痹祺胶囊对实验性骨关节炎大 鼠 NO、HYP 的 影 响*

许 放，师咏梅，柳占彪，钟文婕

（天津中医药大学中医药研究院，天津 300193）

痹祺胶囊对实验性骨关节炎大 鼠 NO、HYP 的 影 响*

许 放，师咏梅，柳占彪，钟文婕

（天津中医药大学中医药研究院，天津 300193）

[目的]观察痹祺胶囊对实验性大鼠膝骨关节炎（OA）一氧化氮（NO）、羟脯氨酸（HYP）的影响。[方法]选Wistar大鼠，木瓜蛋白酶膝关节注射造模，痹祺胶囊灌胃治疗8周，测定血清NO、HYP和尿HYP的含量。[结果]模型组造模后第1天尿HYP明显升高[（17.07±4.10）mg/L]，第15天[（9.92±3.09）mg/L]和第64天[（13.77±1.32）mg/L]与正常组无明显差异。模型组大鼠血清NO含量明显升高（22.64μmol/L）；痹祺胶囊高、中治疗组能明显降低大鼠血清NO含量（18.24μmol/L和19.14μmol/L）。[结论]痹祺胶囊具有降低OA大鼠血清NO的含量，减轻由NO介导的对关节软骨的损伤作用。

骨关节炎；痹祺胶囊；一氧化氮；羟脯氨酸

骨关节炎（OA）是以关节软骨损伤为特征的退行性关节疾病，其发生发展与一氧化氮（NO）的调控有关。软骨基质主要由胶原和蛋白多糖组成，当发生骨关节炎时，胶原的最终代谢产物羟脯氨酸（HYP）和炎症细胞因子一氧化氮水平发生明显变化。痹祺胶囊由党参、丹参、白术、茯苓、马钱子等组成，具有益气养血，祛风除湿、活血止痛的功效，是治疗骨关节炎的有效方剂。前期研究结果表明[1]，痹祺胶囊对大鼠关节软骨组织的坏死具有一定的保护作用，但作用机制不清。为了探讨痹祺胶囊保护关节软骨的作用机制，在前期研究的基础上，本实验观察了OA大鼠尿中羟脯氨酸的变化及痹祺胶囊对OA大鼠血清一氧化氮含量的影响。

1 实验材料

1.1 动物 50只雄性Wistar大鼠，体质量（180±10）g，购自天津市山川红实验动物科技有限公司。许可证号：SCX K（津）2009-0001。生产批号：20100425。

1.2 药物 痹祺胶囊：天津京万红药业股份有限公司（批号：301510）。木瓜蛋白酶（Papain）：博士德公司进口分装（sigma）（批号：118K1465）。

1.3 试剂 水合氯醛：成都市科龙化工试剂厂（批号：20081206）。一氧化氮试剂盒：南京建成生物工程研究所（批号：20100513）。羟脯氨酸（HYP）试剂盒：南京建成生物工程研究所（批号：20100513）。

1.4 仪器 FlexStation 3多功能微孔分析仪，CisBio公司生产。LDZ5-2离心机，北京京立离心机有限公司生产。HH-S数显恒温水浴锅，金坛市岸头实验仪器厂生产。

2 实验方法

2.1 造模 参照文献[2]方法造模。选雄性Wistar大鼠，体质量（180±10）g，按 3mL/kg腹腔注射 10%的水合氯醛，麻醉后，大鼠双侧膝关节注射4%木瓜蛋白酶。

2.2 分组及给药 选成功模型大鼠40只，按随机数字表法随机分为模型组、痹祺胶囊1.296、0.648、0.324 g/kg剂量组，每组10只。另取10只，作为正常组。痹祺胶囊治疗组分别按不同的剂量灌胃给药，连续治疗8周，正常组和模型组灌胃等量生理盐水。

