大黄水提物对雌性大鼠血清E2、LH和FSH水平的影响*

卢 宁，佟继铭，张树峰

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎[1]。大黄药用历史悠久，始载于《神农本草经》，是中药组方中应用范围最大、使用频率最高的几种重要中药之一，已作为一种世界性药物载入19个国家的药典中[2]。大黄的化学成分主要有蒽醌类、二蒽酮类、苯丁酮苷类、二苯乙烯苷类、鞣质类、多糖类等，具有明显的泻下、解热和抗炎作用[3-4]。现代研究表明，大黄具有抗菌、抗病毒、延缓衰老等作用[5]。据统计，约有800多种中药制剂中含有大黄，一般认为大黄毒性较低，临床应用比较安全，大多数降脂减肥、排毒养颜类中成药中也含有大黄，以致应用大黄的时间过长，导致大黄相关的不良反应发生率增高[6]。本课题组前期研究探讨了大黄对雌性大鼠生殖系统的影响，结果发现长期使用大黄可导致大鼠卵巢指数降低，卵巢内各级卵泡数量减少、闭锁卵泡数增多，卵泡内细胞排列紊乱;大鼠子宫指数降低，内膜腺体数量减少、腺腔不规则，肌纤维稀疏。说明长期使用大黄对卵巢、子宫的组织结构均有一定的损伤，且随用药时间延长逐渐加重。本研究旨在探讨长期使用大黄对雌性大鼠血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平的影响，为客观评价大黄的毒性及临床合理用药提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 大黄(Rheum palmatum L)，安国市长安中药材有限公司，批号:20090902，经承德医学院中药研究所刘翠哲研究员鉴定为掌叶大黄的干燥根茎;大鼠E2(批号:DRE20048)、LH(批号:DRE20139)、FSH(批号:DR E20049) ELISA 试剂盒，上海索宝。Multiskan MK3酶标仪，美国Thermo。

1.2 大黄水提取物的制备 大黄药材粉碎为粗粉，10倍水浸泡两次，合并提取液、过滤，40℃浓缩至生药量含量为0.4g/ml备用。

1.3 实验动物分组及处理 8周龄雌性Wistar大鼠9只，体重180-220g，SPF级，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号:SCXK(京)2009-0008。大鼠随机分组，每组10只:正常对照组，大黄水提取物1.0g/kg和2.0g/kg剂量组;大黄各剂量组再分为用药30、40、50 60d组，分别灌胃给予不同剂量的大黄水提物30d、40d 50d和60d。

1.4 指标检测 各组大鼠于给药结束后第2d腹主动脉采血，3500r/min离心10min取血清，-20℃冰箱保存，采用ELISA法检测大鼠血清E2、LH和FSH的水平。

1.5 统计分析 使用SPSS 17.0统计软件分析数据，结果以(±s)表示，行t检验、方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

与正常对照组比较，各给药组大鼠血清E2水平降低LH、FSH水平升高;大黄给药剂量为2.0g/kg时，给药50d、60d的大鼠血清E2水平明显低于正常对照组，LH FSH水平明显高于正常对照组(P＜0.01，P＜0.05)。不同作用时间比较:大黄1.0g/kg剂量组，与给药30d比较给药60d的大鼠血清E2水平明显降低、LH和FSH水平明显升高(P＜0.05);大黄2.0g/kg剂量组，与给药30d 40d比较，给药50d、60d的大鼠血清E2水平明显降低、LH和FSH水平明显升高(P＜0.05)。不同给药剂量、相同给药时间比较:与1.0g/kg剂量组同时间点比较，2.0g/kg剂量组给药给药50d、60d的大鼠血清E2水平明显降低、LH和FSH水平明显升高(P＜0.05)。见附表。

附表 大黄对雌性大鼠血清E2、LH和FSH水平的影响( ±s，n=10)

附表 大黄对雌性大鼠血清E2、LH和FSH水平的影响( ±s，n=10)

与正常对照组比较:aP＜0.01，bP＜0.05;与同剂量30d比较:cP＜0.05，与同剂量40d比较:dP＜0.05;与1.0g/kg组同时间点比较:eP＜0.05

组别 给药时间(d) E2(ng/L) LH(ng/L) FSH(IU/L)正常对照组 -- 49.88±6.64 1363.60±250.5 5.75±0.95 30 47.8.±5.60 1364.90±200.6 5.75±1.35大黄 40 47.35±5.70 1367.3±208.9 5.75±1.2(1.0g/kg) 50 46.95±5.95 1376.20±226.1 5.85±1.15 60 46.31±8.66c 1399.05±205.1c 5.95±1.05c 30 46.61±5.89 1368.05±211.8 5.95±1.01大黄 40 44.66±8.97 1512.81±230.5 6.20±1.45(2.0g/kg) 50 37.35±5.94acde 1630.55±245.35bcde 6.65±0.75bcde 60 35.90±4.53acde 1646.41±163.8bcde 7.10±1.10bcde

3 讨论

黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)是脑垂体前叶分泌的糖蛋白激素，能促进卵泡成熟[7];FSH在卵泡期刺激卵泡发育并调控E2及其它雌性激素的产生，与黄体生成素(LH)协同作用导致排卵[8]。随着年龄增长绝经期的到来，卵巢功能降低，雌激素分泌减少，对LH和FSH的反馈抑制作用减弱，导致血中FSH、LH水平升高[9]。基础FSH值是衡量卵巢储备功能常用的指标，但临床上常发现，年轻不孕妇女(年龄＜35岁)或基础FSH值正常者，也存在卵巢低反应现象[10-11]。

本研究结果显示，长期使用大黄可使成年雌性大鼠血清E2水平降低，LH、FSH水平升高，其中大剂量(2.0g/kg)给药50d、60d组变化最为明显，与正常对照组比较差异具有统计学意义。可见，E2、LH、FSH水平的改变与大鼠卵巢损伤具有一定的联系。如果卵巢发育不良或早衰，卵巢本身出现排卵异常或不排卵，分泌的雌激素水平会比较低，从而刺激机体分泌更多的LH和FSH。但由于卵巢功能不良，FSH水平再高卵泡也不能发育，从而导致雌激素水平的进一步降低。

本研究中E2、LH和FSH水平的改变可充分证明，长期使用大黄可影响雌性大鼠的性激素水平，本研究可为临床合理用药提供一定的实验依据。

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