健脾益肺口服液对慢阻肺“肺脾气虚证”大鼠脾脏指数和胸腺指数的影响

何 嘉，郭建辉，梁 栋，史肃育

（南京市中医院呼吸科，江苏 南京 210001）

健脾益肺口服液对慢阻肺“肺脾气虚证”大鼠脾脏指数和胸腺指数的影响

何 嘉，郭建辉，梁 栋，史肃育

（南京市中医院呼吸科，江苏 南京 210001）

目的 观察健脾益肺口服液对慢阻肺“肺脾气虚证”大鼠脾脏指数、胸腺指数的影响。方法将65只SD成年雄性大鼠随机分为6组，分别为空白组，健脾益肺口服液高、中、低剂量组，模型组，地塞米松组。用香烟熏吸和脂多糖（LPS）复制慢阻肺“肺气虚”模型；接着用大黄液灌胃，复制“脾气虚证”；造模共为28 d，在造模开始14 d开始给药，28 d麻醉后取血处死后剥离大鼠脾脏及胸腺，计算脾脏指数、胸腺指数。结果(1)模型组大鼠体重、脾脏指数、胸腺指数低于空白组(P＜0.05或P＜0.01)；(2)健脾益肺口服液各治疗组大鼠体重、脾指数、胸腺指数显著增加，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，其中高剂量组与模型组比较，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；(3)高、中、低剂量三组组间大鼠体重、脾脏指数、胸腺指数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论健脾益肺口服液可提升慢阻肺大鼠体重，而脾脏指数、胸腺指数相应提高，从而使机体免疫力得到提高，机体防病抗病力得到加强。

健脾益肺口服液；慢性阻塞性肺疾病；肺脾气虚证；脾脏指数；胸腺指数

慢性阻塞性肺病(Chronic obstructive pulmonary diseases，COPD)简称为“慢阻肺”，因其病程长，反复发作，长期慢性消耗，多伴有机体免疫功能的紊乱。同时，慢阻肺患者反复急性发作常常需要使用抗菌素、激素等，而使机体免疫力进一步下降，久之形成恶性循环。为此，国内外诸多学者对慢阻肺患者机体免疫功能状态进行了研究，而脾指数和胸腺指数的变化直接反映了机体免疫功能状态。本实验2012年1月至2013年12月观察慢阻肺大鼠体内免疫功能状态，并观察健脾益肺口服液对其脾指数和胸腺指数的影响，以期为临床治疗慢阻肺提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD成年雄性大鼠65只，购自江宁青龙山动物饲养中心，大鼠体重198～260 g，平均231 g，分笼饲养，每天自由进水，进食颗粒饲料。保持动物饲养室一定的照明、噪音、温度、湿度等，每天清洁饲养房及更换饮用水。饲养2 d后开始造模。

1.2 实验药物 受试药物：健脾益肺口服液是南京市中医院自制制剂(批准文号 苏药制字Z04000839，其组成：党参9 g、茯苓10 g、黄精10 g、白术9 g、山药10 g、黄芪15 g、防风3 g、扁豆10 g、鸡内金9 g、陈皮6 g、丹参15 g)；阳性药：地塞米松(Dexamethasone，DM)(国药准字H12020686)，0.75 mg/片；天津天药药业公司；造模药物：大黄。

1.3 仪器、试剂 (1)主要仪器：手术剪、镊子等(南京中医药大学一临动物实验中心)；电子天平(上海良平仪器公司)；(2)主要试剂：脂多糖(Sigma公司)：生产批号为20120115；大前门香烟：上海烟草公司，其焦油含量为23 mg，烟气烟碱量为1.5 mg。

1.4 实验方法

1.4.1 “肺脾气虚证”动物模型的复制 将65只大鼠分为空白组，健脾益肺口服液高、中、低剂量组，阳性药对照组，模型组。采用香烟烟熏+脂多糖气管内滴注法[1-2]建立慢阻肺模型(除空白组)：在造模开始的第1天、第14天用10%水合氯醛(按每100 g体重大鼠0.3 mg计算)进行腹腔麻醉，充分暴露大鼠喉头，用静脉套管行气管插管，用1 ml注射器抽取脂多糖0.2 ml，滴入气管内，结束后马上直立旋转10～20 s。第2～13天、第15～28天，在自制的有机玻璃密闭箱(带通气孔，直径为1.2 cm)吸入香烟烟雾1 h/d，熏烟20支/d，造模共28 d。然后在张伟等[3]用“二次方法”复制慢阻肺“脾气虚证”模型方法上加以改良：造模开始后第7天以大黄混悬液(1 ml/g)灌胃，2 ml/d，共8 d，复制慢阻肺“脾气虚”模型。

