H22肝癌小鼠择时服用人参皂甙抗氧化及免疫功能的实验研究

王 秀，何裕民

(1.皖南医学院 中西医结合研究中心，安徽 芜湖 241002;2.上海中医药大学 中医基础理论教研室，上海 201203)

人参性温大补，是扶正补益的代表药物，现代研究证实多种人参皂甙具有抗肿瘤作用［1，2］。现代时间生物学研究表明，人体的生理功能、病理变化具有昼夜节律变化，同样的药物在不同时间应用后，疗效也不相同。本课题以肝癌为模型，选取卯、酉二个时间点为用药时间，从抗氧化、免疫等方面对人参皂甙择时治疗肝癌进行探讨。

1 实验材料与方法

1.1 动物与瘤株 昆明种小鼠90只，雄性，(14±2)g，由上海斯莱克实验动物中心(合格证号:SCXK(沪)2003-0003)提供。小鼠H22肝癌腹水型细胞，购自上海麦莎生物科技有限公司，细胞复苏后注入小鼠腹中，腹水传代保存。

1.2 方法 将小鼠置于人工光照周期 LD12∶12(7∶00～19∶00时光照，19∶00～7∶00 时黑暗)，恒温恒湿，清洁级条件下常规饲养。2周后，采用H22肝癌细胞悬浮液进行右前肢皮下接种造模，造模后继续在人工光照环境下喂养。待瘤体长至0.5 cm左右，随机分组，一组为正常组，一组为模型组，余组为择时用药组，每组10只小鼠。用药组予以人参皂甙溶液灌胃［25 mg/(kg·d)］，正常组、模型组予以生理盐水灌胃。用药10 d后取血，离心取上清，－20℃保存待测。小鼠处死后，解剖取脾脏、胸腺称重，并剥取肿瘤，称重后，取肿瘤组织－80℃保存备用。

1.3 造模方法 抽取腹腔传代小鼠腹水，1 000 r/min，离心5 min，弃上清，收集细胞，用 PBS液清洗两次后，取中上层细胞，以生理盐水调整细胞密度为3×107/ml，于昆明种小鼠右侧前肢腋下行无菌皮下接种，接种量为每只0.2 ml细胞悬液，每只小鼠接种的细胞总数为6×106个。……