HPLC法测定小儿氨酚黄那敏颗粒的有关物质

刘晓颖 肖雪

哈药集团制药六厂 150000

HPLC法测定小儿氨酚黄那敏颗粒的有关物质

刘晓颖 肖雪

哈药集团制药六厂 150000

目的：对小儿氨酚黄那敏颗粒中的有关物质利用HPLC方法进行测定。方法：利用色谱图上的数据进行分析，方法上可以采用醋酸氨溶液甲醇作为数据研究的流动相，并在实验过程中对进样量、柱温、流速、波长等进行检测。结果：实验终止后发现对氨基酚参与实验过程中，在基础范围内与峰面积上的线性关系呈现良好的状态，平均回收率上的数值达到了99%，检测限的结果为2ng。结论：该实验方法真实有效，操作简便。可以作为小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法进行推广。

高效液相色谱法；小儿氨酚黄那敏；对氨基酚

小儿氨酚黄那敏颗粒在儿科药品使用过程中属于常见的抗感冒制剂药品，这种药品由于含有马来酸氯苯那敏与人工牛黄等药物成分，所以在功效上具有清热解毒的作用，可以对感冒引起的头痛发热等症状进行相应的缓解，在实际的临床使用中得到较好的效果。小儿氨酚黄那敏颗粒主要的药品成分为对乙酰氨基酚，其它杂质组成成分为对氨基酚。

1 仪器与试药

LC-20AB高效液相色谱仪，SPD-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)，XS205DU型电子天平(梅特勒有限公司)。对氨基酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号:100802-201203，含量:100%)，对乙酰氨基酚对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号:100018-201409，含量:100%)，小儿氨酚黄那敏颗粒［批号:150713,161101，161127,161203哈药集团制药六厂，规格:每袋含对乙酰氨基酚125mg，马来酸氯苯那敏0.5mg，人工牛黄5mg］;甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为CAPCELLPAKMGⅡC18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm);流动相为 0.05%醋酸铵溶液-甲醇(85∶15)，检测波长为232nm，流速为1ml•min－1，进样量为10μl，柱温:30℃，理论板数为2000，对氨基酚和对乙酰氨基酚的分离度应符合要求。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取对氨基酚对照品10.10mg，置100ml量瓶中，加20%甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液;取对照品贮备液0.5ml，置10ml量瓶中，加20%甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液;精密称取对乙酰氨基酚对照品24.21mg，置5ml量瓶中，加20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对乙酰氨基酚对照品溶液;取对照品贮备液0.4ml，置10ml量瓶中，加供试品溶液稀释至刻度，作为系统适用性溶液。

2.2.2 供试品溶液

取供试品10袋，精密称定研细，称取适量(约相当于对乙酰基酚125mg)，置25ml量瓶中，加20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.2.3 阴性样品溶液

按处方配比，取除对乙酰基酚外的其他组分，按“2.2.2”项供试品溶液中各组分浓度制得阴性样品溶液。

2.3 专属性试验

取对氨基酚、对乙酰氨基酚对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液，在上述色谱条件下进行分析，结果表明，对氨基酚与对乙酰氨基酚的分离度符合要求.

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对氨基酚对照品贮备液0.1，0.2，0.4，0.6，1.0，2.0ml，置10ml量瓶中，用20%甲醇稀释至刻度，作为系列对照溶液。分别精密吸取 10μl，注入色谱仪，照上述高效液相色谱法测定对氨基酚峰面积，记录色谱图，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=1.99× 103X+8.83×103，r=0.9991，结果表明对氨基酚在9.8784～197.5680ng范围内呈良好线性关系。

2.5 稳定性试验

像《摩西五经》所规定的这种仪式的制度太严格了，他要求食品完全一致。其实摩西是把以色列的饮食神圣化、规格化了，使其完全同一。而中国的春节或其他节日，只有一样相同，其他可以不同，如春节包饺子，元宵节吃元宵，端午节吃粽子，中秋节吃月饼，但是其他的菜肴则根据各地区、各家的喜好，自行安排。

