早发型重度子痫前期患者胎盘组织M-CSF、CRH和HO-2表达的研究

伦巍巍，张曦，朱建坡，程国梅郑州大学第三附属医院妇产科，河南郑州　450052



早发型重度子痫前期患者胎盘组织M-CSF、CRH和HO-2表达的研究

伦巍巍，张曦，朱建坡，程国梅
郑州大学第三附属医院妇产科，河南郑州450052

［摘要］目的研究早发型重度子痫前期患者胎盘组织中巨噬细胞集落刺激因子（MCSF）、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、血红素氧化酶-2（HO-2）的表达，探讨它们在早发型重度子痫前期发病机制中的作用。方法整群选择选自2013年9月—2014年8月在郑州大学第三附属医院住院的孕妇73例，年龄22～37岁，孕周32～37周。早发型重度子痫前期患者25例，晚发型重度子痫前期患者23例，正常妊娠对照组25例进行实验对照研究，应用免疫组化方法研究M-CSF、CRH、HO-2的表达情况。结果①三期组孕妇之间年龄、终止妊娠孕周比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）（见表1）。②与正常妊娠组比较，早发型及晚发型重度子痫前期组M-CSF表达水平均明显升高；早发型组M-CSF表达水平明显高于晚发型组。③与正常妊娠组比较，早发型及晚发型组CRH表达水平均明显升高；早发型组CRH表达水平明显高于晚发型组。④与正常妊娠组比较，早发型及晚发型组HO-2表达水平均明显降低；早发型组HO-2表达水平低于晚发型组，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论胎盘中MCSF、CRH的表达增加和HO-2表达降低可能与早发型重度子痫前期的发病有关。

［关键词］重度子痫前期；巨噬细胞集落刺激因子；促肾上腺皮质激素释放激素；血红素氧化酶-2；胎盘

早发型重度子痢前期是指发生于孕34周以前的重度子痫前期［1］，多伴有胎儿生长受限和很高的医源性早产率，围生儿死亡率高达13.3％［2］。早发型重度子痫前期因发病早，病程进展快，常伴有较多并发症合并症，较早发生多脏器功能受损，严重威胁孕妇和胎儿安危，有较高的孕产妇和围生儿病死率。因此，寻找早发型重度子痫前期的病因，如何从病因上着手控制并减少早发型重度子痫前期的发生是产科医生面临的难题，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

在患者知情同意的前提下，整群选取2013年9月—2014年8月在郑州大学第三附属医院住院部的孕妇73例，年龄22～37岁，孕周32～37周。共分为3组，其中早发型重度子痫前期患者25例；晚发型重度子痫前期23例；正常妊娠对照组（无高血压及妊高症家族史，因计划生育、胎膜早破、早产等原因要求剖宫产的患者）25例，正常妊娠组与早发型及晚发型重度子痫前期组比较年龄、孕周均差异无统计学意义（表1），该研究经郑大三附院伦理委员会批准，经孕妇口头同意。重度子痫前期以发病孕周＜34周为早发型，≥34周为晚发型，选择病例为农村无业患者。重度子痫前期的诊断依据苟文丽、谢幸主编的《妇产科学》第八版［3］的诊断标准。

1.2研究方法

标本采集：所有标本均采集自剖宫产术中胎盘娩出后5 min内的胎盘取母面中央绒毛组织1 cm×1 cm× 1 cm，中性福尔马林溶液中固定，常规脱水，石蜡包埋。

1.3M-CSF、CRH和HO-2的检测

包埋后的蜡块经切片、常规HE染色后做免疫组化染色。试剂盒分别购于中山公司、博士德公司及博奥森公司，测定其平均灰度值并应用SPSS17.0分析软件分析。

1.4统计方法

2　结果

2.13组一般资料对比

正常妊娠组与子痫前期组，及早发型与晚发型重度子痫前期组比较年龄、终止妊娠孕周均差异无统计学意义，P＞0.05（表1），且所有研究对象均为剖宫产分娩。

表1　正常对照组和早发型及晚发型重度子痫前期组年龄、终止妊娠孕周比较（±s）

表1　正常对照组和早发型及晚发型重度子痫前期组年龄、终止妊娠孕周比较（±s）

组别　年龄（岁）　分娩孕周（周）正常妊娠组（n=25）早发型组（n=25）晚发型组（n=23）F值P值28.71±7.20 29.25±4.16 29.64±4.27 0.098 0.906 34.96±2.17 34.25±1.93 35.23±1.06 1.084 0.347

