3 种党参提取物体外抗氧化活性探究

马 铭，白瑞斌，刘景龙，李 芸，李应东，胡芳弟*

（1.兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000；2.甘肃中医药大学药学院，甘肃 兰州 730000；3.甘肃中医药大学附属医院，甘肃 兰州 730000）

党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf，素花党参Codonopsis pilosulaNannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen 或川党参Codonopsis tangshenOliv.的干燥根。性甘味平，具有健脾益肺、养血生津的功效［1］。

《百草镜》中记载“党参，一名黄参，黄润者良，出山西潞安太原等处。有白色者，总以净软壮实味甜者佳”［2］。《药笼小品》中记载“西产为上，体糯味甜、嚼之少渣者佳”［3］。因此糖类成分，尤其是有甜味的低聚糖可能也是党参中的重要活性成分，现代药理学研究表明，党参水提物［4-5］、多糖［6-9］、醇提物［10-11］均具有良好的抗氧化活性，但尚未见对不同品种党参抗氧化活性物质及活性相关的比较研究，尤其是党参低聚糖部分的抗氧化活性研究。

本研究从党参主产地采集2015 年版《中国药典》规定的3 个党参品种，系统研究了不同品种、产区党参乙醇提取物、水提取物、多糖、粗低聚糖及精制低聚糖含有量差异以及党参各提取部分的体外抗氧化活性，以期为功能因子明确的党参相关保健品开发提供依据。

1 材料

1.1 试剂与仪器 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）（上海源叶生物科技有限公司）；Sephadex G-25（北京索莱宝生物技术有限公司）；维生素C（中国医药工业公司北京制药厂）；无水乙醇（日本Sigma 公司）；葡萄糖对照品（批号110833-201205，中国食品药品检定研究院）；其他试剂均为分析纯。

旋转蒸发仪（日本Eyela 公司）；恒温电加热板（上海科恒实业发展有限公司）；恒温水浴箱、电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；离心机（日本Hitachi 公司）；冷冻干燥机（美国Labconco 公司）；电子自动分析天平（德国Sartorius 公司）；BS-100 N 自动部分收集器、BT 100 N 数显恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）；UV-1700 紫外可见分光光度计（日本Shimadzu 公司）。

1.2 样品 来自不同产地3 个品种党参药材共40 批，其中党参1、党参2 各10 批分别来自甘肃、山西，鉴定为Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf.；素花党参Codonopsis pilosulaNannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen 共10 批，均采自甘肃文县；川党参Codonopsis tangshenOliv.共10 批，均购自荷花池药材市场。以上党参样品均由兰州大学药学院周印锁教授鉴定为正品［12］。信息见表1。

表1 样品信息

2 实验方法

2.1 党参不同提取物制备

2.1.1 乙醇提取物 党参粗粉，四分法取样，精密称取10 g，加入10 倍量95%乙醇，回流提取2 次，1 h/次，收集滤液，50 ℃，60 r/min 减压浓缩，蒸干，冷冻干燥至恒定质量，得党参乙醇提取物，计算得率。平行3 份。

2.1.2 水提取物 将“2.1.1”项下药渣晾至无乙醇味，加入10 倍量水，煎煮提取3 次，45 min/次，合并滤液，50 ℃，60 r/min 减压浓缩至原体积的1/4，取1/2 体积上述水提浓缩液（另外1/2 体积用于党参多糖和寡糖的制备），50 ℃，60 r/min 减压浓缩，蒸干，冷冻干燥至恒定质量，得党参水提取部分，计算得率，平行3 份。

2.1.3 粗党参多糖及粗党参低聚糖 将 “2.1.2”项下另外1/2 体积浓缩水提液中缓慢加入95% 乙醇至乙醇终浓度为80%，放置过夜后离心，10 600×g离心力离心15 min，收集上清液与沉淀。所得沉淀部分，冷冻干燥至恒定质量，得党参多糖，标记为粗党参多糖；上清液回收乙醇，蒸干，冷冻干燥至恒定质量，得粗党参低聚糖。平行3 份。

2.1.4 党参低聚糖精制 取适量粗党参低聚糖溶于少量水中，上2.6 cm×70 cm 的Sephadex G-25 纯化［13-14］，蒸馏水洗脱，每管收集5 mL；50 ℃、60 r/min 减压浓缩至快干，用少量水从浓缩瓶中溶出后，置于-80 ℃冰箱中4 h，冷冻干燥24 h 后即得到精制党参低聚糖，计算纯化得率，苯酚硫酸法［15］测定其低聚糖含有量。

