单核细胞趋化蛋白-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与狼疮性肾炎关联性的Meta分析

宋欣颖，马 冰，王晓明

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)最为常见的并发症之一，能够对患者造成较严重的脏器损伤，甚至导致死亡[1]。LN患者体内，在促炎细胞因子与免疫复合物刺激的免疫应答反应中，单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)对单核细胞和B细胞有很强的趋化作用。并且已经有报道LN患者尿中MCP-1的水平明显升高[2]。有研究表明MCP-1启动子-2518 A/G位点基因的多态性能够影响在炎症刺激条件下MCP-1的表达水平，并且其等位基因G与介导MCP-1转录的白介素-1(interleukin-1,IL-1)以及MCP-1的循环浓度存在较密切的联系[3]。Lee等[4]对MCP-1启动子-2518位点的多态性和LN的关系进行了Meta分析，但是并没有发现存在任何联系。随着近年来新研究的发表，本研究将重新探索MCP-1启动子-2518位点的多态性与LN的关系。

1 资料与方法

1.1 检索策略 通过电子数据库检索和手工检索MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与LN的相关研究。中文数据库包括中国学术期刊网全文数据库(CNKI)、万方科技期刊全文数据库、中国生物医学数据库(CBM)，以单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、多态性、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎为关键词进行检索。英文数据库包括Pubmed、Embase、The web of science，以monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)、polymorphism、systemic lupus erythematosus (SLE)、lupus nephritis(LN)为关键词进行检索。手工检索中华风湿病学杂志、免疫学、中国神经精神疾病杂志等，并对相关学术会议、报刊文献等进行相应检索。最后一次检索日期为2013-06-07。

1.2 纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准 (1)国内外独立发表的关于MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性和LN的文献；(2)原始研究为病例对照研究；(3)原始研究能够提供对照组和病例组的总人数，以及各个基因型的人数；(4)研究对象为人类；(5)语言不限，样本量不限。

1.2.2 排除标准 (1)综述，病例报告，评论；(2)重复发表或者属于同一人群二次发表的文章；(3)动物实验。

1.3 质量评价方法 通过纽卡斯尔-渥太华量表(the Newcastle-Ottawa Scale,NOS)对所有纳入的文章进行质量评价，并由两名研究者分别独立进行评分[5]。有争议时通过咨询第三者进行解决。评分满分为9分，一般认为纳入Meta分析的文献不低于5分。

1.4 提取数据 对纳入的研究由两名研究人员分别提取相关数据，包括：第一作者、发表时间、国家、种族、基因检测方法、对照组的来源、对照组和病例组各个基因型的人数及总人数。存在争议时由第三者解决。

1.5 统计学方法 采用Stata 11.0统计软件进行数据分析。通过卡方拟合有度检验对对照组进行Hardy-Weinberg equilibrium(HWE)分析，P<0.05认为不符合HWE定律。计算合并后的比值比(OR)及95%可信区间(95%CI)来估计MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性和LN之间的关联强度。遗传模型的选择按照Thakkinstian等[6]在2005年提出的方法：首先分别计算出三个OR值，OR1等于GG/AA,OR2等于AG/AA,OR3等于GG/AG。然后通过下面的比较来选择最优的遗传模型：(1)如果OR1=OR3≠1，并且OR2=1，选择隐性模型；(2)如果OR1=OR2≠1，并且OR3=1，选择显性模型；(3)如果OR2=OR3≠1，并且OR1=1，选择超显性模型；(4)如果OR1>OR2>1并且OR1>OR3>1(或者OR1

2 结果

2.1 文献检索基本情况 根据上述的文献纳入和排除标准，共检索出11篇相关文献(见图1)[8-18]，包括989名患者，1 935名健康对照者。纳入研究的一般情况见表1。所有研究的对照组均符合HWE定律，NOS量表评价结果显示最低分为5分，最高分为9分，均符合Meta分析的要求。

2.2 MCP-1启动子-2518位点多态性和LN的关系 经计算后的OR1、OR2、OR3值分别为1.60〔95%CI(1.00,2.59)〕，1.28〔95%CI(0.94，1.94)〕、1.34〔95%CI(1.06，1.70)〕,因此采用共显性模型进行分析。表2显示了MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性和LN相关性的总的结果。其中GG/AG、G/A两组结果达到统计学水平，提示该位点的突变可能与LN存在密切的关系(见表2、图2)。

按地区进行亚组分析后，各地区间存在明显的差异性(见表3、图3)。结果发现在美洲人群中各基因型合并后的效应值都明显增大，并且除了在AG/AA组外，其余各组差异均有统计学意义(P<0.05)。而欧洲及亚洲人群该位点的变异与LN还没有发现关联性。

注：MCP-1=单核细胞趋化蛋白-1，LN=狼疮性肾炎

图1 文献筛选流程图

2.3 敏感性分析 由于所有研究的对照组都符合HWE定律，我们分别排除每一个研究后进行敏感性分析。敏感性分析结果显示总的效应值并没有发生较大变化，提示本研究结果稳定。

