不同低氧分压对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的影响*

彭 涛，黄 姣，徐 凌

(1.重庆市黔江中心医院口腔科 409000；2.重庆市口腔疾病与生物医学研究中心/重庆医科大学附属口腔医院牙周黏膜科 401147；3.重庆市口腔疾病与生物医学研究中心/重庆医科大学附属口腔医院修复科 401147)

骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells，MSCs)，由于其特有的成骨分化潜能，因而在骨组织工程领域中备受关注[1-2]。但是在组织工程实际应用中，做为种子细胞移植入缺损处后，因为没有血管化的同步形成，最初处于一相对低氧环境中，因此研究MSCs的增殖和分化是否受缺氧或低氧环境影响具有重要的意义。近年有研究也发现，间充质源性细胞均属于氧感应细胞。本实验通过建立低氧-细胞培养模型，探讨不同低氧分压微环境对MSCs增殖及成骨向分化的影响，为后续的进一步研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1主要材料与仪器 (1)主要材料：α-MEM培养基(Gibco，美国)，胰蛋白酶、EDTA、牛血清清蛋白(BSA)，考马斯亮蓝(Sigma，美国)，胎牛血清(Hyclone，美国)，MTT试剂(Gibco，美国)，二甲基亚砜(分析纯，中国)，兔抗鼠SH3、CD34、CD44、CD54、CD105抗体，兔抗鼠Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)抗体，生物素化山羊抗兔抗体(BOSTER，中国)，DAB(北京中杉金桥生物技术公司，中国)。(2)主要仪器：25 cm2培养瓶、6孔培养板、96孔培养板(Corning，美国)；CO2孵育箱(Sanyo，日本)、Heraeus三气细胞培养箱(Pierce，德国)、倒置相差显微镜(Olympus，日本)、碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(北京柏定生物工程有限公司)、Leica显微镜(德国)、图像分析系统Image-Pro Plus 4.5(Media，美国)、HTS7000plus多孔板高效分析仪(PE，美国)。

1.2方法

1.2.1细胞来源和培养 取雄性4周龄SD大鼠，引颈法处死，无菌条件下取大鼠股骨，切除两侧的股骨端，用针管吸取5 mL含10%胎牛血清的α-MEM培养基，冲出骨髓，将其接种于25 cm2培养瓶中，用巴氏吸管吹散细胞，然后置于5%CO2、37 ℃、饱和湿度条件的CO2培养箱中静置培养。……