2.2 DPPH 自由基清除活性测定［16］

2.2.1 样品溶液制备 精密称取干燥至恒定质量的党参乙醇提取物、党参水提取物、粗党参多糖、粗党参低聚糖及精制党参低聚糖各50 mg，蒸馏水溶解，定容至10 mL，逐倍稀释至2.50、1.25、0.63、0.31 mg/mL，即得。

2.2.2 活性测定 按“2.2.1”项下方法制备维生素C 溶液，作为对照。精密称取DPPH 20 mg，用无水乙醇溶解并定容至500 mL 棕色量瓶中，得质量分数为0.4% 的DPPH溶液，4 ℃下避光保存，备用。空白组（2 mL 无水乙醇+2 mL DPPH 溶液）、样品组（2 mL 待测溶液+2 mL DPPH溶液）、本底组（2 mL 待测溶液+2 mL 无水乙醇）。各组进行DPPH 自由基清除实验。吸取各组相关溶液进行混合，避光反应30 min，在517 nm 波长下测定A值。对照品维生素C 溶液同法测定。DPPH 自由基清除率% ＝1-（A样品-A本底）/A空白。用Origin 8.0 软件处理数据，结果见图1～2。

3 结果

3.1 党参各提取部分得率 采集于党参主产区40 批样品中，党参乙醇提取物、水提取物、粗党参多糖及粗低聚糖含有量见表2。

表2 不同品种党参中各提取物的得率（g/100 g，，n=10）

表2 不同品种党参中各提取物的得率（g/100 g，，n=10）

由表2 可知，党参1 与素花党参的乙醇提取物得率相近，分别为（31.82±2.61）、（34.86±2.05）g/100 g，川党参的乙醇提取物的得率为（17.94±0.81）g/100 g，约为党参1 和素花党参乙醇提取物得率的一半；然而川党参的水提取物得率为（43.42±0.57）g/100 g，高于党参1 和素花党参；值得一提的是，党参2 的乙醇提取物部分得率仅为其他品种党参的一半，而水提取物部分的得率在所有样品中最高；3 个品种党参中粗党参多糖含有量，川党参高于党参高于素花党参。粗党参低聚糖含有量，党参高于素花党参高于川党参。多糖和低聚糖含有量均为山西产区的样品含有量高。

党参水提取物、醇提取物以及党参多糖和低聚糖含有量的高低，是决定其品质的重要标志，但本实验所选取的党参分别来自甘肃渭源、漳县、文县以及山西，四川等地，且包括3 个品种，这可能是导致上述结果的一个重要原因。另外党参成分的差异也与党参生态适应性有关。近年来有关党参适宜产地研究和党参道地性研究越来越受到关注［17］。

3.2 党参各提取物DPPH 自由基清除活性 党参乙醇提取物、水提取物、粗党参多糖、粗低聚糖DPPH 自由基清除活性见图1。

图1 不同品种党参提取物DPPH 自由基清除活性比较

由图1 可知，在质量浓度为0～5.00 mg/mL 时，不同品种党参中的各提取物的DPPH 自由基清除活性由高到低依次为党参粗低聚糖、党参水提取物、粗党参多糖。

3.3 粗党参低聚糖与精制党参低聚糖DPPH 自由基清除活性 不同品种党参的各提取物中，粗低聚糖DPPH 清除活性强于其余各部分，因此将其纯化，进一步测定不同党参品种中精制低聚糖DPPH 自由基清除活性，结果见图2、表3。

图2 不同品种党参低聚糖DPPH 自由基清除活性

表3 精制党参低聚糖、粗党参低聚糖DPPH 自由基清除率比较（%）

由图2 可知，在质量浓度为0～5.00 mg/mL 时，不同品种党参精制党参低聚糖DPPH 自由基清除活性随其质量浓度的增加而增大，清除率最大可达94.3%～98.8%。由表3 可知，同一产地的精制党参低聚糖与粗党参低聚糖质量浓度均为5.00 mg/mL 时，纯化后的党参低聚糖的DPPH 自由基清除能力强于粗低聚糖。

4 结论

通过对采自4 个党参主产区的3 种党参不同提取部分的得率及DPPH 自由基清除活性研究发现，党参乙醇提取物、水提取物、党参多糖以及党参低聚糖成分均具有DPPH自由基清除活性，党参低聚糖成分的DPPH 自由清除活性为首次发现，且证实党参低聚糖成分的DPPH 清除活性强于其他提取部分，以期该结果为传统观念中所认为的“党参味甜者佳”提供理论依据，为党参品质评价和功能因子明确的健康产品开发提供参考。党参因品种及产地不同各部分提取物的含有量差异较大可能与其品种及产地适应性相关，有待进一步研究。