2939例临床患者CD4+CD8+T淋巴细胞检测结果的回顾性分析

唐甜，张子宁，傅雅静，王亚男，姜拥军，耿文清，郭晓临，尚红

（中国医科大学附属第一医院检验科，卫生部艾滋病免疫学重点实验室，沈阳 110001）

T淋巴细胞亚群是免疫系统重要组成部分，在免疫应答过程中发挥中枢作用。T淋巴细胞亚群通常分为2类：一类是CD4+CD8-T细胞表面仅表达CD4，具有辅助细胞免疫应答和体液免疫应答的作用；另一类是CD4-CD8+T细胞，表面表达CD8，具有细胞毒作用，可特异性杀伤靶细胞。正常人外周血中大部分为CD4或CD8单阳性T细胞，CD4+CD8+双阳性（double positive，DP）T细胞一般＆lt;5%［1］。通常认为，CD4+CD8+DP T细胞的形成是胸腺中尚未成熟的细胞释放到外周循环的结果。但近年的研究显示，相当数量的CD4+CD8+DP T细胞存在于人和动物的外周血循环中。尤其在某些病毒感染性疾病、肿瘤、自身免疫病中，CD4+CD8+DP T细胞显著增加。但这群细胞对于临床疾病辅助诊断的意义还不明确。我们通过调查中国医科大学附属第一医院2 939例内科患者以及2 722例健康对照T淋巴细胞亚群检测结果，分析CD4+CD8+DP T细胞在不同疾病和年龄患者中的变化情况，为进一步明确这类外周血淋巴细胞亚群对疾病的辅助诊断提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象：2012年1月至2012年9月首次来我院检测T淋巴细胞亚群的内科2 939例患者的全血样本以及健康对照2 722例全血样本。

1.1.2 试剂和仪器：试剂均购自BD Biosciences公司，包括CD4/CD8/CD3三色试剂、TruCount绝对计数管、10倍免洗溶血素。BD FACSCalibur流式细胞仪。

1.2 方法

将20 μL CD4/CD8/CD3 TriTEST试剂加入CD4绝对计数管中，采用反向加样的方法加入50 μL抗凝全血，室温避光15 min，加入免洗溶血素450 μL，室温避光15 min，应用BD FACSCalibur流式细胞仪，FACS MΜLTISET软件检测并进行自动分析，计算DP T细胞的百分含量（CD4+CD8+DP T细胞百分含量＆lt;5%判定为正常，反之判定为异常）［1］。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件包处理，组间差异比较采用Pearson χ2检验，P＆lt;0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 全部CD4+CD8+DP T细胞检测患者的疾病分布

2 939例临床患者中，肾脏疾病患者1 020例（34.7%），呼吸疾病患者556例（18.9%）、肿瘤患者479例（16.2%）、皮肤病患者294例（10.0%）、风湿免疫病患者262例（8.9%），感染疾病患者171例（5.8%），神经系统疾病患者91例（3.0%）和血液病患者66例（2.2%）。在这些患者中DP T细胞百分含量异常者共141例（4.8%），健康对照组中CD4+CD8+DP T细胞异常者共49例（1.8%），临床患者与健康对照比较CD4+CD8+DP T细胞异常显著升高（P＆lt;0.001）。

2.2 不同疾病中CD4+CD8+DP T细胞异常的比例比较

不同疾病中CD4+CD8+DP T细胞异常的例数与检测总数的比率由高到低依次为呼吸疾病、风湿免疫病、肿瘤、感染疾病、肾脏疾病和皮肤病。其中呼吸疾病的CD4+CD8+DP T细胞异常病例数量占检测总数百分比最高，为6.1%（34/556）；风湿免疫病为5.7%（15/262）；肿瘤为5.2%（25/479）；感染疾病为4.7%（8/171）；肾脏疾病为4.3%（44/1020）；皮肤病为3.7%（11/294）；神经系统疾病为3.3%（3/91）；血液病为1.5%（1/66）。呼吸疾病、风湿免疫病、肿瘤和肾脏疾病DP T细胞异常患者比例显著高于健康对照（P＆lt;0.001），感染性疾病和皮肤病DP T细胞异常患者比例也高于健康对照（P分别＆lt;0.01和＆lt;0.05）。神经系统疾病和血液病DP T细胞异常患者比例与健康对照组比较没有统计学差异（P＆gt;0.05）。

2.3 不同疾病各年龄组CD4+CD8+DP T细胞异常的比例比较

不同疾病CD4+CD8+DP T细胞检测结果异常的患者根据年龄分为2组：低年龄组（≤65岁）和高年龄组（＆gt;65岁）。由于感染疾病、神经系统疾病和血液病DP T细胞异常的病例数＆lt;10，因此未列入统计分析，仅把其余的6组进行分组比较。其中，总体患者高年龄组DP T细胞异常的比例与低年龄组比较差异有统计学意义（8.6%和3.9%，P＆lt;0.001），呼吸系统疾病患者、肿瘤患者的2个年龄组比较高年龄组DP T细胞异常比例也显著升高（分别为10.0%和3.8%；9.9%和3.8%，P＆lt;0.05），而健康对照高低年龄组间没有统计学差异（P＆gt;0.05），见表1。