1.4.2 给药方法 健脾益肺口服液组：药物剂量按成人30 ml/60 kg计算，常规剂量组为每日每公斤体重3 ml，故低剂量组1 ml/(kg·d)，高剂量组为9 ml/(kg·d)。实验中所饲养大鼠体重每只一般不超过300 g，故高剂量组不超过3 ml/只，不足3 ml的均加蒸馏水至3 ml灌胃。造模开始的第15天开始灌药，每天一次，灌药14 d结束。测指标；空白组、模型组：用生理盐水3 ml灌胃；阳性药对照组：用地塞米松灌胃，剂量按成人常规6.75 mg/d，并按照大鼠体表面积与人体体表面积的换算公式进行换算(陈奇版《中药药理研究方法学》)，给药量=6.75 mg×0.026×5，即每天每只大鼠约0.88 mg，10只为8.8 mg，将药片溶于30 ml蒸馏水中，每日每只灌服3 ml。

1.4.3 取材及测定 每只大鼠造模结束后用精密电子天平称取其体重，然后以0.3 mg/100 g水合氯醛对大鼠进行腹腔麻醉，充分麻醉取血后剥离大鼠脾脏和胸腺，称重并记录。脾脏指数、胸腺指数的计算：脾脏(或胸腺)指数(g/100 g)=100×脾脏(或胸腺)重量/体重。

1.5 统计学方法 所有数据采用SPSS11.0统计软件进行统计。计量数据以均数±标准差(±s)表示，经方差齐性检验后，采用One-Way ANOVA和One-Sample Test来分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

单纯造模组大鼠体重、脾指数、胸腺指数低于空白组，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；健脾益肺口服液各治疗组大鼠体重、脾脏指数、胸腺指数上升明显，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，尤其是高剂量组与模型组比较差异有显著统计学意义(P＜0.01)；健脾益肺口服液高、中、低剂量治疗组组间大鼠体重、脾脏指数、胸腺指数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 各组大鼠体重、胸腺指数及脾脏指数比较(±s)

表1 各组大鼠体重、胸腺指数及脾脏指数比较(±s)

注：a表示与模型组比较，P＜0.05；b表示与模型组比较，P＜0.01；c表示与空白组比较，P＜0.05，；d表示与空白组比较，P＜0.01。

组别空白组(n=10)低剂量组(n=11)中剂量组(n=11)高剂量组(n=11)阳性药组(n=11)模型组(n=11)体重(g) 272.60±58.88 267.18±41.60a267.55±51.90a229.36±34.35b224.82±14.37 229.45±24.80c脾脏指数(g/100 g) 2.102±0.713 1.995±0.749a2.001±0.457a2.294±0.919b1.237±0.502 1.367±0.714c胸腺指数(g/100 g) 1.657±0.636 1.419±0.799a1.376±0.353a1.383±0.604b0.602±0.192 0.600±0.202d

3 讨 论

脾脏和胸腺是人体非常重要的免疫器官，机体的免疫功能直接与脾脏和胸腺的结构功能相关。脾脏是最大的外周免疫器官，是B淋巴细胞成熟发育的场所，在抗原刺激下产生免疫应答。胸腺是机体的中枢免疫器官，胸腺在人出生时就已完全发育，随年龄的增长逐渐增大，青春期达到最大，以后胸腺就开始逐渐萎缩变小。胸腺是T淋巴细胞成熟发育的场所。故如果脾脏、胸腺的功能下降或结构衰退就会影响免疫功能，导致免疫功能紊乱，出现免疫功能亢进或下降，导致疾病发生或发展。人体的脾指数和胸腺指数直接与体质量成正比，是反映脾脏、胸腺免疫功能的重要指标[4]。脾指数和胸腺指数的变化直接反映了机体免疫功能状态。

慢阻肺患者有不同程度的免疫功能紊乱，而其免疫功能紊乱与肺、脾两脏密切相关。“正气存内、邪不可干”，慢阻肺的发生，而且由于病程长，存在不同程度的“虚”，慢阻肺的“虚”首先是肺虚，渐而脾虚、肾虚，免疫功能逐渐低下，因此肺虚、脾虚尚处于早期阶段，若此时进行干预，就能提高其免疫功能，阻止慢阻肺进展。中医学的“脾”蕴涵着丰富的免疫学内容。有研究[5]发现，中医“脾”的概念与免疫功能密切相关。“脾虚证”与免疫器官、免疫细胞、免疫功能及免疫遗传学等的异常呈显著相关[6]，因此健脾就能提高免疫器官如脾脏的免疫功能。本实验中大鼠在烟雾与内毒素脂多糖作用下，大鼠的气道和肺实质出现慢性炎性病变，气道狭窄、气流阻力增加，肺功能下降，慢阻肺发生，同时出现如神倦、体弱、咳嗽、气短、纳少、便溏等肺脾两虚证的表现。本研究发现慢阻肺“肺脾气虚证”模型组大鼠的体重、脾脏指数、胸腺指数显著低于空白组(P＜0.05或P＜0.01)，由此得出结论：在慢阻肺缓解期，机体体重、脾脏指数、胸腺指数是低下的。

