星形胶质细胞影响神经干细胞突触表达的神经营养家族基因表达机制探讨

闫荣，罗晓光，张尧，李宇凤，冯娟

（中国医科大学1.附属盛京医院神经内科，沈阳 110004；2.附属第一医院神经内科，沈阳 110001）

近年来的国际研究显示，神经干细胞（neural stem cells，NSC）既能在体外增殖，又能保持未分化状态。在诱导剂诱导下，可分化为神经样细胞［1］，其在中枢神经系统疾病，如帕金森病（Parkinson dis⁃ease，PD）的损伤修复中发挥重要作用，并且一直是此领域的研究前沿［2］。越来越多的研究证明星形胶质细胞（astrocyte，AS）会通过改变自身特性来适应不同的外界环境信号刺激，这种改变不但有大小、形态和数目上的改变，也有分泌功能的改变，如GDNF、NGF、BDNF、NT⁃3等表达上调［3］。近年来认识到星形胶质细胞在突触形成中发挥重要作用［4］。有研究证明帕金森病，脑内星形胶质细胞是对多巴胺能神经元起保护作用［5］。但是，在帕金森病脑内微环境中，星形胶质细胞与受到1⁃甲基⁃4苯基-吡啶离子（MPP+）毒性损伤的神经元相互作用后神经营养基因表达的变化至今仍未清楚，以及对神经干细胞的突触素和生长相关蛋白43（GAP⁃43）的影响有待探讨。本研究将研究对象单一纯化，利用MPP+诱导PC12细胞凋亡，然后与星形胶质细胞共同孵育2 d，收集星形胶质细胞，观察星形胶质细胞神经营养素家族蛋白基因（BDNF mRNA、NGF mRNA和NT⁃3 mRNA）表达变化，以及星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞突触素、GAP⁃43表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

新生2 d Wistar大鼠购自中国医科大学动物部，PC12细胞购自中国科学院细胞生物研究所。Fal⁃con Cell Culture Insert（基因公司，美国）；总RNA提取试剂Trizol Reagent，RT⁃PCR试剂盒购自TaKaRa公司，引物由TaKaRa公司合成，其余试剂为国产分析纯；1⁃甲基⁃4苯基－吡啶离子（MPP+）（Sigma公司）；抗体：小鼠抗鼠突触素（基因公司，美国），兔抗鼠生GAP⁃43、小鼠抗鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）、兔抗鼠胶质纤维酸性蛋白（GFAP），兔抗鼠nestin，FITC、cy3（羊抗小鼠、羊抗兔）标记二抗（武汉博士德公司）。

1.2 方法

1.2.1 星形胶质细胞原代培养及鉴定：取生后2 d Wistar大鼠脑皮质，0.25%胰蛋白酶消化、离心、差速贴壁去除成纤维细胞，含10%胎牛血清高糖DMEM培养基中培养，每2～3 d换液，细胞长至80%～90%融合后，置于37℃摇床中振荡2次（250 r/min，第1次：12～14 h；第2次：30～60 min）。为进一步纯化，可重复振荡传代。星形胶质细胞纯度=GFAP阳性细胞/（NSE阳性细胞+GFAP阳性细胞）×100%。纯度达95%以上，可进行下一步实验。将纯化的星形胶质细胞以1×107/mL密度随机接种于24孔培养板内，加入含血清DMEM培养液800 μL/孔，备用后续实验。

1.2.2 第一步骤

（1）PC12细胞的培养和2.0 mmol/L MPP+诱导：用含10%马血清和5%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养PC12细胞，当细胞铺满70%～90%瓶底时用0.25%胰酶消化，按1∶3进行传代。将PC12细胞以1×107/mL密度随机接种于Falcon Cell Culture Insert中，用2.0 mmol/L MPP+分别处理0 h、24 h、48 h、72 h、96 h后，分为2部分：一部分应用流式细胞仪检测细胞凋亡率，每个时间点设5孔；另一部分换液，加入含血清RPMI 1640培养液200 μL/孔，备用进行下面实验。

