抗HSV-2单链抗体和碱性磷酸酶融合蛋白的制备

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(浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 310032)

生殖器疱疹(GH)是一种常见的性传播疾病，主要通过水平性接触传播，也能垂直感染胎儿及新生儿，导致流产及新生儿死亡.GH主要由单纯疱疹病毒II型(HSV-2)感染所致[1].近年来的流行病学调查表明：HSV-2感染与宫颈癌的发生有关[2-3]，还会增加人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的风险[4-5].Looker KJ等根据全球12个地区的汇总数据估计，2003年全球15～49岁人群中，HSV-2感染的患病率约为16.2%，发病率约为0.7%，仅2003年全球新增HSV-2感染者约2 360万人[6].因此，建立一种简便、快速和低成本的HSV-2初筛方法，对GH的辅助诊断和控制传播具有重要的意义.本研究为了探索前期筛选到的高特异性抗HSV-2糖蛋白B的单链抗体在GH诊断中的应用价值，构建了抗HSV-2单链抗体和碱性磷酸酶的融合表达载体，并进行了包涵体的复性研究.

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 菌株及质粒

大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α由本实验室保存，质粒pLac-duet-1-AKP和pCANTAB5E-H3由杭州远方生物科技有限公司提供.

1.1.2 酶及主要试剂

限制性内切酶NotI、NcoI和T4 DNA连接酶购自TaKaRa公司，DNA和蛋白购自Fermentas公司，DNA凝胶回收试剂盒、质粒小量抽提试剂盒和碱性磷酸酶检测试剂盒购自碧云天公司，Ni2+-NTA基质购自QIAGEN公司.

1.2 方 法

1.2.1 融合表达载体pLac-H3-AKP的构建

质粒pLac-duet-1-AKP是将pETduet-1(Novagen公司)质粒中T7启动子用大肠杆菌Lac启动子替代，并插入了一个进化后酶活性提高30倍左右的大肠杆菌碱性磷酸酶基因片段；pCANTAB5E-H3是从本室早先构建的噬菌体抗体库中筛选到的针对单纯疱疹病毒糖蛋白B抗原的N端特异性中和抗体，这个抗体识别抗原的立体结构，能有效封……