健脾益肺口服液临床使用多年，方中诸药如党参、白术、茯苓、山药等有补益肺脾之气之功，全方通过补益肺脾，达到提高机体免疫力的目的。前期我们用健脾益肺口服液治疗36例慢阻肺缓解期患者，疗效显著，显示其有消除机体痰浊、健中洲以溉四旁及调节机体免疫的功能[7]。本研究观察健脾益肺口服液对慢阻肺“肺脾气虚证”大鼠脾脏指数和胸腺指数的影响，发现健脾益肺口服液能显著改善大鼠咳嗽、气喘等及肺气虚、脾气虚症状，且其各治疗组大鼠体重、脾脏指数、胸腺指数上升明显，与模型组比较，P＜0.05，说明健脾益肺口服液能明显提高大鼠体重、脾指数、胸腺指数。同时显示健脾益肺口服液随着剂量的增加，疗效有所增加，但高、中、低剂量组三组组间比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，说明健脾益肺口服液药物剂量与改善脾脏指数、胸腺指数无显著相关性。

本研究显示健脾益肺口服液能增加脾脏、胸腺重量，提高大鼠体重，可提升大鼠脾脏指数和胸腺指数，而脾指数和胸腺指数是反映机体免疫功能的重要指标，说明健脾益肺口服液有提高COPD免疫功能的作用，证实本方不尽能显著减轻COPD肺气虚、脾气虚及咳嗽、气喘等的症状，而且还能有效地控制该病因呼吸道感染等而导致的复发和加重，同时还能有效的提高机体免疫功能、控制COPD疾病进展，体现了表里同治、扶正驱邪的原则，达到了“正气存内，邪不可干”的目的。

[1]Cai C,Zhang H,Le JJ.et al.Inflammatory airway features and hypothalamic-pituitary-adrenal axis function in asthmatic rats combined with chronic obstructive pulmonary disease[J].Chin Med J,2010, 123(13):1720-1726.

[2]顾延会,欧阳瑶.烟熏联合脂多糖制备大鼠慢性阻塞性肺疾病动物模型[J].重庆医学,2012,41(13):1295-1296.

[3]张 伟,宫 静,张靖轩,等.一种肺脾两虚证慢阻肺动物模型的建立[J].辽宁中医杂志,2009,36(1):142-143.

[4]刘 茜,刘向国,武 松.肺气肿肺气虚证模型大鼠脾脏指数、胸腺指数变化的实验研究[J].甘肃中医学院学报,2006,23(1): 20-22.

[5]曾庆祥,衷诚伟.异功散及其加味方对小儿脾虚证患者临床疗效及免疫功能的影响[J].中医杂志,2003,44(3):197-198.

[6]修宗昌,余绍源,黄穗平.脾虚免疫学机制[J].中国中医药信息杂志,2003,10(4):10-13.

[7]郭建辉.健脾益肺口服液治疗明显阻塞性肺病18例总结[J].湖南中医杂志,2010,66(6):4-6.

Influence of spleen-strengthening and lung-tonifying liquid on spleen index and thymus index of COPD inrats with Lung and spleen qi deficiency syndrome.

HE Jia,GUO Jian-hui,LIANG Dong,SHI Su-yu.Department of Respiratory Medicine,Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210001,Jiangsu,CHINA.

Objective To observe the effect of spleen-strengthening and lung-tonifying liquid on thymus index and spleen index of COPD in rats with lung-spleen qi deficiency syndrome.MethodsSixty-five adult SD male rats were randomly divided into six groups,normal control group,3 spleen-strengthening and lung-tonifying liquid groups with small,middle or large dosage separately,model group and dexamethasone control group.Rats was treated with smoke and LPS,and followed by rhubarb liquid through gavaging,to generate model of lung-qi deficiency.Model-making lasted for 28 days.Rats were given medicine on day 14 of model-making.28 days later,blood was taken after anesthesia,and then the spleen index and thymus index was calculated after the spleen and thymus were peeled from rats.Results(1)The weight,spleen index and thymus index of model group were significantly lower than those of normal control group(P＜0.05 or P＜0.01).(2)The weight,thymus index and spleen index in all spleen-strengthening and lung-tonifying liquid groups increased，especially the large dose group,which were higher than those in the normal control group(P＜0.05 or P＜0.01).(3)There were no striking changes in thymus index and spleen index in large dose,middle dose and small dose treatment groups(P＞0.05).ConclusionSpleen-strengthening and lung-tonifying liquid can increase body weight,spleen index and thymus index of the rats with COPD,and then improve body immunity and disease resistance.

Spleen-strengthening and lung-supplementing liquids;Chronic obstructive pulmonary disease (COPD);Lung-spleen qi deficiency syndrome;Spleen index;Thymus index

R-332

A

1003—6350（2014）10—1412—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.10.0546

2013-11-06)

南京市卫生局课题（编号：YKK11042）

郭建辉。E-mail:781835470@qq.com