（2）实验分组：将各组Falcon Cell Culture Insert（均含血清RPMI 1640培养液200 μL/孔）放入与其相配的24孔培养板内（均含血清DMEM培养液800 μL/孔）2 d，达到共育目的。具体如下：A组（星形胶质细胞组），即Falcon Cell Culture Insert不含PC12细胞，24孔培养板内含星形胶质细胞。B组（PC12+星形胶质细胞组），即Falcon Cell Culture Insert含PC12细胞，24孔培养板内含星形胶质细胞。C1组～C5组［MPP+诱导PC12（0 h、24 h、48 h、72 h、96 h）星形胶质细胞组］，即Falcon Cell Culture Insert含MPP+分别诱导0 h、24 h、48 h、72 h、96 h PC12细胞，24孔培养板内含星形胶质细胞。D1组～D5组［MPP+诱导PC12（0 h、24 h、48 h、72 h、96 h）组］，即Falcon Cell Culture Insert含MPP+分别诱导0 h、24 h、48 h、72 h、96 h PC12细胞，24孔培养板内不含星形胶质细胞。E组（MPP+诱导星形胶质细胞），即Falcon Cell Culture Insert不含PC12细胞，24孔培养板内含MPP+诱导48 h的星形胶质细胞。每组设5孔。

（3）收集各组细胞和细胞条件培养液：每孔液体总量为1 mL，48 h后移去Falcon cell culture In⁃sert，小心收集上清液1 mL/孔，移入无菌Eppendorf管，离心3 000 r/min 20 min，再将上清液移入另一无菌Eppendorf管，-20℃冷藏，备用。小心收集24孔板内各组细胞，PBS洗涤3次后，加入Trizol 1 mL，移入Eppendorf管，-70℃冻存备用。

（4）流式细胞仪细胞凋亡分析：将第一部分收集的Falcon Cell Culture Insert中的PC12细胞，PBS冲洗3次，70%冷乙醇固定，加入PI染液，4℃避光30 min，流式细胞仪（FACS Calibur，BD，美国）检测，用Cell Quest3.0软件分析。

（5）RT⁃PCR检测各组收集的细胞BDNF mRNA，NGF mRNA，NT⁃3 mRNA：

①总RNA的提取与定量：按Trizol试剂说明书要求提取总RNA。紫外可见光分光光度计测OD值，A260 nm/A280 nm为1.8～2.0，并用20 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA质量，调节后样本终浓度为1 μg/μL。提取总RNA置于-70℃保存。

② BDNF，NGF，NT⁃3引物合成序列：大鼠β⁃ac⁃tin：Sense 5′⁃GCCAACCGTGAAAAGATG⁃3′，700（bp），Antisense 5′⁃CCAGGATAAGCCACCAAT⁃3′；NGF Sense 5′⁃CGGCGTACAGGCAGAACCGTACA CAG⁃3′，335⁃360 410（bp），Antisense 5′⁃GTGTGGT TGGAGATAAGACCACAGCCACAG ⁃3′，714⁃744（bp）；BDNF Sense 5′⁃CAGTGGACATGTCCGGTGGG ACGGTC⁃3′，545⁃570 533（bp），Antisense 5′⁃GTGT GGTTGGAGATAAGACCACAGCCACAG⁃3′，1051⁃1077（bp）；NT3 Sense 5′⁃GCAACAGACACAGAACTA CTA⁃3′，331⁃351 232（bp），Antisense 5′⁃GCCTGT GGGTGACCGACAAGT⁃3′，542⁃562（bp）。

③ 逆转录反应：取各组样本（RNA）1 μL，按照逆转录试剂盒说明书要求操作，总反应体积10 μL，30 ℃ 10 min，42℃ 30 min，99℃ 5 min，5℃ 5 min，4℃冰箱保存。

④PCR反应条件：94℃预变性2 min，94℃变性40 s，54 ℃退火40 s，72 ℃延伸1 min，完成30个循环后，72℃再延伸10 min，4℃保留1 min。

⑤在质量分数为11.8%的琼脂糖凝胶上电泳。

⑥用电泳凝胶成像系统观察拍照。

⑦产物分析：电泳图谱在电泳凝胶成像分析工作站，应用Fluorchem V2.0软件扫描。PCR产物溴乙锭染色后强度以Marker DL 2 000为分子量标准，内参照β⁃actin荧光强度值标化BDNF，NGF，NF⁃3基因mass值，得到相对含量进行分析。用下列公式表示：BDNF/NGF/NT⁃3 mRNA 相对含量=BDWF/NGF/NT⁃3密度/β⁃actin密度×100。