取“2.2.2”项下的系统适用性溶液，分别于0，1，2，4h进行测定，经计算在4h内对氨基酚峰面积的RSD为0.7%(n=4)，表明4h内对氨基酚稳定，且对乙酰氨基酚不影响对氨基酚的含量。

2.6 精密度试验

取“2.2.1”项下的对照品溶液，连续进样6次，计算对氨基酚峰面积的RSD为0.2%(n=6)，表明精密度良好。

2.7 检测限和定量限测定

配制一定浓度的对氨基酚对照品溶液，分别进样，分别计算检测限和定量限，测得对氨基酚检测限为2ng，定量限为7ng。

2.8 重复性试验

取同一批号供试品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液5份，在上述色谱条件下测定，结果对氨基酚平均含量为0.6%，RSD为0.5%(n=5)，表明该方法重复性较好。

2.9 回收率试验

按处方配比，取阴性样品溶液置10ml量瓶中，共9份。精密量取不同浓度对氨基酚对照品溶液加入上述9个量瓶中，制备高、中、低3个不同浓度的溶液，加20%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，分别测定对氨基酚的含量，计算加样回收率，结果平均回收率为99.7%，RSD=0.8%(n=9)。

取4批样品，分别测定，按外标法以对乙酰氨基酚的标示量计算，结果对氨基酚含量分别为0.07%、0.03%、0.06%、0.05%。

3 讨论

3.1 流动相的选择

在流动相的选择上，分别为 0.5%冰醋酸-甲醇（20:80）与0.5%的醋酸氨溶液：甲醇（85:15），原有标准检测方法主要采用冰醋酸溶液的测定，但是为了实验过程中可以进行方便性的操作，本次实验采用此流动相作为实验结果依据时发现该流动相对氨基酚和相邻杂质的分离效果不是很理想，但是在醋酸氨溶液的使用上却得到了很好的参考效果，所以实验研究人员决定使用醋酸氨溶液作为分离制剂进行实验。

3.2 检测波长选择

操作过程中可以采用对氨基酚作为对照品进行实验，此时应使用浓度为5ug•min－1

的溶液作为本次实验的对照液。此时把制成的溶液放在紫外线吸收波长的设备下进行扫描，在扫描过程中发现对氨基酚溶液在232nm波长下可以达到最大吸收，所以本次实验应采用232nm波长作为实际的参考数据。

3.3 溶剂的选择

在药品含量实际检测的过程中,涉及到对制剂中的乙酰氨基酚含量检测步骤时,可以采用三种溶解上的方法进行实验研究，因为乙酰氨基酚元素可以在酸性条件下分解，为了让对乙酰氨基酚在检验过程中的分解情况可以达到实验数据上的参考要求，实验过程中分别选择了流动相、水与20%的甲醇溶液三种试剂的组合进行实验步骤上的开展。实验步骤分别进行完成后，结果发现在20%的甲醇溶液中样品的分离度与性质都达到了较为稳定的状态。所以，根据试剂上的稳定性影响，应选择20%的甲醇溶液作为本次实验的溶剂。

小儿氨酚黄那敏颗粒在实际应用中，被作为儿科常用的感冒药来进行使用。在治疗效果上比较稳定，但在对乙酰氨基酚生产时乙酰化不完全情况下及储存过程中容易发生水解，产生有毒的降解产物对氨基酚，所以针对于这种情况，中国药典在药品制作过程中对于乙酰氨基酚的品种与含量上的质量标准进行了严格的规范，所以药品制剂上的元素毒性对于儿童用药安全具有非常大的影响作用，为了保障儿童用药上的安全，国家应加大对药品制剂含量上的监控与规定。

[1]HPLC法测定氨咖黄敏胶囊中的对氨基酚[J].凌真,李倚云,闻琍毓,丁苏苏,王威.中国药品标准.2013(02)

[2]小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚及马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度考察[J].郝晶晶,李伟,李海亮,梁卓,李金梅.中国药师.2013(01)

[3]HPLC法测定复方氨酚烷胺片中对氨基酚的限量[J].田洪根,王洪明.中国药事.2007(11)

R927.11

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1672-5018（2016）11-240-01