自身抗体检测在自身免疫性疾病中的价值

覃仕锋 李春美 (湖北民族学院附属民大医院检验科，恩施 445000)

AID(自身免疫性疾病)的发病机制为机体自身发生免疫应答及免疫功能发生紊乱而引发多器官系统受损的一种疾病［1］。当前主要依据患者的临床表现以及实验检测的结果来诊断AID，由自身标志性抗体或高效价特异性确定［2］。临床上的自身抗体比较常见的为ENA(抗可提取性核抗原抗体)、ANA(抗核抗体)和抗ds-DNA 抗体(双链DNA 抗体)，检测相对方便，此也是AID 的三个重要的标志物［3］。本研究旨在通过对AID 患者中ENA、ANA、抗ds-DNA 的检测，探讨ENA、ANA、抗ds-DNA 抗体在AID 患者中的相关性及敏感性。

1 资料与方法

1.1 研究对象 分析2013 年2 月至2014 年4 月在我院接受治疗的180 例AID 患者的临床资料，其中男性患者67 例，女性患者113 例。收集所有患者的血清，包括25 例混合结缔组织病患者、30 例结缔组织病患者、75 例SLE(系统性红斑狼疮)患者、33例类风湿性关节炎患者以及17 例其他疾病类患者(除外MCTD、CTD、SLE 和RA 的其他AID 患者)，所有患者的年龄均无统计学意义。

1.2 研究方法 用免疫印迹法(即蛋白质印迹法)检测ENA(包括Sm、nRNP、Scl-70、ss-A、ss-B、Jo-1)。观察抗ENA 抗体的结果:稀释血清(1 ∶100)，参照试剂盒中依次排列抗原，黑色条带出现者视为阳性。用IFL(间接免疫荧光法)检测ANA:采用的复合片来自Hep-2/灵掌类猴肝组织。观察结果:稀释血清(1 ∶100)，判定猴肝组织片和Hep-2 产生的特异性免疫荧光反应为阳性。进一步对阳性血清再作10 000、3 200、1 000、320 倍稀释来决定最终的滴度。对细胞荧光模型进行观察时使用荧光显微镜。用IFL(间接免疫荧光法)检测抗ds-DNA，使用的抗原基质为绿蝇短膜虫。观察结果:稀释血清(1 ∶10)，绿蝇短膜虫发生动基体免疫荧光反应判为阳性。所有试剂均购自欧盟实验诊断有限公司。比较男性、女性的自身抗体阳性情况差异，并探讨不同荧光模式的ANA 对应的ENA 各项阳性情况以及ANA表达与ENA、抗ds-DNA 表达相关性。

1.3 统计学方法 本研究中的数据均采用SPSS19.0 软件进行分析。数据计量以±s 形式表示，比较采用t 检验和χ2检验。定义P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 入组患者的详细一般资料见表1。

2.2 自身抗体检测阳性与性别相关性 男、女性患者的自身抗体检测阳性情况见表2，可见女性患者的ANA(χ2=12.23，P ＜0.01)、抗ds-DNA 阳 性率(χ2=5.906，P=0.015)均显著高于男性。

2.3 ANA 不同荧光模式所对应的ENA 各项阳性率 表3 为不同荧光模式的ANA 对应的ENA 各项阳性情况，提示nRNP、ss-A 阳性标本中的颗粒型ANA 比例最高，而Scl-70 阳性标本中均质型ANA比例最高。

2.4 ANA 表达与ENA、抗ds-DNA 表达相关性 ANA 表达阳性和阴性的标本所对应的ENA、抗ds-DNA 表达情况详见表4，结果提示ANA 阳性标本的ENA 阳性率(χ2=6.406，P=0.011)、抗ds-DNA 阳性率(χ2=43.49，P＜0.01)显著高于ANA 阴性的标本。

表1 入组患者的一般资料Tab.1 General data of patients

表2 自身抗体检测阳性与性别相关性Tab.2 Correlation between positive expression of detection of autoantibodies and sex

表3 不同荧光模式的ANA 对应的ENA 各项阳性情况Tab.3 Positive cases of all ENA correspond to different fluorescent pattern of ANA

表4 ANA 表达与ENA、抗ds-DNA 表达相关性Tab.4 Correlation between expression of ANA and expression of ENA，anti-ds-DNA antibody

