生大黄、清蒸熟大黄与熟大黄炮制品总黄酮含量的比较研究∗

苏华珍，谢 臻，魏江存，谭亲友，罗昱澜，钟 文△，黄冬美

1 桂林医学院附属医院，广西 桂林 541001；2 广西国际壮医医院

大黄Rheumofficinale Baill.是我国特产中药之一，包括45个品种和2个亚种，其中只有唐古特大黄、正品大黄和药用大黄的根茎及干燥根［1］可作为药用大黄，已经载入《中华人民共和国药典》2015 年版。大黄适宜内服外用，能攻邪、能止血、能通阻、能解毒，在祖国医学中药方中为常用药物［2］。早在秦汉时期，《神农本草经》就将其列为中品，后在明代李时珍编写的《本草纲目》中也有记载［3］。临床上应用的饮片常有大黄炭、醋大黄、熟大黄、生大黄及酒大黄［4-5］。就泻下而言，酒制后其苦寒泻下的作用稍微缓和，以分解热毒，清上焦血作用为主；醋制后消积化瘀作用显著而泻下作用较弱；大黄炭以凉血化瘀作用显著而泻下作用甚微［6-8］。可知不同饮片的化学成分、药效性能及临床作用因其炮制的方法、温度、时间、辅料的改变而改变。研究表明［9］，大黄具有止血作用的主要药效成分是鞣质中含有的没食子酸和儿茶素；大黄中的蒽醌含量密切影响其泄下、解热作用［4，10-13］。大黄素及大黄酸具有显著的利尿作和抗炎作用。以往的研究多是对生大黄及大黄炮制品前后蒽醌类的成分含量的研究［4，14-15］。中药炮制后，药性改变，毒副作用降低［16-18］。

总黄酮是黄酮类化合物的总称，黄酮类化合物与糖结合形成苷，具有良好的镇痛消炎作用。以往研究对炮制前后大黄总黄酮类成分含量差异性比较研究较少。本研究采用紫外-可见分光光度计法对生大黄与熟大黄炮制品的总黄酮含量进行测定，明确其两种不同炮制品的总黄酮含量是否发生了变化，为其质量评价标准研究提供试验依据。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器UV1780 型紫外分光光度计［岛津仪器（苏州）有限公司］；电子分析天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；DHG-9203A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）；HWS-26 型电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）；SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；纯水仪（法国，密理博）；TGL-16G型高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2 试药与试剂中药饮片大黄（产地：四川，广东康美药业有限公司，批号：170307001），经广西中医药大学药用植物教研室李斌副教授鉴定，中药大黄为蓼科植物药用大黄的根茎。清蒸熟大黄和熟大黄按照2015 年版《中华人民共和国药典》（四部）炮制通则（0213）和相关参考文献自行炮制。芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100080-201106）；甲醇、乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号分别为20180603、20170327）；磷酸（国药集团化学试剂有限公司，批号：20170502）；亚硝酸钠（天津博迪化工股份有限公司，批号：20180806）；硝酸铝（天津市大茂化学试剂厂，批号：20170510）；氢氧化钠［重庆川东化工（集团）有限公司，批号：20170905］；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品溶液制备精密称取大黄药材粉末1.0 g，置具塞锥形瓶中，加体积分数70%的乙醇30 mL，称取质量，超声2 h 后，补重，过滤，取续滤液8 mL 转入100 mL 容量瓶中，用体积分数为70%的乙醇进行定容，摇匀，即得用于测总黄酮含量的大黄样品溶液［19-20］。

2.2 线性方程的制定精密称取芦丁对照品11.96 mg，加体积分数为70%乙醇溶解，定容至50 mL容量瓶中，摇匀，得到浓度为0.2392 mg/mL的芦丁标准品溶液，分别取芦丁标准品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mL于10 mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.4 mL，放置6 min后，再加0.4 mL10%硝酸铝摇匀，放置6 min后，再加4 mL4%的氢氧化钠，加水至刻度，摇匀，室温静置15 min，然后分别在最优波长508 nm进行测定。得出结果以吸光度对浓度做线性方程为y=11.125x+0.030 8，r=0.999 2，可得出线性浓度范围在0.004 784～0.095 68 mg/mL，此范围表明浓度与吸收度呈现良好的线性关系［21］。

