胃癌中β-catenin、ki-67和Her-2/Neu表达及对胃癌侵袭、转移的影响

陈　超，姚莉敏

(1.信阳职业技术学院医学院，河南信阳 464000；2.信阳职业技术学院附属医院，河南信阳 464000)



胃癌中β-catenin、ki-67和Her-2/Neu表达及对胃癌侵袭、转移的影响

陈超1，姚莉敏2

(1.信阳职业技术学院医学院，河南信阳 464000；2.信阳职业技术学院附属医院，河南信阳 464000)

[摘要]目的探讨β-连环蛋白(β-catenin)、增殖细胞核抗原ki-67和人表皮生长因子受体2(Her-2)/Neu在不同胃癌病理特征中的表达差异及在胃癌发生、发展和侵袭、转移中的作用。方法分别采用免疫组化检测150份胃癌组织(观察组)和70份正常胃黏膜(经病理检测无癌变作为对照组)中β-catenin、ki-67及Her-2/Neu的表达，分析β-catenin、ki-67及Her-2/Neu与胃癌病理特征的关系。结果观察组患者β-catenin、ki-67、Her-2/Neu阳性率明显高于对照组(χ2=30.51、63.74、11.38，P<0.01)；分化程度影响β-catenin、ki-67、Her-2/Neu表达(χ2=15.82、8.61、8.11，P<0.01)；淋巴结转移影响β-catenin、ki-67表达(χ2=6.26，P<0.05；χ2=7.36，P<0.01)；侵润深度影响β-catenin、ki-67表达(均χ2=11.34，P<0.01)； TMN影响ki-67、Her-2/Neu表达(χ2=10.85、14.24，P<0.01)；β-catenin和ki-67表达呈正相关。结论β-catenin、ki-67和Her-2/Neu可反映肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的情况，有助于对患者预后的判断。

[关键词]β-连环蛋白；ki-67抗原；基因，erbB-2；胃肿瘤

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新增病例约100万，将近40%病例发生在中国。侵袭和转移是影响胃癌预后的主要因素，是导致患者死亡重要原因。多种胃癌的标志物与胃癌的侵袭和转移有关。ki-67是一种与细胞增殖特异相关的核抗原，主要用于判断癌细胞增殖活性。人表皮生长因子受体2(Her-2)/Neu是一个跨膜受体，其表达和活性与肿瘤的发生、发展密切相关[1]。本研究采用免疫组化检测β-连环蛋白(β-catenin)、增殖细胞核抗原ki-67和Her-2/Neu在正常胃黏膜与胃癌组织中的表达，分析β-catenin、ki-67和Her-2/Neu与胃癌病理特征的关系。

1资料与方法

1.1一般资料选取本院2011～2013年实施手术切除并有完整随访资料的150例胃癌患者的存档石蜡块作为观察组，另取胃镜检查经病理证实无癌变的新鲜正常胃黏膜组织70份作为对照组。观察组：男101例，女49例；年龄35～75岁，平均(58.22±11.35)岁；黏液腺癌60例，管状腺癌42例，印戒细胞癌48例。对照组：男55例，女15例；年龄36～77岁，平均(57.34±10.86)岁。两组患者在性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要仪器和试剂LEICA RM2135切片机购自德国徕卡仪器有限公司；生物医学微波炉购自上海医疗器械厂；显微镜CX-40购自日本Olympus公司；4 ℃冰箱购自海尔冰箱厂；JD801形态学图像分析仪购自江苏省捷达科技发展有限公司；Nikon eclipse E800光学显微镜、酶标仪购自日本Nikon公司；鼠抗人β-catenin单克隆抗体、兔抗人ki-67多克隆抗体、兔抗人Her-2/Neu多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；SP免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2免疫组化方法石蜡块连续切片，每片2.5 μm，60 ℃烤片过夜，二甲苯脱蜡2次，梯度乙醇复水，3%的过氧化氢溶液浸泡切20 min，柠檬酸盐修复液高压抗原修复，血清封闭组织45 min，ki-67(1∶100)、β-catenin(1∶50)和Her-2/Neu(1∶100)一抗孵育过夜，二抗孵育30 min，滴加有辣根酶标记的链霉卵白素液体孵育30 min，DAB显色，苏木素染液复染，封片观察。β-catenin、ki-67和Her-2/Neu免疫组化染色阳性表达，见图1。

A:β-catenin；B:ki-67;C:Her-2/Neu。

图1β-catenin、ki-67和Her-2/Neu 免疫组化(SP×400)

