HPLC法测定苯磺酸氨氯地平分散片有关物质

★ 梁芬 刘旭海 王燕霞 李露爽 (.江西中医学院 南昌330004;.江中药业股份有限公司 南昌330077)

苯磺酸氨氯地平(amLodipine besylate)为第三代双氢吡啶类钙拮抗药，具有服药量低、药效维持时间长、不良反应少、保护靶器官等优点，是理想的长效降压药，用于治疗各种高血压和稳定型心绞痛。苯磺酸氨氯地平片、马来酸氨氯地平片、苯磺酸左旋氨氯地平及片剂等，国家药品标准均采用反相高效液相色谱法［1－4］测定含量且均以ODS为色谱柱，流动相均为甲醇与0.03mol/L磷酸二氢钾溶液按相同比例配成。其分散片剂的质量标准中无有关物质检查项，国内市场并无已知杂质对照品，故给用已知杂质来评价有关物质检查带来一定困难。本文考查不通实验条件苯磺酸氨氯地平分散片有关物质方法建立，实验结果表明，利用主成份不加校正因子测定其有关物质，该方法结果准确，专属性强，灵敏度高，可为苯磺酸氨氯地平有关物质检查提供一定依据。

1 仪器及试药

Agilent1200高效液相色谱仪(DAD检测器);色谱柱:Diamonsil C18(250mm ×4.6mm，5μm);苯磺酸氨氯地平对照品(中国药品生物制品检定所提供);苯磺酸氨氯地平分散片5 mg/片(南通久和药业有限公司);自动三重蒸馏水器(上海亚荣生化仪器有限公司);KQ－500B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂出品);乙腈、甲醇色谱纯(上海星可生化有限公司);磷酸二氢钾分析纯(天津市永达化学试剂开发中心)。

2 方法及结果

2.1 对照品及供试品溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取苯磺酸氨氯地平对照品17mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取苯磺酸氨氯地平分散片10片，研细，精密称取适量(相当于氨氯地平5mg)，置200mL量瓶中，加水20mL使溶解，加流动相约160mL，超声处理30分钟，取出，放冷至室温，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液备用，即得。

2.2 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18(250mm ×4.6mm，5μm);以0.03mol/mL磷酸酸二氢钾溶液－乙腈－甲醇(25∶45∶30)为流动相，检测波长237 nm，流速1.0 mL/分，柱温 30℃;进样量 20μl。

2.3 方法专属性

取苯磺酸氨氯地平对照品溶液(34.1 μg/mL)100 mL分别置25 mL量瓶中，进行如下处理:(1)酸破坏试验:加入5mL 1mol/L盐酸溶液超声10分钟;(2)碱破坏试验:加入1mL 1mol/L氢氧化钠溶液超声10分钟;(3)氧化破坏试验:加入1mL 30%过氧化氢溶液继续超声10分钟;(4)热破坏试验:于60℃烘箱中放置3小时;(5)光破坏:于Lux5000的光照箱中放置12小时，然后用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液按照有关物质测定项下方法测定，记录色谱图，结果表明，苯磺酸氨氯地平与各降解产物均能有效分离。

2.4 精密度试验

取上述对照品溶液及供试品溶液，在同一天分别重复进样8次，测定其峰面积，计算其RSD值分别为 1.3%和 1.5%。

2.5 稳定性试验

分别取对照品溶液及供试品溶液，置室温下，分别于 0，2，4，8，12，24 小时进样，结果主峰面积变化不大，RSD值分别为1.5%和1.8%，表明对照品溶液及供试品溶液在室温条件下放置24小时是稳定的。

2.6 线性范围

取苯磺酸氨氯地平对照品适量，精密称定后加甲醇制成 3.13，6.25，12.5，25.0，50.0，100.0μg/mL浓度的溶液，分别精密量取20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。用峰面积(Y)对浓度(X)作回归直线，得方程:Y=27.599 68X+8.084 55，r=0.999 9，因此，浓度在 3.13－100μg/mL 之间有良好的线性关系。

2.7 检测限

取苯磺酸氨氯地平对照品溶液(34.1μg/mL)用流动相逐步稀释至样品溶液中主峰的响应值约为噪音水平的3倍，记录色谱图，得出检测限为1.8ng。

2.8 有关物质测定

取三批苯磺酸氨氯地平分散片各10片，分别置100mL容量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液;精密量取供试品溶液(34.1μg/mL)1mL，置25mL容量瓶中加流动相稀释至刻度，作为对照溶液。再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%－25%。记录色谱图至主成分峰保留时间3倍。供试品溶液中除溶剂苯磺酸和氨氯地平峰外如显杂质峰，按不加较正因子的主成分自身对照法以峰面积计算有关物质的量，结果见表2。

表2 三批样品的有关物质结果(n=3)

3 讨论

本文在参考2010版《中国药典》及《化学药物杂质研究的技术指导原则》苯磺酸氨氯地平片有关物质测定，三批分散片有关物质测定结果表明其有关物质总量均低于0.5%，符合药典规定

本文考查了不同实验条件苯磺酸氨氯地平有关物质的色谱行为，并用自身对照法进行比较，杂质与主峰均能分开，试验结果表明改方法专属性强、灵敏度高、结果准确。