2.4 发表偏倚 Egger线性回归检验没有发现本研究存在发表偏倚(见表2)，提示本研究发表偏倚较小，结果具有可信性。

表2 MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与LN相关性的Meta分析

Table2 Meta-analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN

多态性文献数量效应值OR值 95%CI P值效应模型模型 P值 I2值 发表偏倚P值GG/AA11160(100，259)0052R00016520%0484AG/AA11128(094，194)0120R00046150%0913GG/AG11134(106，170)0015F0419250%0706G/A11132(104，166)0020R00007210%0750

注：R为随机效应模型，F为固定效应模型；MCP-1=单核细胞趋化蛋白-1，LN=狼疮性肾炎

图2 MCP-1启动子-2518 A/G等位基因与LN相关性的Meta分析

Figure2 Meta analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN

表3 按地区进行亚组分析的MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与LN的关系

Table3 Subgroup analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN by regions

地区研究数量效应值OR值 95%CI P值 GG/AA11160(100，259)0052 美洲3570(209，1550)0001 欧洲3138(084，247)0202 亚洲5090(059，136)0613AG/AA11128(094，194)0120 美洲3243(097，605)0058 欧洲3126(097，163)0087 亚洲5080(054，117)0244GG/AG11134(106，170)0015 美洲3247(144，423)0001 欧洲3109(066，180)0741 亚洲5117(085，160)0339G/A11132(104，166)0020 美洲3231(127，420)0006 欧洲3121(099，147)0061 亚洲5099(081，121)0906

3 讨论

研究认为MCP-1在自身性免疫疾病中组织炎症的发生中起着较重要的作用，在肾脏损伤时，MCP-1是肾小球内作用力很强的单核细胞趋化因子。MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性会影响炎症刺激下MCP-1的转录活性，促炎性细胞因子作用下，携带G等位基因的个体会比AA基因型的个体产生更多的MCP-1蛋白[19]。已经有采用动物模型的研究证明MCP-1在LN的发病过程中起着非常重要的作用，并且在LN的患者中也发现了该趋化因子的过度表达[20]。MCP-1可以通过增加细胞内的钙离子释放，从而导致超氧阴离子和溶酶体酶的释放及刺激黏附分子和细胞因子的产生。这些都可能是MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性导致LN的机制。

图3 不同地区MCP-1启动子-2518 A/G等位基因与LN相关性的Meta分析

Figure3 Meta-analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN by regions

近年来关于MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与SLE相关性的报道越来越多，不过研究的结果一直存在争议性，之前的Meta分析并没有发现两者之间存在联系性[21]。LN是SLE累及肾脏所引起的一种免疫复合物沉积性肾炎，是SLE主要的合并症和死亡原因。Lee等[4]的研究显示无论是在显性模型、隐性模型还是等位基因位点的比较中，并没有发现MCP-1启动子-2518 A/G位点多态性与LN存在关联性，不过该分析仅纳入了6个研究，人群只包括亚裔和欧裔。随着近几年新研究的进行及相关文章的发表，本研究对MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与LN的相关性重新进行了评估。

本研究在遗传模型选择上不同于之前的Meta分析，是参照了Thakkinstian等[6]提出的遗传性Meta分析中基因模型选择方法，最终采用共显性模型进行分析。结果显示，MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与LN存在联系，除了基因型AG/AA没有发现关联外，其余各组均达到统计学差异。按照地区进行亚组分析后，各组间的异质性明显降低，可见不同地区间存在较大差异,是研究中异质性的主要来源。分组结果发现在美洲人群这种联系尤为明显，而在亚洲和欧洲人群中并没有发现，这与之前的研究在一定程度上一致[4]。但是美洲人群中对照组的G等位基因的分布频率较病例组明显偏低，这是导致美洲人群MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与其他地区人群不同的主要原因。本研究的对照组全部满足HWE定律，同时没有发表偏倚的存在，提示结果可信性较好。敏感性分析结果中也没有发现在剔除单个研究中整个研究合并后的效应值发生较大的变化，提示本研究稳定性较好。

本研究还存在一定的局限性。首先，纳入的文献数目有限，尤其是在按地区分成亚组后，文献数目进一步减少。其次，研究中并不是涉及所有地区的人群，所以结果适用范围有限。最后，由于缺少数据，还不能说明MCP-1启动子-2518 A/G位点基因多态性与LN的严重程度及同时伴有其他疾病时的关系。另外，由于受研究数目和样本量的限制，系统误差也是不可避免的。

总之，通过Meta分析，本研究发现MCP-1启动子-2518 A/G多态性与LN存在关联性。这种联系在美洲人群中更加明显，而在亚洲和欧洲人群中目前的证据还不支持二者之间的联系。因此还需要更多大样本的同质性研究。

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