花青素协同葡萄糖醛酸对辐射大鼠肝功能的影响

李玉白，黄红焰

（湖南环境生物职业技术学院医药学院检验教研室，湖南 衡阳 421005）

现代生活中辐射无处不在，现代高科技产品在给人们的生活带来更多便利、高效与欢乐的同时，也带来了有害于人类健康的辐射。辐射的危害早已经证实，辐射污染会影响人们的心血管系统，影响人体的循环系统、免疫、生殖和代谢功能，严重的还会诱发癌症、加速人体的癌细胞增殖。预防、治疗、有效减轻辐射伤害，意义非凡。花青素是植物中天然存在的一种生物活性物质，具有抗氧化作用、抗自由基作用、抗视力退化、抗癌作用及抗动脉硬化和血栓形成等生理功效［1］，开发前景广阔。有关花青素的研究报道很多，主要包括花青素的提取、分离、鉴定和分子生物学水平的合成机制以及对人体的功能、消化吸收和体内代谢研究等方面［2］。本研究通过制作辐射动物模型，深入探索花青素的药用性能及花青素对辐射损伤的护肝效率和机制，为临床减缓辐射伤害提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

M680型自动生化分析仪，购自日本康能公司；721型分光光度计，购自上海第二分析仪器厂；BH2BHS⁃313型显微摄影显微镜，购自日本Olympus公司；可调微量加样器，购自上海精诚生化试剂仪器有限公司。

花青素，优级纯，购自广东种业股份有限公司生物制药厂；葡萄糖醛酸（glucuronic acid，GA），分析纯，购自广州佳惠生物制品有限公司；血清清蛋白（albumin，ALB）试剂盒、总胆红素（total bilirubin，TB）试剂盒，均购自长沙建宁生物工程研究所；肝功能指标丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）试剂盒、天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotrans⁃ferase，AST）试剂盒，均购自广州天成控股生物科技有限公司。

1.2 实验动物及分组

选择6～8周龄健康清洁级SD大鼠40只，雌雄各半，体质量为150～180 g，由南华大学实验动物中心提供，动物许可证号为2011531。实验动物饲养于半屏障环境中，饲料、饮水、垫料、笼具等均消毒，舍内温度20℃、相对湿度60%、光照强度1 000～3 000 Lux，光照时间为每天8 h。实验动物可自由饮水、摄食。

将实验动物随机分成4组，分别为正常对照组、辐射组、花青素组、花青素+GA组（联合组），每组10只大鼠，雌雄各半。在前期实验基础上，参考GA的用药剂量，花青素组在常规饲料基础上添加1%的花青素，联合组添加1%的花青素和5%的GA，各组自由进食。10 d后，除正常对照组外，其余大鼠均接受3 Gy的50Co⁃γ全身一次性照射，在该剂量照射下无大鼠死亡。照射后第7天每组随机各取8只存活大鼠取血处死，检测ALB、ALT、AST和TB。同时记录实验期大鼠饮食情况及体质量变化。

1.3 一般情况

实验期间观察动物进食、饮水、活动、毛发、大小便和常见临床症状，测定大鼠实验前后的体质量。

1.4 血液生化指标的测定

用凝胶促凝管采集血样，采集完成后将采血管在37℃温箱中静置30 min，待血块凝集后将采血管在离心机上离心15 min，用移液器分离血清。采用生化分析仪测定血清中ALB、AST、ALT、TB活力。具体操作方法严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 病理学观察

取肝脏组织适量，首先以甲醛（50 g/L）进行前固定，然后以乙醇—甲醛（160 mL/L）溶液进行后固定，再经无水乙醇脱水、浸蜡、包埋、切片（厚度为5 mm）、烘干、二甲苯脱蜡、蒸馏水洗涤后进行常规HE染色。在光镜下观察肝脏组织学变化。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 一般情况

实验期间观察发现，辐射初期（第2天）各组动物进食、饮水、活动、毛发、大小便与呼吸情况等方面均无异常发现，辐射后期（辐射第7天）辐射组大部分动物行为活动明显减少，出现萎靡，饮食减少等现象。由表1可见，辐射组、花青素组大鼠体质量与正常对照组比较，差异均有统计学意义（P＆lt;0.05）。联合组大鼠体质量与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＆gt;0.05）。相同辐射剂量组不同性别大鼠间比较，差异也均无统计学意义（P＆gt;0.05）。

