补气化痰方对心肌梗死模型大鼠心功能及血管新生的影响

郜俊清,陈 ,于宏梅,孙剑光,赵德强

(上海中医药大学附属普陀医院,上海200062)

心肌梗死目前国际公认的治疗方案是尽早行血管再灌注治疗。直接PCI为国际公认的最快最直接挽救濒死心肌的方法之一,但是梗死相关血管支配心肌的受损甚至死亡对心功能及患者预后有不可逆的危害,因此对于最大程度挽救梗死相关血管支配的受损心肌是目前心肌梗死治疗的一大课题。《金匮要略》中阐述瓜蒌薤白半夏汤主治痰盛瘀阻型胸痹,而真心痛的病机多气虚,兼有痰浊瘀阻,故课题组在经典方的基础上,增加黄芪,补气以行气,使经典组方既具备化痰祛邪的作用,又具有补气扶正的作用。

1 材料与试剂

1.1 动物 选择清洁级SD大鼠 50只,体质量(220±20)g,由上海松连实验动物养殖场提供(批准号:SCXK沪2008-0016)。

1.2 药物 补气化痰方:黄芪50 g,瓜蒌12 g,薤白12 g,半夏9 g,大火煮沸后小火继续烧20min,将药液浓缩至100 mL,根据大鼠与人体体表面转换,大鼠需要服药剂量为0.9mL/100 g。将50 mg氯沙坦钾溶解于100 mL生理盐水中,氯沙坦钾组以0.9 mL/100 g服用。各组每天分2次灌胃,每次用生理盐水稀释至2 mL进行灌胃,模型组与正常组进行同剂量生理盐水灌胃。造模后连续灌胃30 d。

1.3 试剂 小动物超声仪(VISUALSONICS上海中山医院),荧光倒置相差显微镜(Olympus CKX41),低速离心机(eppendorf centrifu ge5702),CD31一抗(Abcam),CD31二抗(Abcam),免疫组化洗涤液(碧云天),免疫组化封闭液(碧云天)。

2 方法

2.1 大鼠心肌梗死模型 进行1 w适应性饲养后,进行随机分组,除正常组以外的SD大鼠在2.5%戊巴比妥腹腔麻醉下,于第四肋骨间切开胸腔,分离出大鼠心脏,结扎冠脉前降支(LAD)近端,缝合伤口。正常组大鼠仅切开胸腔,暴露心脏后,关闭胸腔,缝合伤口。所有大鼠术后15万u青霉素肌注3 d。

2.2 分组干预 共分为5组,治疗组(黄芪瓜蒌薤白半夏汤组),中药对照组(瓜蒌薤白半夏汤组),西药对照组(科素亚组),模型组(仅进行心梗造模),正常组(假手术组),每组12只大鼠,共60只大鼠。干预组在术后当天灌胃干预,模型组与正常组给予相应剂量生理盐水。

2.3 统计方法 采用统计软件SPSS 17.0对实验数据进行分析,结果以( x±s)表示,统计学处理用方差检验,以P<0.05为有统计学意义。

3 结果

3.1 心肌梗死造模及模型大鼠存活率结果 造模24 h内,治疗组2只大鼠死亡,中药对照组2只大鼠死亡,其他各组各有1只大鼠死亡。48 h内,治疗组累计3只大鼠死亡,中药对照组3只大鼠死亡,其他各组各有2只大鼠死亡。48 h后各组未出现死亡大鼠。48 h之内大鼠存活率为:治疗组75%;中药对照组75%;西药对照组83.3%;模型组83.3%;正常组83.3%,总体存活率80%,各组间存活率差异无统计学意义。

3.2 补气化痰方对心肌梗死大鼠心功能的影响 5组在48 h后进行心脏超声检测,除正常组外,各组心脏EF,心脏前壁活动度明显下降,与正常组比较差异有统计学意义。28 d后,复查心脏超声,模型组较48 h EF明显下降,差异有统计学意义。前后比较EF下降值,治疗组较其他3组明显减少,见表1。

表1 各组48 h、28 d心脏超声情况比较

3.3 补气化痰方对心肌梗死大鼠心肌CD31表达的影响 28 d处死大鼠,取出心脏,取梗死区边缘存活心肌,切片,采用免疫组化的方法,进行CD31染色,在40倍光镜下观察计数CD31染色数目即微血管数目,见图1。

图1 补气化痰方对心肌梗死大鼠心肌CD31表达的影响

3.4 补气化痰方对心肌梗死大鼠肝肾功能的影响5组大鼠在28 d时,处死并取血,检测ALT、AST、BUN、Cr和UA,结果显示各组肝肾功能差异无统计学意义,见表2。

表2 补气化痰方对心肌梗死大鼠肝肾功能的影响

4 讨论

20世纪80年代以来急性心肌梗死治疗学的重大进展是再灌注治疗。大量研究表明,急性心肌梗死早期使血管再通,可明显降低病死率并改善幸存者左心室功能[1-2]。直接PCI为国际公认的最快最直接挽救濒死心肌的方法之一,但是梗死相关血管支配心肌的受损甚至死亡对心功能及患者预后有不可逆的危害,因此对于最大程度挽救梗死相关血管支配的受损心肌是目前心肌梗死治疗的一大难题。

无论是溶栓治疗、直接PCI治疗或者是急诊冠脉搭桥治疗,对于梗死血管支配的受损心肌的挽救具有一定局限性。医学研究者们采用溶栓结合直接PCI、干细胞治疗等多种方法试图最大限度挽救受损心肌,但是结果都不令人乐观。

心肌梗死中医称之为真心痛,早在《黄帝内经》中就有记载:“手足青至节,心痛甚……旦发夕死,夕发旦死。”汉代张仲景《金匮要略》中有胸痹心痛专篇,提出瓜蒌薤白半夏汤等作为真心痛、胸痹的治疗方法,奠定了真心痛的辨治基础。瓜蒌薤白半夏汤功效为行气解郁,通阳散结,祛痰宽胸。现代研究[3-5]显示,瓜蒌薤白半夏汤能改善冠脉内皮功能,从而防止心肌损伤,并可改善心绞痛症状,显著降低血脂。

本研究在经典方基础上,大剂量使用黄芪,补气化痰[6-7],旨在补气以行气,祛邪兼扶正。在大鼠心肌梗死模型中,补气化痰方未增加死亡率,且肝肾功能与对照组比较未见明显差异。在大鼠心肌梗死造模后48 h,各组大鼠心脏超声EF未见明显差异,在28 d后,补气化痰方组心脏EF下降较其他各组明显减缓,心功能较各组明显改善,差异具有统计学意义。在28 d大鼠心肌CD31染色中显示,补气化痰方组大鼠心肌CD31表达明显高于其他各对照组,提示补气化痰方具备促进血管新生的作用,其作用可能是改善大鼠心肌梗死后心功能的机制。

补气化痰方能有效提高心肌梗死大鼠心脏EF值,其可能的机制是促进梗死后血管新生从而改善心脏功能。

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