表1 不同疾病中各年龄组CD4+CD8+DP T细胞异常患者比较Tab.1 Abnormal proportion of CD4+CD8+DP T cells among different age groups with different diseases

3 讨论

外周血CD4+CD8+DP T细胞是一种CD4和CD8共同表达的双阳性T淋巴细胞。关于这群细胞的来源尚不明确，以往认为此类细胞属于发育未完全的幼稚细胞进入到人体血液中。但是在一些动物研究中显示，此类细胞具有抗原特异性记忆的功能，能够产生疫苗诱导的记忆免疫应答［2，3］。此外，DP T细胞对于MHCⅠ和Ⅱ类抗原作用，可以分泌Th1和Th2类细胞因子，对疫苗和自限性病毒感染抗原产生快速免疫应答［4］。Suni等［5］研究使用特异性抗原（CMV和HIV）刺激DP T细胞，结果显示，DP T细胞具有抗原特异性和增殖活性，在特异性抗原刺激下分泌的细胞因子是CD4+T细胞的8倍。Nam等［3］研究猕猴外周血DP T细胞具有辅助型和细胞毒性两方面的功能，其细胞毒性活力与CD8+T细胞相当，机制主要是通过穿孔素—颗粒酶途径杀伤靶细胞。而人类DP T细胞的来源及功能特点尚不清楚，还需要进一步深入研究。

研究发现，自体免疫病（重症肌无力、类风湿性关节炎、多发性硬化［6］、特发性血小板减少性紫癜和过敏性皮炎［7］等）以及特殊感染性疾病（HIV［8，9］、EBV［10］和肿瘤［11～13］）DP T百分含量升高。本研究分析发现，DP T细胞百分含量升高的疾病（呼吸疾病、风湿免疫病、肿瘤、感染疾病、肾脏疾病和皮肤病）均与各种感染或免疫系统病变密切相关。这些疾病与健康对照比较，DP T细胞百分含量升高尤为明显，这与以前研究结果基本一致，即主要在感染性疾病、自体免疫病和肿瘤中DP T细胞的百分含量增高。

肺部感染性疾病在临床十分常见，特别是在免疫力相对低下的老年患者中，粗略判断感染的大致类型：细菌性感染、病毒性感染、细菌与病毒的混合性感染及寄生虫感染等。胡莉娜等［14］研究发现，71例患者中3例肺部感染患者只有双阳性T细胞绝对含量发生了改变，而其他指标均无变化，这些能有效提示患者出现了免疫系统的改变，有感染发生，提示检测DP T细胞对于急性呼吸系统感染性疾病的诊断具有重要意义。我们研究中发现34例DP T细胞比例异常的呼吸疾病患者中，肺部感染或合并感染占62%和17%，非感染类疾病仅占15%，可提示感染类疾病中DP T细胞百分含量显著增加。此外，这些患者中有4例平均年龄70岁的肺部感染患者只有双阳性T细胞绝对含量发生了改变，血常规检测白细胞、粒细胞和淋巴细胞比率均无增高。这可以有效提示患者出现了免疫系统的改变。老年肺部感染患者临床表现不典型，常不引起发热，1/3老年患者外周血白细胞计数无明显升高。由此也提示我们可通过检测淋巴细胞亚群DP T细胞百分含量升高预示肺部感染发生。另外，在一些呼吸系统疾病中，肾上腺糖皮质激素作为首选治疗或辅助治疗药物，这些药物可造成白细胞总数增高，淋巴细胞及嗜酸性粒细胞减少，因此检测DP T细胞有助于与细菌感染所致白细胞增高进行鉴别。因此认为此检测对疾病鉴别、治疗疗效和预后有着重要的临床意义。

还有些研究表明某些动物胸腺外DP T细胞的数量与年龄有关，如猪外周DP T细胞［15］、猕猴外周血DP T细胞［16］、鼠小肠DP T细胞都随年龄增长而增加［17］。Ghia等［18］研究提示随年龄增长，外周血DP T淋巴细胞不断累积，可能与免疫衰老的机制和淋巴细胞增殖紊乱相关。而在本研究中我们发现健康人群中DP T百分含量随年龄的增长升高不显著，但是在内科患者中（尤其是呼吸内科及肿瘤内科），DP T百分含量升高的比例随着年龄的增长明显。我们推测患者的DP T细胞具有一定的记忆功能和细胞毒性功能，这类细胞随着年龄的增长以及感染性疾病不断的累积显著升高。而在健康人中，缺乏对感染反应的免疫记忆细胞累积，因此升高不明显，也间接提示了DP T细胞的免疫记忆和细胞杀伤功能。

综上所述，CD4+CD8+DP T细胞作为一类免疫细胞，在各种感染性疾病患者中，其百分含量有一定程度的升高，提示其可能具有重要的免疫学功能。因此，还需要深入研究CD4+CD8+DP T细胞对疾病诊断的价值，以明确其与疾病发生和发展的关系。

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