脐带间充质干细胞与脐血干细胞移植治疗慢性肝功能衰竭对比观察

张岁，郭力红，贾蓓，王海舫，柳立平，马文波，佟立新，李保欣

(河北医科大学第一医院，石家庄050031)

脐带间充质干细胞与脐血干细胞移植治疗慢性肝功能衰竭对比观察

张岁，郭力红，贾蓓，王海舫，柳立平，马文波，佟立新，李保欣

(河北医科大学第一医院，石家庄050031)

目的 对比观察脐带间充质干细胞与脐血干细胞移植治疗慢性肝功能衰竭(后简称肝衰竭)的疗效。方法 慢性肝衰竭患者(乙型肝炎病毒感染进展而来)47例，分为A组25例、B组22例。A、B组在内科综合治疗的基础上分别采用脐带间充质干细胞、脐血干细胞经外周静脉输注治疗。分别于移植前及移植后2、4、12、24周检测两组血清谷丙氨酸转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、凝血酶原活动度(PTA)并进行MELD评分。观察患者临床症状改善情况、干细胞移植后不良反应、肝癌发生情况、患者生存情况。结果 两组移植后2、4、12、24周血清ALT、TBIL和MELD评分均较移植前明显降低，ALB和PTA均较移植前明显升高(P均<0.05)。干细胞移植4周后，两组乏力、食欲、腹胀及腹水情况均较移植前改善，两组症状改善情况差异无统计学意义。随访至移植后24周，A组生存20例，死亡5例，生存率为80.00%；B组生存18例，死亡4例，生存率81.82%。两组生存率差异无统计学意义。两组在移植及随访过程中均未发现与干细胞治疗相关的不良反应，无肝癌发生。结论 脐带间充质干细胞与脐血干细胞移植治疗慢性肝衰竭均可改善患者的肝功能、减轻临床症状且应用较为安全，两种方法疗效相当。

肝功能衰竭；脐带间充质干细胞；脐血干细胞；干细胞移植；乙型肝炎病毒

肝功能衰竭(后简称肝衰竭)是多种因素引起的严重肝脏损害，导致肝脏合成、解毒、排泄和生物转化等功能发生严重障碍或失代偿，出现以凝血功能障碍、黄疸、肝性脑病、腹水等为主要表现的一组临床症候群[1]，病死率极高。内科保守治疗效果不理想，肝移植是惟一有效的治疗方式，但限于供肝源缺乏、手术费用高及移植后免疫排斥反应等未得到广泛应用。近年来，干细胞移植技术的研究为肝衰竭的治疗开辟了新途径。临床试验证实干细胞移植治疗肝衰竭安全有效，可提高患者的生存率[2～6]，其中脐带间充质干细胞和脐血干细胞来源丰富、繁殖能力强、繁殖速度快，具有强大的免疫调节能力、组织器官修复能力和多向分化潜能，已成为临床应用的重要选择。本研究对比观察了脐带间充质干细胞与脐血干细胞移植治疗慢性肝衰竭的效果，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年9月～2015年9月我科收治的慢性肝衰竭患者47例，符合2006年《肝衰竭诊治指南》中慢性肝衰竭的诊断标准。入选患者肝衰竭均为乙型肝炎病毒感染进展而来。排除标准:合并甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、EB病毒、巨细胞病毒、HIV感染者，自身免疫性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝炎患者，严重心肺脑疾病及衰竭状态患者，肝癌或其他脏器肿瘤患者，高度过敏体质者，有精神疾病者，怀孕及哺乳期患者。采用单盲、平行对照分组，分为A组25例、B组22例。A组男18例、女7例，年龄35～67(52.3±8.4)岁，MELD评分(27.01±4.16)分，HBV DNA>104IU/mL 14例、102～104IU/mL 6例、<102IU/mL 5例；B组男16例、女6例，年龄33～63(51.8±8.9)岁，MELD评分(26.45±2.44)分，HBV DNA>104IU/mL 12例、102～104IU/mL 6例、<102IU/mL 4例。两组性别、年龄、MELD评分及HBV DNA水平差异均无统计学意义。本研究获医院伦理委员会许可，所有患者签署知情同意书。

1.2 脐带间充质干细胞及脐血干细胞的的制备 选择健康产妇，排除艾滋病、梅毒、乙型肝炎、丙型肝炎及其他传染性疾病，无病理妊娠者，获产妇知情同意。采用贴壁培养法分离脐带间充质干细胞，脐带间充质干细胞传代到第3代，镜下观察见细胞贴壁良好、融合密度达85%，经流式细胞仪检测细胞表型鉴定，收集培养至第4代的干细胞；产妇胎儿娩出断脐后，采用封闭式采血法采脐血，每袋采脐血60～140 mL，采用细胞处理试剂盒分离脐血干细胞，经流式细胞仪检测对细胞表型进行鉴定，细胞活性大于95%，细胞内毒素检测阴性。

1.3 干细胞移植方法 两组均在内科常规治疗的基础上采用干细胞移植治疗。A、B组分别经外周静脉输注脐带间充质干细胞和脐血干细胞，输注前20 min均给予苯海拉明注射液20 mg肌肉注射，每次回输的干细胞数量为(1.4～2.3)×106/kg，用0.9%氯化钠注射液稀释至100 mL，静滴。每半月输注1次，共输注3次。