1.2.3 第二步骤

（1）神经干细胞分离，培养及鉴定：取怀孕14 d Wister大鼠1只，分离胎鼠脑皮质组织，收入D⁃Hanks液中冲洗，剪碎脑组织，过滤、反复吸打、离心，加入20 μg/L bFGF和20 mL/L B27的DMEM/F12培养液，置入37℃CO2孵箱培养，2～3 d换液1次，6～7 d传代1次。再分别以1×107/mL密度接种于多聚赖氨酸处理的24孔培养板和25 cm2培养瓶中，备用下面实验。胚胎大鼠皮质NSC nestin免疫荧光鉴定，Ⅰ抗选用兔抗大鼠nestin单抗，Ⅱ抗选用FITC（羊抗兔）标记的IgG。

（3）实验分组：取前面实验备用的A组、B组，C1～C5组、D1组～D5组和E组细胞条件培养液（ACM），以1∶3比例同DMEM/F12培养基混合，分别加入备用的含有NSC（1×107/mL密度）的24孔培养板中。依次分别设为Ⅰ组（A组+NSC）、Ⅱ组（B组+NSC）、Ⅲ组～Ⅶ组［（C1组～C5组）+NSC］、Ⅷ组（NSC组，不含细胞条件培养液）、Ⅸ组～ⅩⅢ组［（D1组～D5组）+NSC］和ⅩⅣ组（E组＋NSC），每组设5个孔/瓶。

（4）免疫荧光染色检测神经干细胞（NSC）突触素（SYN）和GAP⁃43的表达：在24孔培养板中，PBS洗1次（5 min），4%多聚甲醛固定10 min，PBS洗3次（5 min），分别用不含曲拉通的BSA和含曲拉通的BSA封闭30 min和20 min，加入Ⅰ抗，37℃摇床孵育2 h，PBS洗3次（5 min），加入Ⅱ抗，避光，孵育30 min，PBS洗3次（5 min），加入荧光保护油，在荧光显微镜下观察，每张片分别选取10个不同视野照相。Ⅰ抗选用突触素和GAP⁃43（1∶100），Ⅱ抗选用FITC、cy3标记的IgG。每孔随机选5个视野拍照。

1.3 统计学分析

应用SPSS 11.5统计软件，组间差异采用两因素析因设计资料的方差分析，数据以±s表示，P＆lt;0.05为差异有显著性统计学意义。

2 结果

2.1 星形胶质细胞形态学观察及免疫荧光染色鉴定

培养7～9 d即可达90%融合，呈铺路石样外观，免疫荧光GFAP染色呈强阳性，NSE染色呈阴性，星型胶质细胞纯度达98%以上。

2.2 流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率

在MPP+作用0 h、24 h时间点，PC12细胞凋亡率较低，48 h达高峰，以后逐渐降低，48 h时PC12细胞凋亡率与其他时间点相比，差异有统计学意义（P＆lt;0.05，见图1。

图1 流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率Fig.1 The apoptosis rates of 1 ⁃methyl⁃4 phenyl pyridinium（MPP+）⁃induced PC12 cells were measured by Flowcytometry

2.3 RT⁃PCR检测各组细胞BDNF mRNA，NGF mRNA，NT⁃3 mRNA表达结果

A组、B组、C1组、C2组、和E组BDNF mRNA表达较低，但C3组、C4组、C5组BDNF表达明显升高，D1组～D5组未检测到BDNF mRNA表达，C3组与A组、B组、C1组、C2组、D1组～D5组和E组比较，差异有统计学意义（P＆lt;0.05），C3组分别与C4 组、C5组比较P＆gt;0.05。NGF mRNA：在A组～E组差异无统计学意义（P＆gt;0.05），D1组～D5组未检测到NGF mRNA。NT⁃3 mRNA，在各组中未测出（P＆gt;0.05）。见表1、图2～5。

2.4 神经干细胞分离，培养及鉴定

胚胎大鼠大脑皮质原代细胞在无血清含bFGF DMEM/F12培养液中，第1天呈比较均匀单个分散生长，48 h后即可形成悬浮样集落状生长的细胞团，经多次传代后，部分细胞仍然呈集落样生长，随着培养时间延长，细胞团逐渐增大。Nestin免疫荧光染色阳性。

