microRNA-218在肝细胞癌中的表达及其与肝癌转移复发关系的实验研究

肖钟迪，张玉成，乔 峰

(1.大庆油田总医院 普外科，黑龙江 大庆163001；2.吉林大学中日联谊医院 科学研究中心；3.佳木斯大学附属第一医院 胸心外科)

肝细胞癌(HCC,简称肝癌)的恶性程度高，侵袭性强，极易复发和转移。研究肝癌侵袭与转移的潜在标志物和机理，将对肝癌的治疗和预后判断至关重要[1]。microRNAs(miRNAs)是一类长度约为19-22个核苷酸的非编码RNA，研究表明microRNAs参与了肝癌的发生、发展和侵袭转移的全过程[2,3]。但是有关miR-218与肝癌之间的相关性仍然未知。本研究将利用qRT-PCR方法检测不同分期的肝癌组织miR-218表达的情况，结合肝癌患者生存率进行预后判断，结合肝癌患者生物特征与生物统计学分析，以明确miR-218的表达与肝癌侵袭转移和预后之间的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象本研究选取2011-2013年大庆油田总医院普外科肝癌患者112名，均为汉族，其中男性63名，女性47名，年龄20-70岁，其中女性平均年龄47.7岁，男性平均年龄46.1岁；112例肝癌样本中，T1期44例，T2期45例，T3期23例。所有的样本采集均获得了患者知情同意，检测完全符合大庆油田总医院伦理道德标准并通过伦理审查。

1.2 RT-qPCR检测TRIzol试剂(Thermo Fisher Scientific,USA)提取RNA，提取过程严格按照试剂盒说明书进行。然后应用TaqMan MicroRNA逆转录试剂盒合成单链cDNA，接着应用TaqMan MicroRNA PCR (Thermo Fisher Scientific,USA)进行PCR反应。结果采用2-ΔΔCT方法进行miR-218定量分析，U6作为对照microRNA，每个样本至少重复3次，进行统计学分析。

1.3 统计学方法采用SPSS 22.0进行t检验，数值用均值和标准差表示，P<0.05代表有统计学意义；Kaplan-Meier生存曲线用于分析miR-218的表达水平与肝癌患者预后的关系。

2 结果

2.1 miR-218在肝癌患者中表达降低利用RT-qPCR检测了112例肝癌患者miR-218的表达情况，结果发现，与癌旁正常组织相比，miR-218在肝癌患者中表达明显降低，具有统计学意义(见图1)。

图1 miR-218在肝癌中表达降低

2.2 miR-218的表达与肝癌患者分期等的相关性利用RT-qPCR分别检测了不同分期肝癌患者miR-218的表达，结果发现与癌旁正常组织相比，miR-218在T3期降低了86%，miR-218表达降低最大，而在T1期降低了52%，miR-218表达降低相对最小(见图2A)； miR-218表达的降低与肝癌的转移和复发密切相关(见图2B和图2C)。

2.3 miR-218的低表达与肝癌患者预后有关通过手术后患者随访，以miR-218表达的中位值作为截断值进行Kaplan-Meier生存曲线分析，结果发现miR-218表达越低，肝癌患者的预后生存率越差(见图3)。

3 讨论

HCC是发生于肝脏的恶性肿瘤，其死亡率在消化系统恶性肿瘤中位列第三位，仅次于胃癌和食管癌。我国每年约有11万人死于肝癌，其患病率占世界的50%以上，已成为严重威胁我国人民健康的重大疾病，值得重视。miRNAs作为一类新型基因调控剂，与肿瘤的发生发展密切相关。越来越多的资料表明miRNAs在多种肿瘤中存在异常，其通过调控下游靶基因，影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、浸润、转移以及血管生成等生物学特性，发挥癌基因或抑制癌基因的作用，从而参与肿瘤的发生发展和侵袭转移。

A miR-218在不同分期肝癌患者的表达情况.B miR-218在肝癌患者转移状况的表达情况.C miR-218在肝癌患者复发状况的表达情况.

图3 miR-218的低表达与肝癌患者预后关系

本研究利用qRT-PCR方法检测了112例肝癌组织中miR-218的表达情况，结果发现，与癌旁正常组织相比，miR-218在肝癌患者中表达明显降低；同时发现，miR-218在肝癌的表达随着肝癌分期的增加而逐渐降低，其中肝癌三期降低最大，提示miR-218低表达可能与肝癌的分期有关；此外，研究还提示miR-218的低表达与肝癌转移和复发之间具有密切关系；miR-218表达越低，肝癌患者的预后越差。已有的研究也表明miR-218在非小细胞肺癌、肾透明细胞癌和大肠癌表达降低，并且miR-218表达的降低可能在非小细胞肺癌和肾透明细胞癌和转移和复发有关[4-6]；但是也有研究表明miR-218在上皮性卵巢癌中表达升高，并且miR-218的高表达与上皮性卵巢癌的分期和进展密切相关[7]，这可能与miR-218在不同癌组织中具有差异表达有关。

总之，我们的结果显示miR-218在肝癌中低表达，并与肝癌的转移复发和预后密切相关。但是本研究仅仅选择了112例肝癌患者标本，标本量不够大，检测结果可能不能完全反应miR-218与肝癌转移复发的相关性，另外有关miR-218参与肝癌的发生发展以及转移复发的机制尚需要进一步研究。