特应性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究*

蒋有让，刁庆春，史丙俊，王樱霖，徐可佳，冯　林

(重庆市中医院/重庆市第一人民医院皮肤科　400011)



特应性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究*

蒋有让，刁庆春△，史丙俊▲，王樱霖，徐可佳，冯林

(重庆市中医院/重庆市第一人民医院皮肤科400011)

[摘要]目的探讨特应性皮炎(AD)外周血清Th1/Th2/Th17平衡的变化规律及相关细胞因子的变化规律，以进一步探讨AD发病的免疫机制。方法采用流式荧光技术测定47例AD患者(AD组)和40例健康自愿者(对照组)外周血清中的γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-17、IL-21、IL-23水平并进行统计分析，从而分析Th1/Th2/Th17/Treg平衡在AD中变化规律。结果在AD患者血清中，IL-4水平较对照组升高(P<0.05)，IL-17、IL-23的水平显著高于对照组(P<0.05)；IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-17较对照组明显降低(P<0.01)；IL-17与AD严重程度(SCORAD)评分呈正相关(P<0.05)。结论在AD病程中Th1/Th2、Th1/Th17降低，Th1/Th2/Th17平衡的漂移可能是AD发病的重要机制。

[关键词]特应性皮炎；细胞因子类；Th1细胞；Th2细胞；Th17细胞；流式荧光技术

特应性皮炎(Atopic dermatitis，AD)被认为是一种复发性、瘙痒性、慢性炎症性皮肤疾病，其发病机制目前尚不完全清楚，特别是如何活化、维持活化功能紊乱的反应性T细胞的机制尚不明确。当抗原刺激的信号刺激初始CD4+T淋巴细胞后，相继发现并且认知了Th1、Th2、Th17等不同的CD4+T细胞亚群，不同的细胞亚群在体内主要功能是在通过分泌不同的细胞因子来相互促进、相互制约，进而形成了一个CD4+T细胞为主的免疫调节网络，在各种炎症性及自身免疫性疾病中扮演了重要作用。本课题使用流式荧光技术检测AD外周血清中Th1、Th2、Th17特异性细胞因子来探索它们在AD的变化规律，以进一步探讨AD发病的免疫机制。

1资料与方法

1.1一般资料选择本院2012年10月至2013年3月在皮肤科门诊就诊并诊断为AD的患者47例(AD组)，其中男25例，女22例；年龄4～20岁，平均(9.09±4.53)岁，AD严重程度(SCORAD)评分24.1～91.1分，平均(54.61±16.32)分。选择同期本院健康自愿者40例作为对照组，其中男21例，女19例；平均年龄(10.25±4.67)岁。两组对象性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要试剂Human Th17 Magnetic Kit由美国Luminex公司生产。

1.2.2检测方法(1)血清标本的收集：两组对象均抽取外周静脉血5 mL留取血清，分装冻存(冻存时间不超过6个月)，统一检测；(2)操作步骤：按试剂说明书操作步骤在流式荧光仪上进行细胞因子的检测。

2结果

2.1两组对象血清IL-4、IL-17、IL-23等水平比较AD组患者血清中IL-4水平较对照组升高(P<0.05)，IL-17、IL-23水平明显高于对照组(P<0.01)，AD组IL-21、IFN-γ的水平较对照组无明显差异(P>0.05)，AD组IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-17水平明显低于对照组(P<0.01)，见表1。

2.2AD组患者T细胞亚群相关细胞因子与SCORAD评分严重程度的相关性IL-17与AD呈正相关(P<0.01 )，IFN-γ、IL-4、IL-21、IL-23与SCORAD评分严重程度无明显相关性(P>0.05)，见表2。

表1　　两组对象各细胞因子水平比较

表2　　AD组患者各细胞因子与SCORAD评分的相关性

3讨论

IFN-γ、IL-4分别是Th1、Th2细胞的特征性细胞因子[1]，Th17最主要的效应分子为IL-17A(即IL-17)，其次有IL-21和IL-23[2]。本实验检测出IFN-γ无明显变化，IL-4升高，且IFN-γ/IL-4明显变化，提示Th1/Th2平衡的改变参与AD的病程。有学者在1986年首次提出了CD4+T细胞可分为Th1细胞、Th2细胞两种独立的各具有不同的特殊的细胞因子谱和生物学功能的细胞亚群，并且用之解释获得性免疫相关现象[3]。而AD就被认为是经典的Th1/Th2失衡类型的皮肤疾病，Th1、Th2细胞参与免疫主要是通过分泌不同的细胞因子，细胞因子间相互交叉调节、相互抑制，从而形成动态平衡。一旦此动态平衡被打破，机体便会因为Th1占优势或Th2占优势形成Th1/Th2“漂移”状态而发病。

