犬呼吸道致病菌药敏试验

张晓远

（北京农业职业学院，北京 房山 102442）

随着抗生素的广泛应用，引起犬呼吸道感染的致病细菌对常规抗生素耐药性逐渐增强。为了更好的指导临床用药，我们分别在2006年度（23例）和2009年度（30例）对部分患病犬进行咽部采集分泌物、细菌培养和药敏试验，以探求犬呼吸道致病菌的耐药性变化。

1 材料与方法

1.1 试验样本选择 样本犬均为北京市动物医院临床病例，且具有明显咳嗽、流涕（脓性或浆液性）、体温升高等临床症状，同时全血细胞计数检查表现为嗜中性粒细胞显著升高等感染血象，X线检查显示肺内渗出样影像。

1.2 培养基 一次性中国蓝琼脂培养基、一次性MH琼脂培养基、一次性血琼脂培养基、一次性麦康凯琼脂培养基，均购自天津金章科技发展有限公司（批号：2400002-7）。

1.3 药敏纸片 头孢拉定、氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、庆大霉素、阿米卡星、氨苄西林，均购自北京天坛药物生物技术开发公司（批号：12000053）。

1.4 咽部分泌物采集 使用一次性无菌棉拭子进行咽部深层（咽后壁）采样。棉拭子尽量避免口腔和舌黏膜。同时，采集鼻液进行革兰染色，大致观察所含细菌性质。

1.5 细菌培养 将取得的病料接种于普通营养肉汤，置37℃恒温箱培养24h。将菌液进行革兰染色，选择与痰液中性质相近的细菌，以无菌的棉棒沾取分别均匀涂布于中国蓝琼脂培养基、MH琼脂培养基、血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基平板上，倒置于37℃恒温箱培养1h。

1.6 药敏试验 采用纸片扩散法。待培养基表面干燥后，将药敏试纸贴于涂菌的表面，置37℃恒温箱培养18～24h。依抑菌圈的大小来判断细菌的敏感性。

1.7 判读标准 根据2004年美国临床实验室标准委员会（NCCLS）标准判读［1］。分别将细菌对药物的耐受程度分为敏感、中介和耐药3个层次。

2 结果

2.1 2006年度共有15例培养出革兰阳性菌、21例培养出革兰阴性菌，并进行药敏试验，其结果见表1、表2。

表1 2006年度咽拭子药敏试验结果-革兰阳性菌 （%）

表2 2006年度咽拭子药敏试验结果-革兰阴性菌 （%）

根据表中统计结果，我们发现：15例革兰阳性菌中50%以上对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、阿米卡星敏感；70%以上对氨苄西林、庆大霉素耐药；21例革兰阴性菌中50%以上对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、庆大霉素、阿米卡星均敏感。

2.2 2009年度共有17例培养出革兰阳性菌、29例培养出革兰阴性菌，并进行药敏试验，其结果见表3.、表4。

表3 2009年度咽拭子药敏试验结果-革兰阳性菌 （%）

上述结果说明，17例革兰阳性菌对7种试验用药耐药性达到50%以上，而29例革兰阴性菌对氧氟沙星耐药性为48.3%，对其他6种药物耐药性达到50%以上。

表4 2009年度咽拭子药敏试验结果-革兰阴性菌 （%）

3 讨论

3.1 在2个年度犬咽拭子细菌培养中，我们发现半数以上病例（13／23，16／30）同时培养革兰阳性致病菌和革兰阳性阴性菌，犬呼吸道的细菌感染多为混合感染。这可能与呼吸道生理环境、细菌的“二次感染”和耐药菌株的出现有关。

3.2 比较试验中，2006年度肺部感染犬咽拭子药敏试验结果，我们发现2009年度所分离细菌对同种药物的药物耐药率呈明显增高（P＜0.5）。分析其原因，与抗生素使用的指征不明确、不恰当的多种抗生素联用、抗生素使用周期过长等有关。抗生素的不合理使用，可诱导新的耐药株产生［2］，从而使细菌耐药率呈逐年升高。

3.3 药敏试验后抗菌药物的合理选择，是提高抗感染效果的关键步骤之一。在兽医临床实践过程中，药敏试验通常在日常治疗无效时进行，绝大多数医师会根据药敏试验结果进行药物调整。然而，张骞峰等人［3］曾在人医中研究发现，药敏试验后临床上进行抗菌药物调整和未做调整的比例近似。这可能与人医临床药敏试验多在治疗初期进行有关。同时，也提示我们细菌的培养结果可能与临床表现不符。

3.4 纸片法药敏试验是指导临床合理用药的有效方法，可以避免盲目用药，减少不必要的损失。但药敏试验是定性试验，同时会受到多种因素的影响，从而使其结果不能准确反应药物的真实敏感程度［4］。因此充分了解纸片法药敏试验的各种影响因素，熟练操作技能，对提高药敏试验的准确性有很大的意义。

尽快明确致病原，并采取有针对性的治疗措施，是治疗细菌感染性疾病的关键。因而，病原微生物的分离培养和药敏试验是非常重要的实验室方法，是选择合适治疗策略的科学依据。

［1］许宏涛，张秀珍.2004年美国临床实验室标准化委员会药敏试验判断标准［J］.中国临床药理学杂志，2005，21（4）：318-320.

［2］沈磊磊，虞耀土，张忠杰，等.细菌分离培养和药敏试验对兽医临床用药的指导意义［J］.浙江畜牧兽医，2008（2）：30-31.

［3］张骞峰，孙增先，孙晓，等.药敏试验后抗菌药物的选择分析［J］.抗感染药学，2009，6（1）：40-42.

［4］雷变兰，周玉武.分析药敏试验影响因素指导临床用药［J］.山西农业，2006（23）：14-15.