血清蛋白电泳的方法及临床意义

闫晓琳

血清蛋白电泳的方法及临床意义

闫晓琳

目的 调查血清蛋白电泳(SPEP)情况。方法收集本院2011年1月～2013年6月80例本院门诊和住院患者的血清蛋白电泳分析。结果精确地描绘出患者蛋白质的全貌, 一般常见的是白蛋白降低、某个球蛋白区域升高, 提示不同的临床意义。结论血清蛋白电泳对这类疾病的早期诊断, 疗效观察和预后判断均有十分重要的意义。

血清蛋白电泳；临床意义

血清是数种蛋白质的混合液, 都有它特有的等电点。蛋白质在等电点时呈电中性状态, 它的分子所带正负电荷量相等。如将蛋白质置于比其等电点较高的缓冲液中, 它们都游离成带负电荷的质点, 在电场中均会向正极泳动。收集2011年1月～2013年6月80例门诊和住院患者的血清蛋白电泳分析。

1 一般资料

本组收治的80例受检验患者行血清蛋白电泳分析, 男48例, 女32例, 年龄2～82岁, 平均年龄42.5岁。取新鲜无溶血现象的血清, 采用使用Sebia公司的“HYDRASYS”全自动电淋仪, 琼脂糖凝胶、含缓冲液条带、氨基黑染色液、脱色液、洗涤液、稀释剂。

2 方法

打开电源, 将点样器置于平整实验桌表面, 孔号位于加样孔上方按序排列, 每孔加10 μl样品, 把点样器放于湿盒内, 齿梳向上放置, 让样品于齿梳中扩散5 min, 开电泳盖, 并升起电极和点样支架。选择蛋白质电泳程序。取出含缓冲液的海绵条带, 并将条带塑料衬垫物的背紧贴电极挂置。取出凝胶, 用1张薄滤纸轻轻地吸去凝胶表面多余的液体, 然后快速移去滤纸。加120～200 μl蒸溜水或去离子水于电泳仪的平台框面的下1/3处。将凝胶片底边紧靠框架底边, 凝胶片背对框架［1］。弯曲凝胶片将其置于电泳框面上,确定凝胶背面的气泡被完全赶走。放下2个支架。这时, 含缓冲液的条带没有接触凝胶。不要强迫支架完全下降。从湿盒中取出点样器。

3 讨论

血清蛋白质(SPE)在给定的pH条件下根据其所带电荷数将其分离成各种片段, 用琼脂糖作介质时,血清蛋白质由五个不同迁移率区带组成, ALB、α1、α2、β、γ球蛋白。

血清贮存于2～8℃和冷冻引起β-脂蛋白从β区域到α1或α2区域的阳极转移；血清越陈旧转移越多。血清(特别是含冷球蛋白成分)可能变得粘稠或混浊。应用稀释剂预处理, 即加入25 μl液化剂于75 μl血清中, 在震荡器上混匀15 s。勿使用溶血样品,否则会增加α2和β含量, 避免使用血浆。染色之前作检查, 染色液至少300 ml、脱色液至少1 L、废液缸空置。

新鲜血清经醋酸纤维薄膜电泳后可精确地描绘出患者蛋白质的全貌, 一般常见的是白蛋白降低、某个球蛋白区域升高, 提示不同的临床意义。白蛋白仅由肝细胞制造, 体内40%的白蛋白存在于体液中, 其分布于组织内和组织液内［2］。血管内外白蛋白经常交换而处于动态平衡中, 正常人每天由肝细胞粗面内质网制造的白蛋白为120～200 mg/kg, 相当11～15 g/d。肝合成白蛋白属限速性, 仅在体内过量白蛋白丢失或破坏情况下, 合成速率才会增加。粗面内质网合成白蛋白, 由肝细胞分泌入肝窦而入血。肝细胞损伤可发生白蛋白合成、细胞内运输和释放障碍, 引起血中白蛋白减少。在肝脏炎症性病变时, α1球蛋白增加, 和白蛋白呈负相关, 但在肝细胞破坏极为严重的肝坏死和肝硬化时则减少, 与白蛋白呈正相关。在致命的肝功能衰竭时, α1球蛋白可降到很低水平。肝病时如al球蛋白增加提示病情较轻, α2球蛋白减少常标志病情重笃。因此, 测定α1球蛋白对判断肝炎患者的严重和预后有参考价值。此外, 在肝癌时α1球蛋白显著上升。缺铁性贫血时, 由于转铁蛋白的升高而呈现β区带增高；而慢性肝病或肝硬变时, 白蛋白显著降低, γ球蛋白升高2～3倍, 免疫球蛋白多克隆增高,甚至可见β-γ融合的桥连现象, 还可在γ区呈现细而密的寡克隆区带；对单一克隆浆细胞异常增殖所产生的无抗体活性的均一免疫球蛋白称M蛋白的检测, 血清蛋白电泳是其首选的实验诊断方法, 可在电泳区带的仅α2-γ区呈现致密而深染, 高度集中的蛋白克隆增生区带, 称其为M蛋白区带, 扫描后形成高而狭窄的单株峰, 若此峰在γ区其峰高与峰底宽之比>2：1, 则由于正常免疫球蛋白合成限制造成背景染色浅。由M蛋白所导致的一组疾病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、游离轻链病、半分子病、良性单株丙球血症和双M蛋白血症等, 目前这类疾病已不属罕见。血清蛋白电泳对这类疾病的早期诊断, 疗效观察和预后判断均有十分重要的意义。

［1］ 刘建强, 孟青妹. 青海蟾蜍血清蛋白质成分的电泳分析. 中国兽医科技, 2003,3(10):64-65.

［2］ 姜傥. 尿液蛋白与肾脏疾病.中化检验医学杂志, 2002, 25(5):312-313.

R814

A

1674-9316(2014)01-0029-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.01.019

150036 黑龙江省中医药科学院