2.23组研究对象胎盘组织中M-CSF的表达

M-CSF的阳性颗粒为棕黄色，主要表达于绒毛滋养层细胞、绒毛间质细胞及蜕膜细胞，早发型和晚发型重度子痫前期组M-CSF表达水平明显高于正常妊娠组（P＜0.05），且早发型组高于晚发型组（P＜0.05），差异均有统计学意义，见表2。

表2　3组孕妇胎盘组织M-CSF表达水平的定量比较（±s）

表2　3组孕妇胎盘组织M-CSF表达水平的定量比较（±s）

注：△与正常妊娠组比较P＜0.05；*与早发型重度子痫前期组比较P＜0.05。

组别平均灰度正常妊娠组（n=25）早发型重度子痫前期组（n=25）晚发型重度子痫前期组（n=23）F值P值（87.62±10.83）* （100.60±14.05）△（96.28±12.27）△*14.314 0.001

2.33组孕妇胎盘组织中CRH的表达

CRH主要表达于胎盘绒毛合体滋养层细胞和胎盘小叶血管内皮细胞的胞浆和胞膜，早发型和晚发型重度子痫前期组CRH表达水平明显高于正常妊娠组（P＜0.05），且早发型组高于晚发型组（P＜0.05），差异有统计学意义，见表3。

表3　3组孕妇胎盘组织CRH表达水平的定量比较（±s）

表3　3组孕妇胎盘组织CRH表达水平的定量比较（±s）

注：△与正常妊娠组比较P＜0.05；*与早发型重度子痫前期组比较P＜0.05。

组别平均灰度正常妊娠组（n=25）早发型重度子痫前期组（n=25）晚发型重度子痫前期组（n=23）F值P值（86.36±10.37）*（95.18±12.23）△（90.82±9.88）△*10.716 0.001

2.43组孕妇胎盘组织中HO-2的表达

HO-2主要表达于合体滋养细胞、细胞滋养细胞以及终末绒毛毛细血管内皮细胞胞浆和胞膜，早发型和晚发型重度子痫前期组HO-2表达水平明显低于正常妊娠组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；早发型组低于晚发型组，但二者比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。

表4　3组孕妇胎盘组织HO-2表达水平的定量比较（±s）

表4　3组孕妇胎盘组织HO-2表达水平的定量比较（±s）

注：△与正常妊娠组比较，P＜0.05。

例数平均灰度正常妊娠组（n=25）早发型重度子痫前期组（n=25）晚发型重度子痫前期组（n=23）F值P值86.74±8.25 （81.34±10.67）△（82.78±8.12）△4.501 0.013

3　讨论

早发型重度子痫前期由于其发病早、孕周小、程度重，因此母儿围生结局较晚发型差［4］。相对早发型重度子痫前期，整个晚发型重度子痫前期的发生过程，看来更像是机体与疾病之间一个长期耐受最终失衡的温和过程。另外，近年还有研究认为早发型重度子痫前期孕妇相对于正常孕妇胎盘组织中存在差异表达基因，并参与免疫反应、氧化应激反应和炎症反应等病理机制，与早发型重度子痫前期的发生密切相关［5］，并且还与远期心血管病发生相关［6］。研究认为早发型及晚发型重度子痫前期的发病机理不同，相对于早发型的“胎盘浅着床”，晚发型是“母体因素”导致的疾病，孕妇有着共同的危险因素如肥胖、糖尿病或慢性高血压等，而胎盘是正常的［7］。

孕期蜕膜基质细胞和滋养细胞产生大量的MCSF，蜕膜中的其它细胞如CD16、CD56等细胞也产生M-CSF［6］。胎盘滋养细胞表达M-CSF以及对胎盘滋养细胞的作用是妊娠免疫耐受建立与维持的重要机制。重度子痫前期患者的胎盘中细胞滋养细胞膨胀，并在短期内大批转化为合体滋养细胞，分泌大量的M-CSF；并且炎性细胞浸润、激活而产生M-CSF，M-CSF又可通过其受体引起内皮细胞、单核巨噬细胞释放更多的M -CSF，导致重度子痫前期患者M-CSF升高［8］。

CRH的扩血管作用使胎儿的氧气和营养物质供应增加，有利于缓解胎儿的缺氧状况，以保证胎儿营养物质的供应，这可能为胎儿缺氧的生理性保护作用。子痫前期时胎盘血管痉挛，胎盘缺血使胎儿缺血缺氧，胎儿的这一生理性保护作用促使CRH表达增［9］。Karteris等研究发现CRH可诱导内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和环磷鸟苷（cGMP）的表达，通过激活NO/cGMP途径而调节胎儿胎盘循环。