3 讨论

AID 存在自身反应性的T 细胞或(和)自身抗体，严重程度与量平行，致敏淋巴细胞或自身抗体所针对的抗原分布部位是AID 受累的主要范围，故检测自身抗体有助于鉴别诊断AID、对疾病活动度进行判断、观察疗效以及对临床用药的指导都有着极其重要的价值意义［4］。性别不同，自身抗体的检出率亦显著不同，自身抗体在男性中的阳性率明显比女性中的阳性率低，提示AID 具有性别上的差异，考虑原因主要为性激素不同致使了免疫系统不同的反应，其中男性性激素对免疫反应起一定的抑制作用，而女性性激素则起了增强的作用［5］。

AID 不同，抗核抗体谱亦不同。ANA 为细胞核成分(包括细胞膜、细胞浆、细胞核)的自身抗体的统称。依据核抗原的不同，将ANA 分为:抗DNA 抗体、抗组蛋白抗体、抗着丝点抗体、抗核仁抗体。其中抗DNA 抗体又分为两种:抗ds-DNA(抗双链DNA)和ssDNA(抗单链DNA)。ENA 可分为9 类，产生9 种抗体:抗RNP 抗体(抗核糖核蛋白抗体)、抗SM 抗体、抗ss-A 抗体、抗Ha 抗体、抗PM-1 抗体、抗MA1 抗体、抗Scl-70 抗体、抗Jo-1 抗体和抗Ku 抗体。检测自身抗体期间，相比于抗ds-DNA、ENA，ANA 特异性并不高，但是敏感性较高，同时在ANA 阴性和阳性标本中，抗ds-DNA、ENA 检出阳性率有着明显的差异，当ANA 阴性时，抗ds-DNA、ENA 检出阳性率较低，而当ANA 阳性时，抗ds-DNA、ENA 检出阳性率相对较高［6］。

由于女性存在的如促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)信号和高催乳素血症的不同、雄激素水平降低等潜在的原因，女性更易得SLE 疾病，女性SLE 患者中中枢神经受损和雷诺现象等较为常见，而男性SLE 患者却是肾受累、浆膜炎以及皮肤表现较为常见，自身抗体和男、女性SLE 患者的临床表现几乎一致。本研究发现自身抗体在男性中的阳性率明显低于女性，其中男性和女性ANA 和ENA 阳性率之间的差异均具有统计学意义(P＜0.05)。

ANA 的荧光模式与ENA 的抗核抗体谱内各个谱条带上的阳性存在关联，一旦nRNP、Sm 中任意1～2 项均呈阳性表达时，ANA 相应的荧光模式最为可能是颗粒型;如果Scl-70 呈阳性表达时，则最可能呈均质性。nRNP 高滴度抗体是MCTD(混合性结缔组织病)的一个标志物，阳性表达率为95%～100%，疾病活动性与抗体滴度存在关联性［7］，30%～40%的SLE 患者中也存在nRNP 抗体，但是基本都会有Sm 抗体伴随;然而，抗ds-DNA 和Sm 是SLE 诊断的两个标志性的抗体;各种AID 与抗ss-A 抗体均有关，40%～80%出现在SS(干燥综合征)中，30%～40%出现于SLE 中，20% 出现在PBC(原发性胆汁性肝硬化)［8］;在SS 中抗ss-B 和抗ss-A 中一般均同时出现;25%～75%的PSS(进行性系统性硬化症)患者中出现抗Scl-70 的抗体;多肌炎中抗Jo-1 抗体的阳性表达率为25%～35%，与肺间质纤维化合并往往存在一定的关联性。故ANA 能作为ADI 的一项筛选指标，如果ANA 呈阳性表达，则需进一步检测抗ds-DNA 和ENA，来提高检出ADI 的概率，有助于及早预防、追踪和判定患者病情［9］。

综上所述，在ADI 中，三种自身抗体抗ds-DNA、ENA 和ANA 的敏感性差异较为明显;同时自身抗体在男性中的阳性率明显低于女性;颗粒型在ANA核型中占据比较高的比率;ANA 荧光模式与ENA抗体谱中的Scl-70、nRNP 以及Sm 的阳性有关;ANA 阴性中抗ds-DNA 和ENA 的阳性检出率较低［10］。

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