Th17细胞是近年来新发现的CD4+T细胞亚群，其在免疫应答、自身免疫中均有重要的意义[4]。Th17细胞以分泌在IL-17和IL-21、IL-23等因子为主要特征， IL-17的生理作用主要表现在炎症反应的介导，中性粒细胞的动员、募集和活化，以及参与自身免疫性、感染性疾病的病程等[5-6]。本研究得出IL-17、IL-23在AD中明显升高，且IL-17的升高与AD严重程度(SCORAD评分)明显相关，提示AD患者的发病免疫学机制不但有Th1/Th2细胞失衡的因素，同时有Th17细胞失衡的因素。马蕾等[7]通过检测外周血中Th17细胞，也发现并推测其高表达可能是AD发病中异常免疫反应重要原因。在AD病程中，慢性期至急性期发展过程中Th1/Th2平衡的“漂移”可能与Th17细胞增多有关。IL-23也主要是Th17细胞所分泌，它的主要作用在于调节促进Th17细胞的生长、促进分泌IL-17等[8]。本研究检测到IL-23明显升高，从而使Th1/Th2/Th17平衡向Th17细胞方向，即炎症加重方向“漂移”，促进了AD的病程。IFN -γ、IL-4和IL-21是Th17细胞的负性调节因子[9]；在本研究中IFN-γ、IL-21无明显变化，但IFN-γ/IL-17明显降低，可见机体无法产生足够的Th17细胞抑制因子，在整个免疫调节机制中也使Th1/Th2/Th17平衡向炎症加重方向“漂移”，免疫反馈调节已经受到一定的破坏，无法改变机体过度免疫的状态，炎症的产生与加重在所难免。

本研究所采用新型生物学检测方法-流式荧光技术，符合科学技术发展的需要。被国内外学者应用于检测血浆、泪液、痰等不同标本中不同的细胞因子，其检测结果与ELISA法比较，两者相关性好，流式荧光技术动力学线性范围也比ELISA宽、灵敏度更高[10-13]。

综上所述，AD患者外周血清细胞因子中，无论Th1/Th2、Th1/Th17均存在相应的平衡的“漂移”，提示平衡的打破在AD的病程中起了相应的重要的作用，其相应的细胞因子相互作用、相互抑制，构成了一个复杂的细胞因子网络。由此得出，Th1/Th2/Th17失平衡可能是AD发病的重要免疫学机制。而本试验不足在于没有同时使用流式荧光技术检测AD外周血中的Th1、Th2、Th17细胞的具体数量的变化，有待于进一步检测和扩大样本检测。

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Study on Th1/Th2/Th17 balance in atopic dermatitis*

JiangYourang,DiaoQingchun△,ShiBingjun▲,WangYinglin,XuKejia,FengLin

(DepartmentofDermatology,ChongqingMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine/ChongqingMunicipalFirstPeople′sHospital,Chongqing400011,China)

[Abstract]ObjectiveTo research the change rule of peripheral serum Th1/Th2/Th17 balance and relevant cytokines in atopic dermatitis(AD) and to further study its immunologic mechanism.MethodsThe levels of peripheral serum IFN-γ,IL-4,IL-17,IL-21 and IL-23 in the patients with AD were detected by the flow immunofluorescence technology and the detection results were performed the statistical analysis,thus the change rule of Th1/Th2/Th17 balance in AD was analyzed.ResultsThe IL-4 level in peripheral serum of the patients with AD was increased compared with the healthy control group (P<0.05);the IFN-γ/IL-4 and IFN-γ/IL-17 in the AD group were significantly decreased compared with the control group(P<0.01);IL-17 was positively correlation with SCORAD scores of AD severity(P<0.05).ConclusionTh1/Th2 and Th1/Th17 are decreased in the AD course.Th1/Th2/Th17 balance drift may be the important mechanism of AD pathogenesis.

[Key words]atopic dermatitis;cytokines;Th1 cells;Th2 cells;Th17 cells;flow immunofluorescence technology

doi:论著·临床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.18.010

基金项目：重庆市卫生局中医科研计划立项目录(2011-2-102，2012-2-182)；重庆市自然科学基金资助项目(cstc 2012jjA 10141)。

作者简介：蒋有让(1987-)，住院医师，硕士研究生，主要从事免疫性皮肤病、性病方向研究。△通讯作者，E-mail：qchdiao@vip.sina.com；▲通讯作者，E-mail：www.1806740182.qq.com。

[中图分类号]R751.1

[文献标识码]A

[文章编号]1671-8348(2016)18-2482-02

(收稿日期：2015-11-29修回日期：2016-03-13)