希森美康XN9000 血细胞分析流水线复检规则的制定与评估

郭晓聪，章梁君，郭小龙，华浩东，钟辉秀

随着医院实验室标本量的与日俱增，工作量越来越大，原来的单机血常规仪器的检测速度已不能满足科室大批量标本的检测。越来越多的实验室开始引进全自动血细胞分析流水线。笔者所在实验室近期也引进了希森美康XN9000 全自动血细胞分析流水线，包括2 台XN9000 全自动血细胞分析仪，一台SP10 全自动推片机及1 台完全模拟显微镜分类技术的 DI60 阅片机，并配套 laboman6.0 中文软件系统。流水线不仅提高了测试速度，且具有推片、阅片功能，节约了人力成本。但是再精密的血细胞分析仪器也不能完全代替人工形态镜检，某些特定疾病还是需要人工镜检予以辅助和验证［1］。生产商结合国际血液学复检专家组推荐的41 条复检规则与自身仪器特点，向该实验室推荐了20 条复检规则。原则上既不能漏检恶性疾病，将假阴性率控制在5%的可接受范围，也不能让复检率太高，降低工作效率。为保证此复检规则的正确性，笔者根据验证结果制定出该实验室血细胞分析的复检规则。

1 资料与方法

1.1 样本来源收集笔者医院2019-08-04—2019-10-02 的EDTA-K2 抗凝的静脉全血标本300份，包含住院（含临床各科室，其中血液科64 例，肿瘤科49 例）、门诊、体检标本。

1.2 仪器与试剂SYSMEX XN9000 全自动血细胞分析流水线，配套LABOMAN6.0 中文软件系统，配套试剂，校准品和质控品。奥林巴斯显微镜2 台。

1.3 验证方法

1.3.1 样本检测 将生产商所提供的复检规则（表1）录入 XN9000 的 laboman6.0 软件中。使用希森美康原装校准品校准仪器，室内质控在控。所有标本严格按照仪器标准操作程序进行检测，仪器结果只要触及了复检规则中的任何一条即为仪器阳性。

1.3.2 涂片镜检 每份标本检测完成后立即制作血涂片3 张，其中2 张分别由一位主任检验师和一位主管检验师进行人工分类计数和形态检查，另一张备用。镜检阳性判定标准参照2008 年中国血细胞分析复审协作组制定的标准执行（表2）。两位检验师分别分类计数200 个白细胞，并同时观察白细胞、红细胞、血小板的形态、有无血小板聚集、疟原虫等。观察到表2 中的任意一条即判读为阳性，若两位检验者的结果不一致，则由第三位检验者再做分类计数，取两个相同的结果为最终镜检判读结果。

表1 SYSMEX XN9000 血液分析流水线厂家推荐复检规则

表2 涂片镜检阳性判断标准

1.3.3 评估验证 以镜检结果为标准，对仪器的复检规则进行评估。利用microsoft ecxel 2013 进行统计学处理，计算sysmex XN9000 流水线在该复检规则下检测此300 份样本的真阳性率，假阳性率，真阴性率和假阴性率。查看假阴性率是否＜5%。

2 结 果

统计结果见表3。

表3 复检规则验证结果（n=300）

2.1 验证结果假阴性率为 14.3%，复检率为28%。假阴性远大于国际血液学专家组确定的5%的最大可接受限，该规则并不适用于该实验室，需要重新修改规则并再次进行验证。

2.2 原因分析9 例假阴性标本中，镜检发现幼稚粒细胞5 例，仪器结果未触发复检规则；2 例为中性粒细胞比率，仪器结果均为78%未触发复检规则，而镜检结果分别为81%和83%；1 例为镜下见血小板聚集而仪器未触发复检规则； 还有1 例镜下异型淋巴细胞高达12%而仪器未触发复检规则。可见有幼稚粒细胞的标本是造成此复检规则假阴性偏高的主要原因，应该将有未成熟颗粒报警（仪器IG 参数）这条加入到复检规则，以避免漏筛此类标本。同时将白细胞计数和MCV 的复检限略微下调，以降低复检率，重新设定的复检规则如表4。

表4 修改后 SYSMEX XN9000 血液分析流水线计数与分类复检规则

2.3 修改后复检规则验证结果修改规则后重复以上验证步骤，验证结果见表5。据统计显示，该规则验证结果复检率为23.3%，假阴性率为4.0%，小于国际血液学专家组确定的5%的最大可接受限。2例假阴性标本中1 例为PLT 聚集，1 例为中性粒细胞77%，嗜酸性粒细胞8%未触发复检规则，而镜检结果中性粒细胞82%，嗜酸性粒细胞4%。无恶性疾病漏检。此规则满足该实验室的复检要求，可应用于临床。

表5 修改后复检规则验证结果（n=300）

3 讨 论

近年来，许多仪器厂家相继推出了自己的血细胞分析流水线。它不仅能提高检测效率，还同时具备制备血片和阅片功能。据报道，自动数字细胞图像分析技术预分类外周血白细胞与人工再分类中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的符合率可达到90%以上，嗜碱性粒细胞的符合率可达80%以上，未成熟粒细胞、有核红细胞符合率仅有 55%左右［2，3］。由此可见，虽然多数类别细胞的正确识别率很高，但是也有部分细胞无法正确辨别。人工显微镜复检细胞形态仍然是不可替代的形态检查手段。鉴于此，验证血细胞分析仪的复检规则必须由有经验的主管技师以上的工作人员通过人工显微镜检查来完成。希森美康XN9000 流水线已经过多家实验室大批量标本的验证，并且已经在很多实验室成熟应用［4］。但是引用到实验室时仍需要根据自身实验室的要求对厂家的复检规则进行验证。

该研究采取双盲法人工显微镜检查法对希森美康XN9000 血细胞分析仪流水线厂家推荐的20条复检规则进行验证。验证结果显示复检率为28%，假阴性率高达14.3%，远高于国际血液学专家组确定的5%的最大可接受限定。对假阴性结果进行分析，发现其主要原因为有幼稚粒细胞的标本（仪器的IG 参数），仪器有报警提示，但没有将这条提示作为复检规则。因此，复检规则中需要增加IG这一条以降低假阴性，筛选出有幼稚粒细胞的标本。同时将白细胞计数和MCV 的复检下限略微下调，以降低复检率。调整规则后重新验证，结果显示复检率为23.3%，假阴性率为4.0%，同时假阴性中未漏检原始细胞，该规则验证通过。

随着全自动血细胞分析仪的不断发展，仪器在鉴别细胞形态和结构方面的能力也得到很大改进。希森美康XN9000 全自动血细胞分析仪对白细胞分类通道的试剂和分析系统进行了改良，能更清晰的区分单核细胞群和淋巴细胞群，减少单核细胞和淋巴细胞的复检率。WNR 通道增加有核红细胞报告参数，可自动修正白细胞计数和分类，降低复检率并防止漏检［5，6］。即便如此，为了避免病理标本的漏检及错误报告的发放，实验室仍必须要执行人工镜检。要想尽可能的平衡工作的质量和效率，就需要制定一个准确的、合适的复检规则。这其中，假阴性率是制定复检规则的关键参数，具有诊断意义的重要参数不能出现假阴性，其他参数的假阴性率应该小于国际血液学复审协作组认定的5%的最大可接受限［7］。该验证显示，仪器商没有将仪器的 IG 参数设定为复检规则，导致出现了过多的假阴性病例；同时白细胞总数的复检低限设置偏高导致了复检率过高。调整后的复检规则经再次验证后，假阴性和复检率都能到达要求，实验室最终确定了这21条复检规则。