thymus[J].J Biol Chem,1979,254（3）:981-986.

[2]Santelli G,Califano D,Chiappetta G,et al.Thymosin β10 gene overexpression is a general event in human carcinogenesis[J].Am J Pathol,1999,155(3):799-804.

[3]Sanders MC,Goldstein AL,Wang YL.Thymosin beta 4(Fx peptide)is a potent regulator of actin polymerization in living cells[J].Proc Natl Acad Sci USA,1992,89(10):4678-4682.

[4]刘从容，马春树，宁钧宇，等.不同转移潜能肿瘤细胞胸腺素β10表达水平及徽丝结构的差异性研究 [J].中华病理学杂志，2004,33(1):67-71.

[5]刘从容，杨京平，王玉平，等.胸腺素β10在人类乳腺癌中的表达[J].中国肿瘤临床，2004,31(9):481-484.

[6]Chiappetta G,Pentimalli F,Monaco M,et al.Thymosin β 10 gene expression as a possible tool in diagnosis of thyroid neoplasias[J].Oncol Rep,2004,12(2):239-243.

[7]Bao L,Loda M,Janmey PA,et al.Thymosin beta 15:a novel regulator of tumor cell motility upregulated in metastatic prostate cancer[J].Nat Med,1996,2(12):1322-1328.