5-Aza-CdR与低浓度CDDP联合用药对胃癌细胞系生长及DAPK1的影响

王贺玲，张 健，李 岩，王学清

顺铂(CDDP)作为治疗多种实体瘤的临床一线用药，是胃癌的常用化疗药物。其作用类似烷化剂，主要通过特异结合DNA，使链内及链间发生交链，干扰DNA复制、RNA及蛋白质的合成［1-5］。5-Aza-CdR是明确的去甲基化药物，能与DNA甲基转移酶共价结合，降低DNA甲基转移酶的生物活性，以进一步使基因去甲基化，使失活基因重新表达。本文通过对低剂量顺铂与5-Aza-CdR联合用药，观察两者对胃癌细胞生长及DAPK1基因的影响，探讨5-Aza-CdR是否能够作为一线化疗药物顺铂的辅助用药，使该药物在较低剂量时发挥较大的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 BGC823细胞系购自中国医科大学细胞生物教研室，5-Aza-CdR及碘化丙啶(PI)为Sigma产品，顺铂(CDDP)为贵州汉方制药有限公司产品。RT-PCR试剂盒购自TaKaRa公司，RPMI 1640培养基为Hyclone产品，Taq酶及dNTP均为TaKaRa公司产品。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 CDDP与5-Aza-CdR联合用药对胃癌细胞的影响:胃癌BGC823、SGC7901细胞培养于含10%胎牛血清、1%链霉素，青霉素的RPMI1640培养液于37℃、50 mL/L CO2条件下培养。

1.2.2 MTT检测细胞生长活性 (1)CDDP对胃癌细胞的影响:取处理前的对数生长期的细胞，按每孔2×103(200 μL)接种于96孔板，共接种5板，每组6孔。接种24 h后去上清液，加入含CDDP(1×10－6mol/L)的培养液继续放入 CO2孵箱，在37℃、5%CO2及饱和湿度下继续培养，以后在24、48、72 h各时间点分别取一板，每孔加入MTT 溶液(5 mg/mL)20 μL，继续培养4 h。终止培养，去除孔内上清液，每孔加入150 μL DMSO，震荡10 min，选择570 nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值(A)，其增殖能力大小以平均吸光度(A)值分析。以未加CDDP干预的细胞为对照组。(2)CDDP与5-Aza-CdR联合用药对胃癌细胞生长的影响:将胃癌细胞传代24 h后，加入含5-Aza-CdR(1×10－6mol/L)的……