羊水细胞染色体核型分析在孕妇产前诊断中的应用分析

张惠清

羊水细胞染色体核型分析在孕妇产前诊断中的应用分析

张惠清

目的 分析羊水细胞染色体核型分析在孕妇产前诊断中的应用价值。方法 选取产检的孕妇40例，均为孕18～24周。在孕妇本人知情同意下，在B超介导情况下给予羊膜腔穿刺抽取羊水，并进行细胞培养，仔细观察细胞生长状况，准确收获细胞后进行核型分析。结果 40例孕妇均成功进行羊水穿刺细胞培养，成功率为100%。其中染色体核型正常36例，染色体核型异常4例；2例21-三体综合征孕妇在确诊后进行引产手术终止妊娠，2例2N/4N四倍体核型孕妇接受进一步脐带血检查后诊断为核型正常。28例年龄＜35岁孕妇均未检出异常染色体核型。另外12例年龄＞35岁孕妇中检出4例染色体核型异常。结论 目前，产前诊断异常胎儿必不可少的方法就是羊水细胞染色体核型分析，该诊断方法能帮助及早发现和诊断异常胎儿，对优生优育、提高我国人口素质具有重要意义。

羊水细胞；染色体核型分析；产前诊断；应用价值

染色体疾病作为一种常见遗传病，约占遗传性疾病的10%。这类先天性疾病不能治愈，对家庭、社会都带来沉重负担[1]。产前诊断尤其重要，自1956年羊膜腔穿刺技术的研发以来，羊水细胞染色体核型分析作为一种有效的产前诊断手段已被广泛应用于临床产检中，能有效诊断一系列染色体异常性疾病，包括染色体数量异常、染色体异位或倒位、染色体重复或缺失、染色体变异、胎儿畸形等[2]。本研究对羊水细胞染色体核型分析在产前诊断中的实际应用情况进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月～2013年12月在广西贵港市妇幼保健院优生遗传科产检的40例孕妇，年龄20～40岁，平均年龄（26.8±1.2）岁；孕周18～24周，平均孕周（18.5± 1.5）周。所有入组孕妇均经本人知情同意。

1.2 研究方法 在B超引导下通过羊膜腔穿刺，先使用无菌注射器抽取2mL羊水弃去，再用2支无菌注射器（10mL）抽吸20mL羊水标本，实验室进行细胞培养。在超净台中使用无菌离心管对羊水标本进行分装，以1200r/min速度离心10min后去除上清液，保留0.5mL羊水和细胞沉淀物，混匀后分别接种于盛有2mL羊水培养液的斜面培养管中，37℃、5%CO2环境的培养箱中静态培养6d。在显微镜下观察有成堆或散在梭形细胞紧贴壁生长，换液继续培养，隔天观察细胞的生长情况，若细胞增殖非常旺盛、分裂细胞较多时则可收获。若细胞增殖不同步，有7～9个大克隆时即可传代，第2天在显微镜下观察带细胞密度合适、梭形细胞胞体发亮且折光性好、细胞间连接不密，及时收获。加入1滴秋水仙素（25μg/mL）继续培养4h后收获细胞。首先将培养液缓慢倒入离心管内，滴入0.2mL左右的0.25%胰酶-EDTA消化液，再加入0.85%氯化钠溶液至2mL，放入37℃的恒温箱中恒温5min，在显微镜下确认细胞脱壁后吸出液体至离心管内，之后使用37℃预热生理盐水冲洗瓶壁至离心管中，以1200r/min速度离心10min，去除上清液，保留0.5mL，轻弹管底，加入1mL已经预热的低渗液（0.4%拘橼酸钠∶0.4%氯化钾= 1∶1），低渗6min后加入10滴固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）混匀，精致6min后再次以1200r/min速度离心10min，去除上清液，加入4mL固定液混匀固定25min，再次离心去除上清液，重复上一固定步骤再固定1次，离心去除上清液后观察沉淀细胞量，加入固定液，调整滴片浓度，常规G显带。显微镜下技术分散良好的30个中期分裂相，异常核型技术50个分裂相，进行核型分析。

2 结果

2.1 羊水培养与核型分析结果 40例孕妇均成功进行羊水穿刺细胞培养，成功率为100%。40例孕妇细胞培养核型分析结果表明，36例染色体核型正常，4例染色体核型异常，其中2例21-三体综合征孕妇在确诊后进行引产手术终止妊娠，2例2N/4N四倍体核型孕妇接受进一步脐带血检查后诊断为核型正常。

2.2 年龄因素与染色体非整倍体 40例孕妇中28例年龄＜35岁，均未检出异常染色体核型。另外12例年龄＞35岁孕妇中检出4例染色体核型异常。

3 讨论

新生儿出生缺陷指的是在其出生时就已经存在的外在、内在结构或功能异常，先天畸形、代谢性疾病、智力障碍等都属于出生缺陷，多数是由于遗传或环境或两者共同作用导致的，其遗传因素中最常见的就是染色体异常[3]。研究数据表明我国每年约有10万新生儿存在染色体异常，活产新生儿中染色体核型异常约为0.5%，其中唐氏综合征发病率占0.12%～0.17%，性染色体异常发病率约占0.1%，具有产前诊断指征高风险孕妇妊娠胎儿染色体核型异常检出率更是高达3.8%～7.7%[4]。有效准确的产前诊断染色体核型异常的胎儿能及时终止妊娠，有利于优生优育[5]。羊水细胞染色体核型分析能起到产前明确诊断作用，该方法操作简便、准确性高、并发症少，是目前最经典的检查染色体异常的方法。本组40例孕妇经羊水细胞核型分析发现4例染色体异常，其中2例为21-三体综合征，2例为2N/4N四倍体核型。同时研究还发现4例染色体检出异常孕妇均为35岁以上的高龄孕妇。21-三体综合征在胎儿畸形中比较常见，有研究发现其发病率与孕妇年龄呈正比，尤其是35岁以上孕妇发病率明显升高[6-7]。临床产检中要注意35岁以上孕妇务必进行羊水穿刺染色体检查，这也是羊水穿刺、细胞培养的确切指征之一[8]。

综上所述，开展产前诊断工作非常必要，应建议所有孕妇在孕中期进行产前筛查，普及产前筛查知识，提高产妇自身对妊娠的认识，以期达到优生优育的目的。

[1] 赵欣荣，程蔚蔚，王慧，等.2635例羊膜腔穿刺产前诊断临床研究[J].中国优生与遗传杂志，2009，17(9)：60．

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[3] 高雪峰，邵敏杰，杨丽萍，等.羊水细胞培养染色体核型分析在产前诊断中的意义[J].中国优生与遗传杂志，2009，17(2)：46．

[4] 杨灿锋，耿金花，王峻峰，等.羊水细胞染色体分析在产前诊断中的应用[J].中国妇幼保健杂志，2009，24（32）：4602-4604．

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[6] 高菲菲，王酉，项静英.产前诊断分子遗传学方法进展[J].同东医药，2010，50(40)：110.

[7] 胡美红，刘雨生，何国平，等.羊水细胞培养及染色体核型分析在产前诊断中的应用[J].临床输血与检验,2011，13(1)：23-25.

[8] 石鑫玮，刘海意，乔福元，等.荧光原位杂交技术及染色体核型分析在产前诊断中的应用价值[J].中国实用妇科与产科杂志，2011，27（2）：125-127．

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.5.071

广西 537100 广西贵港市妇幼保健院优生遗传科 （张惠清）