蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡作用的分析

姜峰玉 孙 抒* 李 冰 辛 悦

（1 吉林市中心医院，吉林 吉林132011；2 延边大学医学部，吉林 延吉 133002）

肿瘤是一种因克隆性异常增生而形成的新生物，发病机制为机体受到各种致癌因素的影响而导致局部组织的细胞在基因水平上失去对生长发育的正常调控[1]。目前临床上一般采用放射线疗法、手术治疗等方式进行治疗，但放射线疗法容易对人体的正常细胞产生不利的影响，导致新的病变细胞的产生；而手术治疗不能保证彻底根除，如果处理不当，可能会导致机体其他部位的感染。因此寻找有效的全身性治疗方式具有重要的意义[2]。蝙蝠葛主要生长在我国的东北部，其根、茎、叶以及果实都具有一定的药用价值，本次研究主要探讨蝙蝠葛活性成分对于人白血病K562细胞株的抑制增殖和诱导凋亡作用，报道如下。

表1 不同剂量蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞的生长抑制情况对比表（±s）

表1 不同剂量蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞的生长抑制情况对比表（±s）

剂量(μg/mL)细胞生长抑制率(%)24 h 48 h 20 52.73±1.28 53.65±2.98 40 83.01±0.72 83.88±1.82 80 98.69±0.74 98.29±1.45 160 98.91±1.12 99.03±2.18

表2 凋亡关键效应酶的表达情况表（±s）

表2 凋亡关键效应酶的表达情况表（±s）

注：n=8；与对照组相比，*P＜0.01

剂量(μg/mL) Caspase-3 Caspase-8 Caspase-9 0 13.27±1.62 15.18±2.08 15.36±1.97 20 76.42±3.19* 78.82±4.34* 82.14±4.91*

1 材料与方法

1.1 一般材料：蝙蝠葛活性成分从本市药物研究所获得，人白血病K562细胞株从本院获得。

1.2 方法

1.2.1 四唑盐（MTT）比色法：采用MTT法检测细胞生长情况。

1.2.2 倒置显微镜：选取处于对数生长期的K562细胞，然后制成密度为10×107/L的细胞悬浮液，在50 mL的培养瓶中进行接种，4 h之后在其中加入剂量为20 μg/mL的蝙蝠葛活性成分，用导致显微镜观察加入蝙蝠葛活性成分前后细胞的形态学变化。

1.2.3 免疫组化法：按照S-P试剂盒显示的操作步骤进行操作。

1.3 观察指标：计算并分析不同剂量蝙蝠葛活性成分作用下的细胞生长抑制率；观察并记录加入蝙蝠葛活性成分前后细胞的形态学变化，包括细胞质、细胞膜、细胞核、细胞体积的变化等；观察蝙蝠葛活性成分实验组与空白对照组3种凋亡关键效应酶的表达情况。

1.4 统计学分析：采用SPSS22.0软件进行统计学分析，计量资料采用（±s）表示，组间比较行t检验；计数资料采用结构比表示，组间比较行χ2检验。P＜0.05差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞增值抑制作用：由表1可知，蝙蝠葛活性成分的剂量越高，越能抑制人白血病K562细胞的生长。而当蝙蝠葛活性成分达到80 μg/mL时，24 h后细胞生长抑制率可达到（97.69±0.74）%。蝙蝠葛活性成分的剂量为160 μg/mL时的细胞生长抑制率与剂量为80 μg/mL的细胞生长抑制率的差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 人白血病K562细胞形态变化：通过倒置显微镜对正常状况下的人白血病K562细胞株进行观察，发现细胞呈现椭圆形或者是核圆形，体积较大，核浆多占的比例比较大，胞质内部无颗粒出现，一般聚集生长，可看到瘤巨细胞。加入20 μg/mL的蝙蝠活性成分24 h后发现，原来聚集在一起的细胞，呈现分散状态，相对而言分布得比较稀疏，瘤巨细胞相较减少；细胞体积减小，核浆所占的比例也有所降低，细胞核的核膜消失，细胞核分裂成碎块，凋亡细胞以及凋亡小体已经形成。

2.3 凋亡关键效应酶的表达情况：由表2可知，蝙蝠葛活性成分为0时Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9等凋亡关键效应酶的水平与蝙蝠葛活性成分为20 μg/mL时以上凋亡关键效应酶的水平具有显著的差异（χ2=49.923，P＜0.01；χ2=37.401，P＜0.01；χ2=35.702，P＜0.01）。

3 讨 论

相比于放射线或西医药治疗来说，中药治疗具有不良反应较小、作用时效长、作用靶点较多、相容性较好等优点[3]，因此越来越多地被用于肿瘤的治疗中。蝙蝠葛是从中药北豆根中提取出来的[4]，其对于抑制肿瘤细胞的生长增殖以及促进肿瘤细胞的凋亡具有较好的效果[5-7]。

本次研究采用MTT比色法检测表现出不同剂量蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞的生长产生的抑制作用，结果显示，蝙蝠葛活性成分剂量越高，对人白血病K562细胞生长繁殖的抑制作用越强。但是当剂量到达一定程度时，细胞生长抑制率的增长率逐渐降低，当蝙蝠葛活性成分的剂量从80 μg/mL提高到160 μg/mL时，细胞平均生长抑制率仅提高0.22%。这就说明某一剂量的蝙蝠葛活性成分可以起到抑制细胞增殖的作用，在这个基本之上继续加大剂量不能达到更好的治疗效果，因此需要通过采用其他的方式达到更好的治疗效果。

通过导致显微镜发现加入20 μg/mL剂量的蝙蝠葛活性成分之后，人白血病K562细胞已经明显可以看到凋亡形态学现象的发生，根据不同剂量蝙蝠葛活性成分对细胞生产的抑制情况可以推测出，如果增加蝙蝠葛活性成分的剂量，K562细胞将出现更加明显的凋亡现象。本次研究未能展示不同剂量蝙蝠葛活性成分应用于K562细胞发生的形态学改变，因此只能得出蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞具有诱导凋亡作用。通过蝙蝠葛活性成分作用前后对Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9等凋亡关键效应酶水平的监测更加有力地证实这一点。