2.3 取材 在造模成功后的第1周和2周，分别采集大鼠12 h尿液，3 000 r/min，离心10min，取上清液，按照试剂盒说明书测定尿HYP含量。治疗8周后，麻醉，腹主动脉取血，3 000 r/min离心10min，取血清4℃保存；测定血清NO和HYP的含量。

2.4 统计方法 所得数据应用SPSS11.5软件统计，计量资料用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 痹祺胶囊对OA大鼠尿HYP的影响 见表1。

表1 痹祺胶囊对OA大鼠尿HYP的影响（±s）Tab.1 Effectof Biqicapsuleon the HYPof urine in rats with osteoarthritis（±s）mg/L

表1 痹祺胶囊对OA大鼠尿HYP的影响（±s）Tab.1 Effectof Biqicapsuleon the HYPof urine in rats with osteoarthritis（±s）mg/L

注：与正常组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 n 造模（第1天）造模（第64天）正常组 10 10.51±1.50 10.96±1.72 15.10±4.00模型组 10 17.07±4.10* 9.92±3.09 13.77±1.32痹祺 1.296 g/kg 10 17.64±4.02** 9.21±1.15 14.25±0.98痹祺 0.648 g/kg 10 17.16±4.66* 9.88±1.59 14.84±1.14痹祺 0.324 g/kg 10 18.27±7.82** 11.19±3.18 15.40±1.54造模（第15天）

由表1结果可知：模型组和痹祺胶囊各治疗组大鼠尿羟脯氨酸含量在造模后第1周内均明显升高（P<0.01），从第2周起至第9周恢复到正常水平，与正常对照组均无明显差异（P>0.05）。

3.2 痹祺胶囊对OA大鼠血清Hyp、NO的影响见表2。

表2痹祺胶囊对OA大鼠HYP、NO的影响（±s）Tab.2 Effectof Biqicapsule on serum HYP and NO in ratswith osteoarthritis（±s）

表2痹祺胶囊对OA大鼠HYP、NO的影响（±s）Tab.2 Effectof Biqicapsule on serum HYP and NO in ratswith osteoarthritis（±s）

注：与正常组比较：*P＜0.01；与模型组比较：▲P＜0.01。

组别 n 血清HYP(mg/L) 血清NO(μmol/L)正常组 10 15.10±3.99 17.17±2.21●●模型组 10 13.77±1.32 22.64±3.80*痹祺 1.296 g/kg 10 14.25±0.98 18.24±1.89▲痹祺 0.648 g/kg 10 14.84±1.14 19.14±1.94▲痹祺 0.324 g/kg 10 15.40±1.53 22.64±1.67*

由表2结果可知：各组血清羟脯氨酸无明显变化（P>0.05）。模型组大鼠血清NO含量明显高于正常组大鼠（P<0.01），痹祺胶囊 1.296、0.648 g/kg剂量组血清NO含量明显降低，与模型组差异有统计学意义（P<0.01）。结果表明，痹祺胶囊能降低模鼠血清NO含量，减轻由NO介导的对关节软骨的损伤作用。

4 讨论

木瓜蛋白酶是一种含疏茎（－SH）肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，对动蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，应用木瓜蛋白酶复制骨关节炎动物模型已是公认的实验方法[3]。关节软骨由蛋白多糖和胶原组成，在生理情况下，蛋白多糖和胶原的分解代谢与合成代谢维持平衡，将木瓜蛋白酶注入关节后，可分解软骨基质的胶原蛋白，破坏软骨基质，使尿中胶原的最终分解产物羟脯氨酸排出增多。另外，由于雌激素与骨关节炎的发病率呈负相关[4]，为排除雌激素对模型的影响，本实验选用了雄性大鼠。