表1 RT⁃PCR半定量检测各组样本BDNF mRNA、NGF mRNA和NT⁃3 mRNA阳性相对含量（±s）Tab.1 The expression of BDNF mRNA、NGF mRNA和NT⁃3 mRNA in all groups were measured by RT⁃PCR（±s）

表1 RT⁃PCR半定量检测各组样本BDNF mRNA、NGF mRNA和NT⁃3 mRNA阳性相对含量（±s）Tab.1 The expression of BDNF mRNA、NGF mRNA和NT⁃3 mRNA in all groups were measured by RT⁃PCR（±s）

Ps：C3 group compared to A group，B group，C1 group，C2 group，D1⁃D5 group，E group，P＆lt;0.05；C3 group compared to C4 group and C5 group，P＆gt;0.05；C3 group compared to other groups，P＆gt;0.05；C3 group compared to other groups，P＆gt;0.05.1）P＆lt;0.05.

Groups BDNF mRNA（%） NGF mRNA（%） NT⁃3 mRNA（%）A group：astrocyte 9.99±2.49 10.11±2.11 1.39±0.59 B group：PC12+astrocyte 12.02±1.97 12.15±1.81 1.41±0.21 C1 group：MPP+⁃PC12（0 h）+astrocyte 12.38±2.39 12.88±2.24 1.59±0.41 C2 group：MPP+⁃PC12（24 h）+astrocyte 30.12±3.81 16.89±0.73 1.61±0.72 C3 group：MPP+⁃PC12（48 h）+astrocyte 93.96±4.89 18.28±0.61 1.73±0.37 C4 group：MPP+⁃PC12（72 h）+astrocyte 94.12±1.89 18.67±2.02 1.79±0.89 C5 group：MPP+⁃PC12（96 h）+astrocyte 95.14±1.69 18.83±1.69 1.79±0.24 D1 group：MPP+⁃PC12（0 h） 0.01±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 D2 group：MPP+⁃PC12（24 h） 0.01±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 D3 group：MPP+⁃PC12（48 h） 0.01±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 D4 group：MPP+⁃PC12（72 h） 0.01±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 D5 group：MPP+⁃PC12（96 h） 0.01±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 E group：MPP+astrocyte 0.01±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00

2.5 免疫荧光染色检测神经干细胞突触素和GAP⁃43的表达

在Ⅰ～Ⅳ组、Ⅸ～ⅩⅢ组和ⅩⅣ组突触素、GAP⁃43表达较低；但在Ⅴ组表达明显升高；在Ⅷ组未见到突触素、GAP⁃43表达；Ⅴ组与其他各组比较差异明显，差异有统计学意义（P＆lt;0.05）。见图6～8。

3 讨论

随着国内外对神经干细胞（NSC）的研究逐渐深入，人们发现NSC具有几方面优点：（1）增殖能力旺盛；（2）多向分化潜能，近来的研究发现，在特定的培养条件下，NSC已经成功地被诱导分化为神经元及神经胶质细胞［1］；（3）可根据不同需要进行基因调控。正是由于上述特点，神经干细胞为中枢神经系统疾病的临床细胞治疗和基因治疗提供了新的细胞来源。

图2 RT⁃PCR检测各组β⁃actin mRNA表达Fig.2 The expression of β⁃actin mRNA in all groups were measured by RT⁃PCR

图3 RT⁃PCR检测各组BDNF mRNA表达Fig.3 The expression of BDNF mRNA in all groups were measured by RT⁃PCR

图4 RT⁃PCR检测各组NGF mRNA表达Fig.4 The expression of NGF mRNA in all groups were measured by RT⁃PCR

图5 RT⁃PCR检测各组NT⁃3 mRNA 表达Fig.5 The expression of NT⁃3 mRNA in all groups were measured by RT⁃PCR

近年来尝试用NSC移植治疗帕金森病（PD）［2］。但是PD病理状态下神经细胞（如数量庞大的星形胶质细胞）对移植NSC的突触形成影响如何，是什么参与了此过程，尚待研究。

图6 各组细胞条件培养液对神经干细胞突触素、GAP⁃43表达的影响（±s）Fig.6 The expression of SYN and GAP⁃43 protein of NSC were affected by the collected cells⁃conditioned medium in the all groups（±s）