内源性血红素氧化酶（H0）是一种血红素降解的起始酶和限速酶，HO-2在胎盘分布丰富，主要参与血管重铸，维持胎盘血流动力学的稳定，维持胎盘氧化和抗氧化平衡状态，保证正常的胎盘形成［10］。子痫前期患者胎盘组织中HO-2生成减少，胎盘滋养细胞浸润能力受到影响，引起胎盘着床浅，螺旋动脉的重铸受损，血小板黏附和聚集，造成胎盘缺血、缺氧；并且，HO-2的表达降低及缺氧又使HO-2的活性减弱，导致循环阻力升高并削弱了细胞的保护功能。Ekambaram等通过ELISA方法测定子痫前期患者脐血HO-2表达降低，与我们的研究结果一致［11］。

由于氧化应激使子痫前期患者胎盘组织单核-巨噬细胞及平滑肌细胞增生，分泌大量的M-CSF，而MCSF和M-CSFR结合后又促使单核细胞增殖和巨噬细胞分化，介导炎症反应。HO-2分解血红素产生CO，有研究认为低浓度的CO可以选择性抑制LPS诱导的前炎症因子TNF-α、IL-l8和巨噬细胞炎症蛋白l8的表达，而TNF-α可诱导M-CSF的产生，子痫前期患者胎盘组织中HO-2表达降低，对TNF-α的抑制减弱，间接引起M-CSF升高。另外，HO-2表达减少，对自由基的清除能力降低，超氧阴离子增多，加剧了单核-巨噬细胞和平滑肌细胞的增生，也使M-CSF分泌增多，M-CSFR受体上调。

综上所述，我们可以得出结论，M-CSF、HO-2和CRH通过胎盘血管重铸障碍、血管内皮损伤及氧化应激等方面来参与子痫前期的发病过程，且三者相符相依相互影响，促进疾病的进一步发展，对于早发型重度子痫前期的预防我们也可以从以上几点入手，争取早日从病因上解决疾病的治疗。

［参考文献］

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［5］宋英娜、杨剑秋、刘俊涛，等.早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织中差异表达基因的研究［J］.中华妇产科杂志，2014 （49）：501-505.

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［10］Levytska K，Kingdom J，Baczyk D，et al. Heme oxygenase-1 in placental development and pathology［J］.Placenta，2013，34：291-298.

［11］Ekambaram P，Jayachandran T，Dhakshinamoorthy，L. Differential expression of HSP90α and heme oxygenase in cord blood RBC during preeclampsia［J］.Toxicology mechanisms and methods，2013，23（1/9）：113-119.

Research on M-CSF，CRH and HO-2 Expressions of Placenta Tissues in Patients with Early Onset Severe Preeclampsia

LUN Wei-wei，ZHANG Xi，ZHU Jian-po，CHENG Guo-mei
Department of Obstetrics and Gynecology，The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan Province，450052 China

［Abstract］Objective To research the macrophage colony stimulating factor，corticotropin releasing hormone and heme oxygenase-2 expressions of placenta tissues in patients with early onset severe preeclampsia and discuss their effects in the early onset severe preeclampsia pathogenesis. Methods The delivery women whose ages were between 22 and 37 and gestational weeks were between 32 and 37 hospitalized in our hospital from September 2013 to August 2014 were selected，among them，25 cases were with early onset severe preeclampsia，23 cases were with late onset severe preeclampsia，25 cases with normal pregnancy were selected as the control group，and the M-CSF，CRH and HO-2 expressions were researched by the immunohistochemical method. Results（1）The differences in the age and terminated gestational week between the three groups had no statistical significance，P＞0.05（2）The M-CSF expression level obviously increased in the early and late onset severe preeclampsia groups compared with that in the control group；the M-CSF expression level in the early onset group was obviously higher than that in the late onset group.（3）The CRH expression level in the early and late onset groups obviously increased compared with that in the control group，the CRH expression level in the early onset group was obviously higher than that in the late onset group.（4）The HO-2 expression level in the early and late onset groups obviously decreased compared with that in the control group；the HO-2 expression level in the early onset group was lower than that in the late onset group，and the difference had no statistical significance，P＞0.05. Conclusion The increase of MCSF and CRH expressions and decrease of HO-2 expression may be correlated with the onset of early onset severe preeclampsia.

［Key words］Severe preeclampsia；Macrophage colony stimulating factor；Corticotropin releasing hormone；Heme oxygenase-2；Placenta

［中图分类号］R5

［文献标识码］A

［文章编号］1674-0742（2016）05（b）-0081-03

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.14.081

［作者简介］伦巍巍（1981.9-），女，硕士，主治医师，研究方向：早发型重度子痫前期等相关妇产科临床治疗。

收稿日期：（2016-02-19）