柿叶总黄酮缓释微丸累积释药率的测定

王 兰， 顾 欣，龚 频， 赵 麟， 虢红梅

(1.陕西科技大学 生命科学与工程学院， 陕西 西安 710021； 2.陕西新药技术开发中心， 陕西 西安 710075)

0 引言

柿叶为柿树科柿树属(Diospyros)植物柿(Diospyroskaki L.f.)的新鲜或干燥叶.其主要有效成分为叶中的总黄酮，具有抗菌消炎、生津止渴、清热解毒、润肺强心、镇咳止血、防癌抗癌等作用[1-3].目前市售的主要是以柿叶总黄酮为原料制成的传统剂型如片剂，给药次数多，患者使用不便，因此研究开发其新的缓/控释制剂具有广阔的应用前景.

作者实验室研制了柿叶总黄酮缓释微丸，有关柿叶总黄酮缓释微丸的制备工艺研究另文报道.本文采用紫外-可见分光光度法测定了柿叶总黄酮缓释微丸的体外累积释药率，并考察其释药性能，为进一步开发柿叶总黄酮缓/控释制剂奠定基础.

1 试剂与仪器

(1)试剂：柿叶总黄酮缓释微丸(自制，批号： 20111223)；芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100080-201007，含量测定用)；氢氧化钠(西安化学试剂厂)；无水乙醇(西安化学试剂厂)；亚硝酸钠(北京化学试剂厂)；硝酸铝(上海新中化学厂).

(2)仪器：ZRS-8G智能溶出仪(天津大学无线电厂)BS224S型电子天平(北京利多斯仪器系统有限公司)；SP-752(PC)型紫外-可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司).

2 累积释药率测定方法建立

2.1 波长选择

(1)芦丁对照品人工胃液的制备：精密称取芦丁对照品14.8 mg置于100 mL的容量瓶中，用适量人工胃液溶解后定容至刻度，摇匀，既得.

(2)芦丁对照品磷酸盐缓冲液的制备：精密称取芦丁对照品23.4 mg置于100 mL的容量瓶中，用适量的磷酸盐缓冲液(pH=6.8)溶解后定容至刻度，摇匀，既得.

(a)人工胃液

将上述溶液分别在400～600 nm波长范围内扫描，结果表明，芦丁对照品在人工胃液和磷酸盐缓冲液中的最大吸收波长均在510 nm，因此选定510 nm为测定波长,如图1所示.

(b)磷酸盐缓冲液(pH=6.8)图1 芦丁对照品的紫外-可见扫描图

2.2 标准曲线的绘制

(1)人工胃液下标准曲线的绘制：分别精密移取芦丁对照品人工胃液0、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL于25 mL的容量瓶中，加蒸馏水6 mL，加入5% NaNO2溶液1 mL，摇匀，放置6 min.再加入10% Al(NO3)3溶液1 mL，摇匀，再放置6 min.最后加入1 mol/L NaOH溶液10 mL，摇匀，加蒸馏水至刻度，摇匀，静置15 min后在510 nm处测定吸光度A.

(2)磷酸盐缓冲液下标准曲线的绘制：分别精密移取芦丁对照品磷酸盐缓冲液0、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL于25 mL的容量瓶中，加蒸馏水6 mL，加入5% NaNO2溶液1 mL，摇匀，放置6 min.再加入10% Al(NO3)3溶液1 mL，摇匀，再放置6 min.最后加入1 mol/L NaOH溶液10 mL，摇匀，加蒸馏水至刻度，摇匀，静置15 min后在510 nm处测定吸光度A.

以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标.分别以A对C做图，结果显示：在人工胃液条件下得回归方程为：A=9.826 3C-0.014 6 (R2=0.999 4)，并且在5～40μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系；在磷酸盐缓冲液条件下得回归方程为：A=11.313C-0.012 9 (R2=0.999 8)，并且在10～60μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系.

2.3 精密度实验

分别配制芦丁对照品人工胃液和芦丁对照品磷酸盐缓冲液，于510 nm处测其吸光度，平行测定7次，结果如表1、表2所示.