图7 免疫荧光检测Ⅴ组NSC突触素表达 ×400Fig.7 The expression of synaptophysin inⅤgroup were detected by immunofluorescen×400

图8 免疫荧光检测Ⅴ组NSC GAP⁃43表达 ×400Fig.8 The expression of GAP⁃43 in Ⅴ group were detected by immunofluorescen×400

近年来，对数量庞大的星形胶质细胞不断有了新的认识，不同的疾病有着不同环境信号刺激，星形胶质细胞会对其产生不同的反应［3］。有研究发现PD脑内，激活的神经胶质细胞神经出现炎性反应［7］，黑质纹状体多巴胺能神经元的生存，部分是通过激活星形胶质细胞［8］，星形胶质细胞很多基因、蛋白质和相关信号通路表达是上调的，其中包括一些神经营养因子［9］。其次，对星形胶质细胞的新认识就是促进突触形成、加速突触传递、调节突触活动，在突触可塑中发挥重要作用。包括突触形态、结构、数目、电生理、突触蛋白免疫表达、突触囊泡的循环和神经递质的释放等方面进行研究［4］。有研究发现，在PD脑内，突触结构和细胞分子学发生改变，星形胶质细胞也发生形态、生化改变［10］。

突触是神经元之间信息传递的特化结构，是形成神经活动的结构基础。目前已鉴定出与突触有关的突触蛋白有10余种。其中突触素是突触囊泡膜上的特异性蛋白质，分子量为3 kDa，是突触囊泡中含量最丰富的两类蛋白之一。突触素的功能是调节突触囊泡贮存和释放神经递质，参与突触囊泡导入转运，突触囊泡再循环，参与突触的形成和突触重塑。GAP⁃43是突触前膜蛋白，分子量为24 kDa。GAP⁃43的功能是参与神经纤维的生长、再生和分化，参与突触可塑性，对调节神经递质的释放有重要影响。在PD患者，突触核蛋白（SYN）是散发性和家族性PD的发病机制中的中心角色。SYN聚集和氧化应激相关联，并增进彼此的毒性［5，13］。因此突触素和GAP⁃43不但可以作为突触蛋白分子标记，而且也可作为神经突触可塑性的特异性标记之一，即可作为突触的功能性标记［11，12］。

近来的研究发现在大鼠PD模型，中枢神经系统内可见众多基因表达变化，为了避免PD脑内多种错综复杂的微环境因素干扰，我们将研究对象单一纯化，利用1⁃甲基⁃4苯基⁃吡啶离子（MPP+）诱导类型单一，又可稳定传代的具有神经细胞特征的PC12细胞凋亡后与纯化的原代培养的大鼠皮层星形胶质细胞共同孵育，由于神经营养家族是20余种神经营养因子中最具代表性的一族，因此，我们应用RT⁃PCR技术观察了大鼠皮层星形胶质细胞神经营养素家族基因（BDNF、NGF、NT⁃3）表达变化。然后，应用星形胶质细胞培养液诱导NSC，应用免疫荧光观察NSC突触素和GAP⁃43表达变化。

在第一步骤实验中，BDNF mRNA表达：A组～C5组各组BDNF mRNA阳性相对含量变化趋势与本次实验的MPP+诱导PC12细胞凋亡率变化相吻合，即星形胶质细胞BDNF mRNA表达随着MPP+诱导PC12细胞凋亡率增高而增加，C3组BDNF mRNA阳性相对含量明显上调达高峰，48 h后降低减少，说明大鼠皮层星形胶质细胞BDNF mRNA表达明显上调可能与MPP+对PC12神经毒性损伤有关，推测在MPP+诱导PC12凋亡同时分泌某种细胞因子增加，刺激大鼠皮层星形胶质细胞反应性BDNF mRNA表达增加。D1～D5组未检测到BDNF mRNA，说明PC12细胞不表达BDNF mRNA。E组未检测到BDNF mRNA，说明星形胶质细胞直接受到MPP+神经毒性损伤后明显影响了BDNF mRNA表达。

