血塞通注射液对人体血小板聚集调节作用的实验研究

李勤劳 陕西电子四零九医院(宝鸡 721006)

1 实验材料 1.1 人血浆及试剂 人空腹血浆、采自健康自愿者。加入盛有 3.28%枸橼酸钠溶液(抗凝剂)的塑料试管中,血浆与抗凝剂的比例为 9:1,轻轻混匀,离心(800rpm)5min,吸出上层米黄色悬液即为富血小板血浆(PRP)。然后再离心(3000 rpm)8min,吸取上清液,即得贫血小板血浆(PPP)。

1.2 药品和试剂 三七总皂甙制成每毫升含三七总皂甙 8.75mg[1]。用 0.2mol/L磷酸缓冲液稀释 2倍、20倍和 200倍,按下述方法加入比色杯,药物浓度即依次为 2mg/mL,0.2mg/mL、 0.02mg/mL。 5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP)[上海伯奥生物科技公司(进口分装)批号:091028],用 0.2mol/L磷酸缓冲液配成1mg/10mL的 ADP溶液。血塞通注射液,每支 10 mL,含三七总皂甙 250 mg(黑龙江省珍宝岛制药有限公司,批号:091208)。血管胶原的制备:处死家兔,分离胸、腹动脉血管,用蒸馏水冲洗干净,置于匀浆器中,反复研磨,加蒸馏水制成约 5%的血管匀浆,3000 rpm离心 10 min,吸取上清液,备用。

1.3 主要设备 TYXN-96多功能智能血液凝聚仪(上海海特医学设备有限公司制造)。

2 试验方法 取两只比色杯,分别加入贫血小板血浆(PPP)和富血小板血浆 (PRP)各 200 mL,置聚集仪中 37℃预热 5min,用 PPP杯校“0”,测定 PRP中的血小板数,然后用 PPP稀释 PRP,调整血小板数至30～40万 /mm3。 试验时,取两只比色杯,分别加入PPP、调整好血小板数的 PRP各 200 μL,在两只比色杯中同时加入供试药液 10 μL,在 PRP杯中放搅拌小棒 1只。置预热孔内预热 5min,用 PPP杯调聚集仪“0点后”,将 PPP杯放入聚集仪测定孔中,加入 1mg/10mL的 ADP磷酸缓冲液溶液或 5%的血管匀浆10mL,记录 5min的聚集曲线。以 1min聚集度(PAG1)、5min聚集度 (PAG5)、最大聚集度 (M A)和最大聚集时间(TM A)为指标,分别测定不同浓度的三七总皂甙对 ADP,血管胶原诱导人血小板聚集性的影响。药物浓度(mg/mL)以在测量杯中的浓度表示。对照组以磷酸缓冲液代替药液。

3 结果 试验所得数据用七值法进行显著性检验,比较各药物组与对照组的差异,结果见表 1,表 2。

表1结果表明:三七总皂甙(2mg/mL)能抑制ADP诱导的人血小板聚集,明显降低 PAG1、PAG5和MA,TM A明显缩短,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01)。最大聚集密度时间后,还有解聚现象。

表1 血塞通对 ADP诱导人血小板聚集性的影响

表2 血塞通对胶原诱导人血小板聚集性的影响

4 讨 论 本研究所用三七总皂甙是从三七(Panax.pseudo— ginseng Wall.var)的根中提取分离制得,据报道三七能明显增加冠状动脉血流量,使心肌耗氧量减少,又有降低动脉压及减慢心率的作用,使心脏工作量减低[2]三七总皂甙具有降低血小板血栓素A2[3]等药理作用,本实验证明,血塞通注射液能不同程度地抑制 ADP和血管胶原诱导的人血小板聚集,其抗血小板聚集作用与拮抗血小板活化因子(PAF)有关[4]。上述作用也是血塞通注射液在临床用于治疗中风偏瘫,淤血阻络动脉粥状硬化性血栓性脑梗塞、脑栓塞等的中药药理学基础。

[1]陈 奎.中药药理研究方法 [M].北京:人民卫生出版社,1993:581.

[2]江苏新医学院.中药大词典 [M].上册.上海人民出版社,1977:54.

[3]沈映君.中药药理学 [M].北京:人民卫生出版社,2000:598.