吴介恒,卢兴兵,李荣妍,吕智慧,黄莎圆子,刘梦娜,郭素红
(吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013)
胰腺癌是一种恶性程度很高且以早期转移为突出特征的肿瘤,其发病率在近年呈逐年上升趋势。临床上尚无经济、有效的早期发现方法[1-2]。 而造模是研究胰腺癌的基础,因此建立合适的人胰腺癌动物模型对胰腺癌的治疗研究起着十分重要的作用[3]。但目前仍没有一种完全可行的胰腺癌动物模型的制作方法。本文通过对SD雄性大鼠每天灌服硫唑嘌呤(AZA),皮下移植胰腺癌细胞的方法,来寻找最适合成瘤的AZA浓度,从而建立一种成瘤率高、操作简单方便的胰腺癌造模方法。
1.1材料 (1)实验动物及细胞株:清洁级,雄性SD大鼠40只,体质量 180~200 g,购自吉林大学动物实验中心;Mia PACAⅡ胰腺癌细胞株由吉林医药学院检验学院馈赠。(2)实验用品:DMEM低糖培养基、0.25%胰酶-EDTA购自Gibco公司;新生胎牛血清购自杭州四季青公司;大鼠CA24-2 ELISA 96T试剂盒购自美国R&D公司;一次性真空采血管(EDTA-K2抗凝)购自湖南浏阳三力集团;CO2培养箱、倒置显微镜、血细胞计数板、微量天平由吉林医药学院检验学院提供。(3)AZA:购自上海医药(集团)有限公司。
1.2方法
1.2.1细胞培养 将刚复苏的Mia PACAⅡ胰腺癌细胞接种在含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素及0.1 mg/mL链霉素的DMEM低糖培养基中,培养于37 ℃、5%CO2培养箱中,平均每3~4 d传代1次处于对数生长期Mia PACAⅡ细胞见封2图1。
1.2.2动物实验分组 采用完全随机化设计的原则,按照AZA的浓度梯度对所购买的40只SD大鼠进行分组:空白对照组(A组)、2.6 mg/kg AZA组(B组)、2.2 mg/kg AZA组(C组)、1.8 mg/kg AZA组(D组)、1.4 mg/kg AZA组(E组),每组8只。……