脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响

李卫萍 赵正保

山西医科大学药学院，山西太原 030001

通过体外培养RAW264.7细胞，加入脂多糖后通过MTT（噻唑蓝）法测定细胞存活率[1-4]，研究脂多糖对细胞的影响。MTT比色法[2-3]，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（formazan），并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光密度值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。本课题旨在通过MTT分析法探讨脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响。

12 资料与方法

1.1 一般资料

小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞株；受试药物：脂多糖；试剂：DMEM培养基（Hyclone公司）500mL装；胰蛋白酶-EDTA消化液 （solarbio公司）100mL装；无支原体胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）100mL装；青链霉素混合液（solarbio公司）100×；MTT（噻唑蓝）（solarbio 公司）1g 装；二甲基亚砜(DMSO)（购自天津市化学试剂一厂）500mL装。

1.2 仪器

立压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；101-1型电热鼓风干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司）；HF SuperPW系列超纯水系统（上海康雷分析仪器有限公司）；KDC-40型低速离心机 （长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有限公司）；311二氧化碳培养箱 （上海力申科学仪器有限公司）；BJ-2CD型洁净工作台（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；电热恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）；DMIL生物显微镜（德国徕卡公司）；ELX-800酶标仪 （美国宝特公司）；WD-9405B型水平摇床。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞培养 RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞）细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养，37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，2d换液1次。

1.3.2 MTT法检测细胞存活率 取对数生长期的RAW264.7细胞，调整细胞的密度，使细胞分布均匀，以每孔100μL接种于96孔板，分别设调零组、对照组和实验组，调零孔不加细胞。孔板的四周孔均加PBS缓冲液100μL。待细胞贴壁后，实验组加浓度为 0.5、1、2、5、10 μg/mLLPS，于 37℃、5﹪二氧化碳培养箱中培养24、48。对照组加入等量的药物溶解介质，每个药物浓度设5个复孔。培养时间结束后取出培养板，各孔均加入MTT20μL，于37℃、5%二氧化碳继续孵育4h；取出孔板，弃去上清液，每孔加入二甲基亚砜 （DMSO），置于水平摇床上低速震荡10min，全自动酶标仪在490nm处测定吸光度OD值。

按以下公式计算细胞抑制率：

4 结果（表1）

表1 LPS在不同给药时间与RAW264.7细胞抑制率

LPS 在 0.5、1、2、5、10 μg/mL 时，浓度依赖性地抑制RAW264.7细胞的生长。

3 讨论

MTT方法测定结果显示，LPS对RAW264.7细胞的抑制作用表现为随剂量的增加而抑制率增加，随着作用时间的延长而抑制率增加，这些充分说明LPS能够抑制RAW264.7的生长。

[1]王轶楠，柳忠辉，冯野，等.脂多糖诱导小鼠巨噬细胞系RAW264[J].7细胞的活化调亡作用,2009,2(22):436-438.

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[3]丁辉,钱家鸣.5-氨基水杨酸治疗溃疡性结肠炎的研究进展[J].中国医院用药评价与分析，2008,8(9):714-716.

[4]曲云东,林森.氨基水杨酸类药物治疗炎症性肠病的应用进展[J].世界临床药物，2008,29(12):727-730.