1.4 观察方法 分别于移植前和移植后2、4、12、24周检测患者血清谷丙氨酸转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、血浆凝血酶原活动度(PTA)并进行MELD评分。观察患者临床症状改善情况、干细胞移植后不良反应、肝癌发生情况、患者生存情况。

2 结果

2.1 两组干细胞移植前后生化指标和MELD评分比较 两组移植后2、4、12、24周血清ALT、TBIL和MELD评分均较移植前明显降低，ALB和PTA均较移植前明显升高(P均<0.05)。见表1。

表1 两组干细胞移植前后ALT、TBIL、ALB、PTA和MELD评分比较

注：与本组移植前相比，**P<0.05，*P<0.01。

2.2 患者临床症状改善情况 干细胞移植4周后，两组乏力、食欲、腹胀及腹水情况均较移植前改善，其中A组分别为19、20、19、18例，B组分别为18、18、17、16例，两组症状改善情况差异无统计学意义。

2.3 患者生存情况 随访至移植后24周，A组生存20例，死亡5例(上消化道出血2例、肝性脑病2例、肝肾综合征1例)，生存率为80.00%；B组生存18例，死亡4例(消化道出血2例、肝性脑病1例、肝肾综合征1例)，生存率81.82%。两组生存率差异无统计学意义。

2.4 不良反应 两组在干细胞移植及随访过程中均未发现与干细胞治疗相关的不良反应，无肝癌发生。

3 讨论

慢性肝衰竭是在肝硬化的基础上，出现以腹水或肝性脑病等为主的慢性肝功能失代偿的临床表现[1]，是终末期肝病患者的主要死亡原因，内科综合治疗效果不理想。干细胞是一类具有不断自我繁殖和分化能力的原始细胞，具有免疫调节和靶向治疗的功能，为肝衰竭的治疗提供了新的方向。目前临床上用以治疗肝衰竭的干细胞主要是骨髓干细胞、外周血干细胞、脐带间充质干细胞和脐血干细胞。骨髓干细胞取材相对不易，对于体弱和老年患者不适用；外周血干细胞移植在骨髓干细胞动员期间，白细胞明显增加，存在心脑血管血栓形成的风险[7]，临床应用受到一定限制；脐带间充质干细胞与脐血干细胞以其取材方便、来源广泛、干细胞含量丰富、自身繁殖能力强、繁殖速度快、表面抗原性弱、无需配型等优点受到广泛关注。脐带间充质干细胞来源于脐带，主要是间充质干细胞；脐血干细胞来源于脐血，有造血干细胞和间充质干细胞。临床试验证实这两种干细胞移植治疗肝衰竭均可改善患者肝功能，降低死亡率，安全可靠[4,5]，但对于两种干细胞移植的疗效是否存在差异，尚需进一步探讨。

本研究发现，脐带间充质干细胞和脐血干细胞移植治疗慢性肝衰竭的疗效无统计学差异。两组患者移植后ALB、PTA均较移植前升高，ALT、TBIL、MELD评分均较移植前降低，表明脐带间充质干细胞与脐血干细胞移植均可改善患者的肝功能。推测机制为：①干细胞通过归巢能力到达受损的肝脏[8]，在肝脏微环境中分化为功能性肝细胞[9～12]发挥作用，促进肝功能恢复；②干细胞通过分泌营养因子，抑制肝细胞凋亡，促进肝细胞再生，延缓肝纤维化进展[13～15]；③干细胞具有抗氧化活性，能够起到减轻肝损伤的作用[16,17]；④干细胞可减少CD4+T细胞的浸润和激活、抑制Th1功能、诱导调节性T细胞生成、调控树突细胞功能等[18，19]，减轻肝脏免疫损伤和炎症反应。

乙型肝炎病毒相关肝衰竭病情严重、并发症多、病死率高[20]。本研究对患者进行24周的随访，结果显示干细胞移植后两组患者生存率均在80%以上，说明脐带间充质干细胞移植与脐血干细胞移植均可有效提高患者生存率。既往有研究[21]报道干细胞可通过直接转化、抑制抗肿瘤免疫反应和对肿瘤细胞的营养作用等导致肿瘤发生；但也有学者[3]认为干细胞移植可能对肝硬化患者有更好的保护作用，防止肝癌发生。我们在研究中发现，两组患者不仅临床症状明显改善，且未发生与干细胞治疗相关的不良反应，无肝癌发生，说明干细胞移植治疗的有效性和安全性均较好。

综上所述，脐带间充质干细胞与脐血干细胞经外周静脉移植治疗慢性肝衰竭均可改善患者的肝功能、减轻临床症状且应用安全有效，两种方法疗效相当。但本研究随访时间短、纳入病例数量较少，后续仍需加大样本量、进行长期随访以验证上述结果。

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河北省医学科学研究重点课题(20150636)。

李保欣(E-mail: libaoxin111@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.03.030

R575.3

B

1002-266X(2017)03-0092-03

2016-09-23)