Grabowski等[5]研究证实人类关节中的软骨母细胞在体外培养中并无NO产生，只要加入炎性细胞因子，如白介素-1α（IL-1α）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）等，就会激活软骨母细胞中的一氧化氮合酶（iNOS）而产生大量NO。OA时，滑膜中丰富的血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等在炎性细胞因子的刺激下都可产生大量的NO[6]。邵欣欣等[7]研究结果证实：炎性细胞因子可诱导出高水平的NO，NO可通过抑制软骨细胞增殖，抑制关节软骨细胞Ⅱ型胶原的合成，通过激活金属蛋白酶和环氧合酶，促进胶原降解，造成对关节软骨的破坏。经研究痹祺胶囊对关节软骨的坏死具有一定的保护作用[8]。中医认为本病发生的关键在于肝肾亏虚、正气虚弱，痹祺胶囊可能是通过它的益气养血功能，减轻OA的炎症反应，使炎性细胞因子的分泌减少，从而减少了由其刺激产生的NO，减轻了由NO介导的对关节软骨的损伤作用。

[1]柳占彪，师咏梅，许 放，等.痹祺胶囊对大鼠膝骨性关节炎软骨组织影响的病理形态观察[J].天津中医药，2010，27（4）：318－319.

[2]Murat N,Karadam B,Ozkal S,et al.Quantification of papain-induced ratosteoarthritis in relation to timewith the Mankin score[J].ActaOrthop Traumatol Turc,2007,41(3):233-237.

[3]吴 雷，黄朝梁.骨关节炎动物实验模型的研究进展[J].现代医药卫生，2007，23（12）:1742-1743.

[4]Gokhale JA,FrenkelSR,DicesarePE,etal.Estrogenandosteoarthritis[J].Am JOrthop,2004,33(2):71-80.

[5]Grabowski PS,Macpherson H,Ralston SH,et al.Nitric oxide production in cells derived from the human joint[J].Br JRheumatol,1996,35(3):207-212.

[6]Rediske JJ；Hoehne C F；Zhang B,et al.The inducible production of nitric oxide by articular cell types[J].Osteoarthritis Cartilage,1994,2(3):199-206.

[7]邵欣欣，田得祥，于长隆，等.一氧化氮抑制兔关节软骨细胞Ⅱ型胶原的合成[J].中国运动医学杂志，2001，20（1）：31－34.

[8]柳占彪，师咏梅，许 放，等.痹祺胶囊对大鼠膝骨关节炎软骨组织影响的病理形态观察[J].天津中医药，2010，27（4）：318-321.

Effectsof Biqicapsuleon NO and HYP levels in ratswith Osteoarthritis

XUFang,SHIYong-mei,LIUZhan-biao,etal
（Research Instituteof TCM,Tianjin Universityof TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]Toobserve the effectofBiqicapsuleon the Nitric oxide(NO)and hydroxyproline(HYP)in ratswith osteoarthritis.[Methods]Wistar rats were used.Papain was injected into their knee joints to establish the animalmodel of osteoarthritis.They were treated with Biqicapsule through intragastric administration for 8 weeks.The contents of NO and HYP in serum and HYP in urinewere detected.[Results]The contentsofHYP in urinewereobviously increased inmodelgroup in the firstday[(17.07±4.10)mg/L,P<0.05],andwerenormalin the fifteenth day and sixty-fourth day[(9.92±3.09)mg/L,(13.77±1.32)mg/L,P>0.05].The contentsofNO in serum were obviously increased(22.64μmol/L,P<0.01)inmodelgroup.In treatmentgroup the contentsofNO in serum were decreased by Biqicapsule,1.296 g/kgand 0.648 g/kg(18.24μmol/Land 19.14μmol/L,P<0.01).[Conclusion]BiqiCapsule can decreaseserum contentsofNO in OA rats,and ameliorate the NO-mediated damage of the cartilage in joint.

osteoarthritis;Biqicapsule;NO;HYP

R289.5

A

1672-1519(2011)03-0237-03

国家科技支撑计划项目（2007BAI47B04）。

师咏梅（1981-），女，在读硕士，主要从事中药药理研究。

柳占彪。

2011-03-02）