肠三叶因子对胃黏膜上皮细胞增殖的影响及其信号转导机制的研究

孙兆瑞，杨志洲，林金锋，邵旦兵，刘红梅，徐 敏，张 炜，孙宝迪，任 艺，邵斌霞，许宝华，唐文杰，聂时南

0 引 言

肠三叶因子(intestinal trefoil factor，ITF)属于三叶肽家族(trefoil factor family，TFF)，是一种小分子多肽物质，主要在小肠及结肠杯状细胞、胃窦黏膜中表达，具有重要的胃肠道黏膜保护和修复作用［1-5］。ITF具有较强的细胞保护作用，可促进胃肠道黏膜上皮细胞增殖迁移，减轻多种损伤因子介导的黏膜损害，抑制细胞凋亡，因而在胃肠道自我保护机制中具有重要作用［6］。尽管目前对ITF生理功能和理化性质的研究较为深入，但其引起胃黏膜上皮细胞增殖的具体分子机制尚未阐明，特别是有关ITF发挥作用的信号转导机制报道较少。本文主要以体外培养的胃黏膜上皮细胞株GES-1为模型，观察ITF对胃年膜上皮细胞增殖作用的影响，并初步探讨ITF促进增殖的信号转导机制与PI3K/Akt在胃黏膜上皮细胞生理过程中的调控作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料 GES-1系购自中国科学院上海细胞库。FBS、DMEM高糖培养基(美国 GIBCO公司)，ITF(美国 PeproTech 公司)，p-Akt、Akt抗体、LY294002(美国 Cell Signaling Technology公司)，β-actin抗体(英国Abcam公司)，CCK-8试剂盒(日本Dojindo公司)。

1.2 GES-1细胞的培养 无菌条件下用含10%FBS的DMEM高糖培养基(加入1%L-谷氨酰胺、1%青链霉素)培养GES-1，以1×106个/mL的密度接种于100 mm的细胞培养皿中，置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中，恒温培养，每3天换液1次，直至细胞生长至80%融合。0.25%胰酶-EDTA消化细胞，以1∶2的比例传代。倒置相差显微镜(日本Nikon公司)下观察细胞的生长情况。

1.3 不同浓度ITF对GES-1细胞增殖活力的影响以2×105个GES-1细胞的密度接种于96孔板，每孔加100μL细胞培养基，置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养至贴壁完全。……