2.3 精密度试验精密称取生大黄1.0 g，按“2.1”项下操作步骤制备供试品，按标准曲线的制定项下相同的方法显色测定（每间隔5 min测1次，连续进样6次）。于508 nm波长处连续进样6次测定其吸光度，测定结果RSD 值为2.46%，表明该方法精密度良好。

2.4 稳定性试验精密称取大黄1.0 g，按“2.1”项下操作步骤制备供试品，测定同一供试液在不同时间下的吸收度，按于508 nm 波长处平行测定其吸光度，分别在0、10、20、30、40、60 min 测定吸光度，计算大黄的RSD值为2.91%，结果表明，吸收度值在60 min内基本不变。可见在60 min内样品稳定。

2.5 重复性试验精密称取6 份大黄样品1 g，按“2.1”项下操作步骤制备供试品，制备6 份供试品溶液，依法测定，于508 nm波长处平行测定不同供试液在相同显色时间下的吸收度，计算大黄总黄酮的含量，其中生大黄含总黄酮221.58 mg/g，清蒸熟大黄含总黄酮215.64 mg/g，熟大黄含总黄酮190.82 mg/g，RSD值分别为1.98%、2.63%和2.84%，表明该方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验精密量取已知总黄酮含量的供试品溶液6 份，每份0.5 mL 于10 mL 容量瓶中，精密加入适当的芦丁对照品，于508 nm波长处依法提取、平行测定其吸光度，计算总黄酮的含量。生大黄平均回收率为98.91%，清蒸熟大黄平均回收率为98.86%，熟大黄平均回收率为99.97%，其RSD 分别为2.07%、2.62%和2.92%（n=6）该方法回收率良好。见表1—3。

表1 生大黄加样回收率试验结果

2.7 样品含量测定精密称取大黄药材粉末1.0 g，置锥形瓶中，加30 mL体积分数70%的乙醇，称重并进行记录，超声2 h 后，补重，过滤，取续滤液8 mL 于100 mL 容量瓶中，用70%乙醇定容，摇匀，即得大黄样品溶液。精密吸取大黄样品溶液1.0 mL，转入10 mL 容量瓶中，按样品测定方法操作，测定不同供试液在相同显色时间下的吸收度；将所测得数据代入标准曲线进行计算。见表4。

表4 大黄不同炮制品含量测定结果

表2 清蒸熟大黄加样回收率试验结果

表3 熟大黄加样回收率试验结果

3 讨论

生大黄和黄酒搅拌均匀焖润后蒸制就变成了熟大黄，熟大黄的泻下作用稍微降低，而生大黄直接在蒸笼蒸制炮制为清蒸熟大黄后，其泻下作用几乎没有什么变化。不同的炮制方法对大黄的成分产生一定的影响，进而改变大黄的疗效及药性，因此分析研究不同的大黄炮制品成分，可更加深入认识大黄及其炮制品［22-23］。不同的炮制方法对大黄总黄酮含量有明显的影响。由于蒸制时间、高温和辅料（黄酒）等原因，熟大黄总黄酮和总蒽醌含量会明显下降。生大黄、清蒸熟大黄的总黄酮含量较熟大黄稍高，生大黄和清蒸大黄由于炮制条件相对缓和，其成分变化相对较小［24］。大黄炮制条件的不同对其鞣质含量也会产生一定的影响，鞣质含量在生大黄和清蒸熟大黄中相对较高，但在熟大黄中明显下降，这与炮制过程中温度、辅料、炮制时间等条件有关［25］。炮制大黄时，由于炮制温度较高及其辅料的影响，鞣质、蒽醌类含量受到影响，甚至出现其他成分的变化，从而导致药效的改变［26］。

在中药的提取工艺中广泛运用了超声技术，尤其在总黄酮的提取中应用尤多［27］，可以有效优化从药材提取总黄酮的提出率。超声技术提取药材通常在常温下操作，避免了黄酮由于高温引起的分解。超声波使得浸提过程能耗低、效率高，同时被浸提的物质在一定时间内不被破坏，具有稳定的生物活性，由此可保证在结构改变的情况下，研究药理活性时结论的正确性。

综上所述，经过不同的炮制方法对中药大黄进行炮制，其成分会发生一定的变化，在临床应用中应根据患者的具体情况使用不同的炮制品。