食管癌、癌旁组织中P53、MDR-1基因的表达

黄志军

(福建医科大学附属第二医院，福建 福州 362000)

食管癌影响连接咽喉和胃部的食管，是食管鳞状上皮恶性肿瘤，进行性咽下困难为最典型的临床症状〔1〕。食管癌与其他恶性肿瘤一样虽然有基因的变化背景，涉及多因素、多阶段、多基因变异积累及相互作用的复杂过程，在分子水平上涉及众多原癌基因、抑癌基因以及蛋白质的改变〔2〕。P53基因是一种与癌症相关的基因。该基因能够调节人体内某些其他基因的转录，进而起到抑制细胞增殖，修复损伤的细胞作用。P53基因的功能发生缺陷则可导致人体细胞异常增殖的发生〔3〕。P53基因的无效突变可导致其产生一种顶端截短的蛋白质，该蛋白质不能与DNA结合，无修复损伤细胞的活性。此外，这种突变还能够直接降低癌细胞对化疗药物的敏感性，诱导癌细胞产生抗药性〔4〕。本研究探讨食道癌和癌旁组织中P53、MDR基因的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究中资料来自于我院2011年6月至2012年6月间接受手术治疗的50例食管癌患者，所有患者均为食管鳞癌，符合临床诊断标准，并经病理学确诊。其中男37例，女13例，年龄60～73岁，平均年龄(67.6±2.4)岁。病变部位：胸上段11例，胸中段34例，胸下段5例。分化程度：高度分化17例，中度分化19例，低度分化14例。病理类型：溃疡型9例，缩窄型3例，蕈伞型15例，髓质型23例。另取食管正常黏膜标本50份、非典型增生标本50份，均取自癌旁组织，均经病理学确诊。

1.2方法

1.2.1P53检测方法 采用免疫组化ABC法，试剂采用美国Maxim Biotech In产品，即用型单克隆抗体、免疫组化SP试剂盒均由Neo Markers公司提供，鼠抗P53单克隆抗体由上海华美公司提供。并以PBS代替一抗做阴性对照。根据P53着色强度评价如下：阴性(-)：未见阳性肿瘤细胞；弱阳性(+)：组织细胞染色淡或阳性细胞<20%；中度阳性()：染色适中或阳性细胞20%～50%；强阳性()：染色深或阳性细胞>50%。

1.2.2MDR基因检测方法 RNA 提取采用异硫氰酸胍一步法〔5〕。上游引物5'-CCCATCATTGCAATAGCGG-3'；下游引物5'-GTTCAACTTCTGCTCCTGA-3'；扩增片段长度为167 bp，反应体系50 μl,总体积包含有0.2 mmol/L dNTP,1 μmol/L上、下游引物,3 U TaqDNA多聚酶,1×PCR缓冲液。酶切后DNA 1 μg充分混匀后，覆盖石蜡,进行循环扩增。RT-PCR逆转录反应条件为42℃30 min。PCR反应条件为94℃ 5 min；94℃ 1 min；50℃ 1 min；72℃ 1 min。35 个循环后延伸5 min。取10 μg扩增产物在2%琼脂糖凝胶中电泳,电压100 V，电泳120 min后,紫外透射检测电泳带并照相。

1.3统计学方法 数据采用SPSS17.0软件包进行统计学分析，计数资料采用百分数表示，采用χ2检验，用二项Logistic回归模型对手术比例进行多因素分析。

2 结 果

2.1不同食管癌组织中P53的表达 本研究3组标本中食管鳞癌患者P53阳性为68%(34/50)，癌旁正常黏膜P53阳性为54%(27/50)，癌旁非典型增生P53阳性为70%(35/50)。

2.2P53与MDR-1的关系 食管癌组织中P53阳性表达34例中MDR-1阳性表达13例，16例P53阴性表达中9例MDR-1阴性表达；二者表达有高度相关性。

2.3不同食管癌组织MDR-1的表达 高度分化组织中MDR-1的表达(n=17，0.38±0.061)与中度分化(n=19，0.325±0.042)比较差异有统计学意义(P<0.01)；中度分化组织中MDR-1的表达与低度分化(n=14，0.217±0.087)比较差异有统计学意义(P<0.01)；低度分化组织中MDR-1的表达与正常组织(n=50，0.076±0.030)比较差异有统计学意义(P<0.01)。