表1 人工胃液条件下精密度实验结果

表2 磷酸盐缓冲液条件下精密度实验结果

由表可知，RSD(%)值均符合药典要求，说明此方法精密度良好.

2.4 稳定性实验

分别配制高、中、低3个浓度的芦丁对照品人工胃液和芦丁对照品磷酸盐缓冲液，分别于0、50 s、100 s、150 s、200 s、250 s、300 s时测定其吸收度.结果如表3、表4所示.

表3 人工胃液条件下稳定性实验结果

表4 磷酸盐缓冲液条件下稳定性实验结果

由表3和表4可得，在人工胃液和磷酸盐缓冲液条件下其平均RSD分别为0.77%和0.29%(n=7)，表明稳定性良好.

2.5 回收率实验

取已知含量的样品适量，分别加入芦丁对照品人工胃液和芦丁对照品磷酸盐缓冲液(高、中、低3个浓度)，结果，在人工胃液条件下其平均回收率为100.55%(RSD=2.71%)，在磷酸盐缓冲液条件下其平均回收率为100.95%(RSD=1.94%),表明回收率良好.结果如表5、表6所示.

表5 人工胃液条件下回收率实验结果

表6 磷酸盐缓冲液条件下回收率实验结果

3 累积释药率的测定[4-9]

按照《中国药典》(2010版二部)附录中释放度测定法项下的方法操作，以柿叶总黄酮(以芦丁计)的累积释药率为评价指标，将制备的柿叶总黄酮缓释微丸分别在人工胃液和磷酸盐缓冲液中于0.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h在510 nm处测定吸收度，以累积释药率对时间作图，结果如图2所示.在《中国药典》(2010版第二部) 附录中微囊、微球与脂质体制剂指导原则中规定在开始的0.5小时内的释放量要求低于40%.

图2 柿叶总黄酮缓释微丸的 体外累积释药曲线

由图2所知，人工胃液和磷酸盐缓冲液在开始0.5小时内的释放量分别为22.97%和34.93%，均未发生突释效应.柿叶总黄酮缓释微丸在磷酸盐缓冲液中12小时的累积释药率为83.22%，在人工胃液中12小时的累积释药率为55.42%.

4 释药模型拟合[10-15]

柿叶总黄酮缓释微丸分别在人工胃液和磷酸盐缓冲液中，以零级释药模型、一级释药模型和Higuchi释药模型进行拟合，结果如表7和表8所示.

表7 人工胃液条件下释药模型拟合结果

由表7可以看出，以磷酸盐缓冲液为释药介质，用Higuchi方程拟合时R2值最大，因此认为柿叶总黄酮缓释微丸在磷酸盐缓冲液中的释药模型也符合Higuchi方程.

表8 磷酸盐缓冲液条件下释药模型拟合结果

由表8可以看出，以磷酸盐缓冲液为释药介质，用Higuchi方程拟合时R2值最大，因此认为柿叶总黄酮缓释微丸在磷酸盐缓冲液中的释药模型也符合Higuchi方程.

5 结束语

本实验采用紫外-可见分光光度法测定了柿叶总黄酮缓释微丸在磷酸盐缓冲液和人工胃液中的累积释药率，结果表明缓释微丸在磷酸盐缓冲液(pH=6.8)中无突释效应，并且12小时的累积释药率达83.22%，符合《中国药典》(2010版第二部) 的要求，释药模型符合Higuchi方程.缓释微丸在人工胃液中同样无突释效应，但是12小时的累积释药率仅为55.42%，释药模型符合Higuchi方程.相较于人工胃液，柿叶总黄酮缓释微丸在磷酸盐缓冲液中具有良好的释药性能.这也提示研究者们可以在缓释材料和制备技术等方面继续探讨以改善柿叶总黄酮缓释微丸在人工胃液中的释药性能，制备出具有更好释药性能的柿叶总黄酮缓/控释制剂.

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