基质金属蛋白酶蛋白在百草枯致肺纤维化大鼠肺组织中表达及其意义

杜妍，肖莉

（中国医科大学附属盛京医院急诊科，沈阳 110004）

百草枯（paraquat，PQ）为有机杂环类接触性脱叶剂及除草剂，对人有较强毒性，目前中毒机制尚不明确，无特效治疗方案。基质金属蛋白酶家族（matrix metalloproteinases，MMPs）是一类主要降解细胞外基质成分的蛋白酶，在生理和病理过程中发挥着重要的作用。近年来随着研究的深入，发现MMP3、MMP8与肺纤维化有着密切的联系［1］。研究发现腹腔注射百草枯可致大鼠肺纤维化，此病理过程与人类百草枯致肺纤维化过程极其相似，因此，本实验研究百草枯对肺组织病理改变的影响，进一步研究MMP3、MMP8在百草枯致急性肺损伤及纤维化肺组织中的表达及其意义。

1 材料与方法

1.1 材料

雄性SD大鼠购自中国医科大学附属盛京医院实验动物中心。百草枯（99.99%，货号：856177-1G）购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司。MMP3（货号：bs-0413R）、MMP8（货号：bs-1913R）抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.2 动物模型的建立、分组及标本处理

雄性 SD 大鼠40只，SPF 级，体质量（295±20）g，随机分为模型组（PQ组）和盐水对照组（NS组），每组20只。NS组一次性腹腔注射生理盐水8.5 mL/kg。PQ组一次性腹腔注射百草枯15.0 mg/kg。分别于给药后5 d、28 d处死动物，HE染色观察肺纤维化程度，免疫组化法观察各组动物MMP3、MMP8蛋白表达。

1.3 肺泡炎症、肺纤维化程度判断

肺组织石蜡切片HE染色，在光学显微镜下观察肺组织病理学改变。按照Szapiel等［3］的方法评价肺组织病理变化严重程度，评分标准如下：无肺泡炎或无纤维化且肺组织受累面积为0记为“-”；轻度肺泡炎或纤维化且肺组织受累面积<20%记为“+”；中度肺泡炎或纤维化且肺组织受累面积20%～50%记为“++”；重度肺泡炎或纤维化且肺组织受累面积>50%记为“+++”。

1.4 免疫组化法检测肺组织MMP3、MMP8蛋白表达

肺组织石蜡切片常规脱蜡至水，然后按免疫组化试剂盒说明书进行操作。……