2.4P53在不同食管癌临床特征中的表达 在不同年龄、肿瘤大小、组织学分级上P53基因的表达无显著意义(P>0.05)。见表1。

表1 P53在不同食管癌临床特征中的表达〔n(%)〕

3 讨 论

P53基因与人类肿瘤相关性高，是一种重要的抑癌基因。P53基因编码的53 kD的蛋白在细胞周期中起重要的调节作用，正常情况下具有生长抑制作用，在细胞周期中对DNA损害的反应、细胞死亡和分化等方面有重要作用〔6〕。正常的P53基因编码53 kD的蛋白，在细胞周期中起重要的调节作用，对细胞癌变有抑制作用，并由此而得名。当该基因发生点突变、缺失和灭活时，即由野生型转变为突变型，反而促进肿瘤的发生和发展〔7〕。P53基因(抑癌基因)的缺失，引起家族性各种不同癌症的发生，这些不同的癌症包括乳癌、脑瘤、恶性肉瘤、骨癌等，很多都是在年轻时发生的，是一种罕见的常染色体显性遗传疾病〔8〕。主要的特征有早发性的癌症(小于45岁)、同时发生多种部位癌症或肉瘤。确定的诊治需要经基因检测确定。

P53抑癌基因是生物体内一种抑制细胞转变癌细胞的基因〔9〕。细胞中本来就有致癌基因(oncogene)及抑癌基因的存在，只要一方产生病变而失去平衡，癌症就可能会发生。当P53基因发生突变后，由于空间构象影响到转录活化功能及P53蛋白的磷酸化过程，这不仅失去抑制肿瘤增殖的作用，而且突变本身又使该基因具备癌基因的功能〔10〕。突变的P53形成的寡居蛋白不能结合DNA，使得一些癌变基因转录失控导致肿瘤发生〔11〕。值得提出的是，所谓“抑癌基因”也是在肿瘤研究过程中命名的。事实上，细胞抑癌基因也是细胞染色DNA的正常组成成分，具有重要的生理功能。除了肿瘤之外，它们在多种疾病中发挥重要作用〔12〕。本研究提示MDR 基因及突变型P53在食管癌、癌旁组织中均呈高水平表达，癌旁组织中MDR有表达，P53基因突变早于组织形态学改变。目前研究均表明P53基因突变及缺失均预示着肿瘤预后差，对常规化疗不敏感，肿瘤易发生转移。因此，正确评价P53基因状态至关重要。

4 参考文献

1马秀萍，张建中，景 丽，等.COX-2、P53、MDR-1/P-gp在乳腺癌中的表达及其关系研究〔J〕.宁夏医科大学学报，2011；33(5)：455-8.

2Stemmemmn G，Heffelfinger SC，Noffsinger A，etal.The molecular biology of esophageal and gastric cancer and their precursors：oncogenes，tumor suppressor genes and growth factors〔J〕.Hum Pathol，1994；25(8)：968.

3孙 超，时会云，袁东朋.p53及耐药相关基因的表达与非小细胞肺癌化疗耐药性的研究〔J〕.海南医学，2010；21(14)：45-8.

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7杨建洲，王金胜，纪爱芳，等.p53基因多态性与中国人群食管癌易感性的Meta分析〔J〕.现代预防医学，2013；40(5)：808-10,814.

8周保平，李维春，周彩云.食管癌中p53过表达、nm23低表达及其与预后的关系〔J〕.安徽卫生职业技术学院学报，2013；12(2)：83-4.

9杨廷桐，李秀杰.p53、MDR基因在食管癌及癌旁组织中表达的分析〔J〕.肿瘤防治研究，2005；32(8)：460-2.

10王延明，郑建强，白京霞，等.食管癌Mp53和mdr-1,mrp表达的相关性研究〔J〕.临床军医杂志，2003；31(1)：1-3.

11马立兴，张 强，付明燕，等.COX-2、p53和PCNA在食管癌患者的表达及临床意义〔J〕.中国临床研究，2013；26(9)：903-4.

12职锦洲，李秀梅，李秀杰，等.P53、MDR基因在食管癌、癌旁组织及化疗检测对比表达的临床研究〔J〕.河北医学，2004；10(9)：804-6.