表1 花青素、GA对辐射大鼠体质量的影响（g）Tab.1 Effect of anthocyanin，GA on body weight of irradiated rat（g）

2.2 大鼠血清ALT、AST、ALB、TB活力的变化

由表2可见，辐射组、花青素组大鼠与正常对照组比较，血清ALT、AST活力均增加，差异有统计学意义（P＆lt;0.05）；联合组大鼠ALT、AST活力与正常对照组比较，差异均无统计学意义（P＆gt;0.05）；相同辐射剂量组不同性别大鼠血清ALT、AST活力间比较，差异也均无统计学意义（P＆gt;0.05）。辐射组、花青素组大鼠血清ALB含量减少、TB含量增加，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P＆lt;0.05）；联合组大鼠血清ALB含量、TB含量与正常对照组比较，差异均无统计学意义（P＆gt;0.05）；相同辐射剂量组不同性别大鼠血清ALB、TB间比较，差异也均无统计学意义（P＆gt;0.05）。

表2 花青素、GA对辐射大鼠血清ALT、AST、ALB、TB活力的影响Tab.2 Effect of anthocyanin，GA on serum ALT，AST，ALB，and TB activity of irradiated rat

2.3 肝脏形态学观察

大鼠经辐射实验后，取材制备超薄切片，通过透射电镜观察可见，辐射组肝细胞汇管区内小灶性炎性细胞浸润（图1A），联合组肝细胞汇管区正常（图1B）。

图1 辐射实验后大鼠肝脏形态学Fig.1 Morphology of rat liver after irradiation

3 讨论

实验显示，辐射组、花青素组大鼠体质量、血清ALT和AST活力、血清ALB和TB含量与正常对照组比较，差异均有统计学意义，说明辐射造成大鼠损伤，花青素单因素对减轻辐射造成的损伤效果不明显。联合组大鼠体质量、血清ALT和AST活力、血清ALB和TB含量与正常对照组比较，差异均无统计学意义，说明花青素和GA联合可减轻辐射对大鼠造成的肝损伤。相同辐射剂量组不同性别大鼠体质量、血清ALT、AST、ALB、TB间比较，差异均无统计学意义，说明辐射对大鼠的影响无雌雄差异。

花青素是一种强有力的抗氧化剂，它能够保护人体免受自由基的有害物质的损伤［3］。花青素的自由基清除能力是维生素E的50倍，是维生素C的20倍，花青素可被人体100%地吸收，服用20 min后血液中就能检测到，并在体内维持长达27 h［4］。花青素的效率迅速而持久。花青素通过增强免疫系统能力来抵御致癌物质，有助于预防多种与自由基有关的疾病，具有抗突变的功能从而减少致癌因子的形成［5］，同时保持血细胞正常的柔韧性，从而帮助血红细胞通过细小的毛细血管，因此增强了全身的血液循环、为身体各个部分的器官和系统带来直接的益处，并增强细胞活力［6］。在肝细胞的滑面内质网上有葡萄糖醛酸基转酶，该酶可催化GA与体内毒物结合成无毒的GA结合物而排出，有护肝解毒作用。花青素协同GA联合作用，促进GA与体内非营养物质的结合，减轻辐射对大鼠肝功能的损害，有效改善肝功能。

［1］赵宇瑛，张汉锋.花青素的研究现状与发展趋势［J］.河南农业科学，2009，33（5）：904-907.

［2］张俊鸽，李平华.原花青素抗晶状体氧化损伤的实验研究［J］.重庆医科大学学报，2008，32（4）：387-391.

［3］陈玮，凌文华，李茂全，等.黑米花青素在大鼠视网膜光化学损伤中的抗氧化作用研究［J］.营养学报，2010，32（4）：341-349.

［4］何颖辉，周静，王跃生，等.樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠免疫功能和炎症因子的影响［J］.中草药，2011，6（3）：874-878.

［5］Annanaryju D，Sarma E.Antioxidant ability of anthocyanins against ascorbic acid oxidation［J］.Phytochemistry，2010，45（4）：671-674.

［6］Kalt W，Blumber JB，McDonald JE，et al.Identification of anthocya⁃nins in the liver，eye，and brain of blueberry⁃fed pigs［J］.J Agric Food Chemy，2008，56（3）：705-712.