重组亚油酸异构酶诱导表达条件的优化

■张颜婷 赵国芬

(内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特010010)

共轭亚油酸(conjugated linoleic acid，CLA)是具有共轭双键的位置和几何异构体十八碳烯酸的统称。其共轭双键通常位于C9和C11位或C10和C12位，每个双键可以以顺式或反式构型存在[1]。共轭亚油酸的立体异构体多达十几种，以cis-9,trans-11-CLA(c9t11)，trans-10、cis-12-CLA(t10c12)，trans-9、trans-11-CLA(t9t11)和 cis-10、cis-12-CLA(c10c12)等异构体为主，其中具有生物学功能的两种异构体为cis-9、trans-11-CLA(c9t11)和 trans-10、cis-12-CLA(t10c12)[2]。研究表明，CLA具有诸多的生理功能，如抗癌、调节血糖、增强肌体免疫力、促进骨组织代谢、促进生长发育[3-8]、治疗糖尿病[9]、减少皮肤感染[10]、减少脂肪[11]和抗动脉粥样硬化[12-13]等，其在食品和医药等领域已经成为研究的重点。

亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase，LAI）可以专一地将亚油酸转化为共轭亚油酸。与目前应用较为广泛的化学异构法和微生物发酵法生产CLA相比，利用重组菌诱导表达并纯化产生的LAI催化亚油酸产生CLA，不仅可以获得高活性、高纯度的CLA，还解决了微生物发酵过程中发酵条件苛刻、菌体生产能力局限和菌体代谢产物不易与产品分离等问题。

本试验以重组LAI工程菌为试验菌株，对诱导时机、诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度进行单因素试验和正交试验研究，以进一步优化重组LAI工程菌的诱导表达条件，为后续酶的纯化、利用以及工业生产奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

亚油酸纯度≥99%（Sigma）、氨苄青霉素（amresco）、IPTG（amresco）、牛血清白蛋白（Scientific Research Special）、正己烷（永大试剂）、蛋白胨（环凯微生物）、酵母提取物（环凯微生物）、Tris（amresco）、甘油（永大试剂）、咪唑（Vetec）、NaCl（永大试剂）、NTA-0、100、200、400分别为浓度20 mM Tris-HCl（pH值 7.9），0.5 M NaCl及10%甘油，添加0、100、200、400 mM咪唑、JM109-pQE30a-LAI(实验室保存)。……