NGF mRNA表达：A组～C5组各组均可见到NGF mRNA低量表达，各组之间NGF mRNA阳性相对含量比较差异无统计学意义，（P＆gt;0.05）。由此可以看到PC12经MPP+诱导后，不能刺激大鼠皮层星形胶质细胞NGF mRNA表达变化。D1～D5组未检测到NGF mRNA，说明PC12细胞不表达NGF mRNA。E组未检测到NGF mRNA，说明星形胶质细胞直接受到MPP+神经毒性损伤后影响了NGF mRNA表达。

NT⁃3 mRNA：在各组均未见到NT⁃3 mRNA表达。说明大鼠皮层星形胶质细胞不表达NT⁃3 mRNA。

综上所述，我们可以推测大鼠皮层星形胶质细胞BDNF mRNA表达变化，可能与MPP+诱导PC12细胞凋亡有关，但是其机制有待进一步研究。其次，来源于大鼠皮层区星形胶质细胞与经过MPP+诱导后PC12相互作用后，主要以BDNF mRNA表达上调为主，NGF mRNA表达无变化，NT⁃3 mRNA不表达。我们认为PC12受到Aβ神经毒性损伤后可以刺激来源于大鼠皮层的星形胶质细胞有选择性神经营养素家族基因表达。

最后的实验观察到，NSC本身不表达突触素和GAP⁃43，细胞间无突触形成；星形胶质细胞、PC12细胞和MPP+作用48 h星形胶质细胞能促进NSC少量表达突触素和GAP⁃43；但是与MPP+诱导48 h后PC12细胞共育的星形胶质细胞条件培养液NSC突触蛋白（突触素和GAP⁃43）表达明显增高，说明PD病理状态下的星形胶质细胞能够促进NSC突触蛋白表达明显增高。

本研究观察到Ⅰ组⁃Ⅶ组中NSC突触素、GAP⁃43表达变化趋势与RT⁃PCR检测A组～C5组星形胶质细胞BDNF mRNA表达变化趋势相一致。因此分析I组～Ⅶ组NSC突触素、GAP⁃43表达可能与最初MPP+诱导PC¬12凋亡、星形胶质细胞BDNF mRNA表达有关。

近年来提出，BDNF在神经细胞生存、维护和再生中发挥重要作用，在神经系统变性病中是重要的治疗方向［14，15］。国内外研究指出BDNF可以调节突触囊泡蛋白的表达和神经突触调节密度；BDNF通过调节突触的数量，促进轴突更多地分叉，增加突触可分布的领域，来提高神经元环路结构和功能上的复杂性；BDNF可以调节突触囊泡的数量；BDNF还调节神经递质的传递和电生理特性。以上的研究结果支持我们的实验结果，与MPP+诱导PC12凋亡共育的星形胶质细胞可能通过BDNF mRNA增加，可能与NSC突触蛋白的表达增加有关。

在本实验中，星形胶质细胞发挥其神经营养作用，起修补代偿作用。此外，来源于新生大鼠皮层的星形胶质细胞与受到MPP+神经毒性损伤的PC12细胞体外相互作用后，能够有选择性神经营养素家族基因表达，可能与星形胶质细胞区域异质性有关。

总之，综合全部实验结果，可以看到受到MPP+神经毒性损伤的PC12细胞能够刺激来源于大鼠皮层星形胶质细胞活化，BDNF mRNA表达上调，受到星形胶质细胞条件培养液诱导后的NSC突触素、GAP⁃43表达增加。可以推测PD病理状态下，MPP+诱导PC12细胞凋亡的同时释放了某种细胞刺激因子，后者刺激星形胶质细胞反应性增强一些基因表达，其中来源于大鼠皮层的星形胶质细胞以BDNF为神经素家族代表，BDNF可能通过某一信号途径传递到NSC核内，通过一系列相应基因和蛋白表达，调节NSC突触蛋白的表达。因此推测来源于大鼠皮质的反应性星形胶质细胞有助于促进来源于自身骨髓的NSC突触蛋白的表达，并且BDNF可能参与了此过程，这可能为PD反应性星形胶质细胞神经修复机制又增添了一小部分内容，更重要的是为NSC应用于临床治疗PD提供了一部分基础实验数据，为NSC修补替代治疗PD增加了可能性。

PD脑内微环境中各种神经细胞对NSC生物学作用是错综复杂的，受时间、空间、细胞基质和其他微环境因素影响和限制。NSC能否替代变性神经元及其机制都有待进一步探索。

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