1.2.3评价标准参照文献[2]的标准，β-catenin阳性染色为细胞膜呈现棕褐色细小颗粒状着色，ki-67阳性染色为细胞核内出现棕黄色颗粒，Her-2/Neu阳性染色为细胞膜棕黄色染色。判断标准为阳性细胞打分+染色强度打分，0分为“-”，1～2分为“+”，3～4分为“++”，5～6分为“+++”。光镜下计算阳性细胞数，0～10%为0分，>10%～<50%为1分，50%～<75%为2分，75%～100%为3分；染色强度，无染色0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。

1.3统计学处理所有数据采用SPSS12.0软件进行统计分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，采用Spearman相关系数检验分析指标之间的相关性。以P<0.05有统计学意义。

2结果

2.1两组患者β-catenin、ki-67 和Her-2/Neu阳性率比较观察组β-catenin、ki-67、Her-2/Neu阳性率明显高于对照组(χ2=30.51、63.74、11.38，P<0.01)。两组患者β-catenin、ki-67等阳性率比较见表1；观察组患者中β-catenin、ki-67、Her-2/Neu阳性率分布见表2。

2.2观察组患者β-catenin、ki-67及Her-2/Neu与胃癌病理特征的关系不同性别、年龄和瘤体大小患者的β-catenin、ki-67及Her-2/Neu比较，差异无统计学意义(P>0.05)；不同分化程度患者β-catenin、ki-67、Her-2/Neu比较，差异均有统计学意义(χ2=15.82、8.61、8.11，P<0.01)；有无淋巴结转移患者β-catenin和ki-67比较，差异有统计学意义(χ2=6.26、P<0.05，χ2=7.36，P<0.01)；不同侵润深度患者β-catenin和ki-67比较，差异有统计学意义(χ2=11.34，P<0.01)；不同TMN分期患者ki-67和Her-2/Neu比较，差异均有统计学意义(χ2=10.85、14.24，P<0.01)，见表3。

表1　　两组患者β-catenin,ki-67等阳性细胞比较[n(%)]

表2　　观察组患者β-catenin、ki-67等阳性细胞分布[n(%),n=150]

表3　　观察组患者β-catenin、ki-67及Her-2/Neu与胃癌病理特征的关系[n(%),n=150]

2.3β-catenin、ki-67和Her-2/Ne相关性分析β-catenin和ki-67同时阳性患者为105例(70.00%)，同时阴性患者20例(13.33%)；通过2×2配对资料的关联性分析，发现Pearson列联系数r=0.501(P<0.01)，Pearsonχ2=40.511(P<0.01)；β-catenin和ki-67呈正相关，具有良好的一致性。β-catenin和Her-2/Neu同时阳性患者为3例，同时阴性患者3例；通过2×2配对资料的关联性分析，发现Pearson列联系数r=0.211(P>0.05)，Pearsonχ2=3.21(P>0.05)；β-catenin和Her-2/Neu无相关性，见表4、5。

表4　　观察组β-catenin和ki-67关联分析

表5　　观察组β-catenin和Her-2/Neu关联分析

3讨论

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，在所有恶性肿瘤的病死率中高居第一或第二位，中国每年死于胃癌的人数约16万人。胃癌是一种具有高度侵袭特性的恶性肿瘤，其转移过程主要包括：肿瘤部位血管生成、黏附内皮细胞和基膜、细胞外基质和基膜、定位于继发器官、肿瘤细胞增殖和血管生成[3]。肿瘤的转移机制一直是困扰医学界的难题，寻找提示转移的肿瘤标记物、并建立行之有效的检测方法和显得尤为重要。如果仅仅依靠某些传统的病理指标来评估患者的预后，并不能充分满足临床的需要，因此筛选和胃癌侵袭、转移的相关肿瘤因子具有重要的意义。

ki-67主要表达在增殖细胞的细胞核中，它能够识别细胞周期中核抗原上的一个抗原决定簇，与细胞的合成代谢有关，能较客观地反映肿瘤的性质。ki-67与胃癌的相关性研究报道并不一致，有研究证实ki-67与肿瘤的分化程度、Lauren分型、淋巴转移明显相关[4]，但另一项研究中认为ki-67表达与肿瘤患者的年龄、性别、分期和预后等都无统计学差异[5]。而在本研究中，不同分化程度、是否淋巴结转移、浸润深度和TMN分期患者ki-67的表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。

Her-2/Neu是目前已知的60余种肿瘤基因之一，Her-2/Neu在正常情况下处于非激活状态，Her-2/Neu受各种因素激活后，导致细胞无序生长，运动、浸润，转移，可抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤新生血管生成，增加肿瘤细胞的侵袭力[6]。一般只在胎儿时期表达，成年后只能在极少数组织中发现其低水平表达。胃癌中Her-2/Neu阳性率各文献报道为6%～43%[7]，在本研究中为16.67%。在乳腺癌和胃癌的细胞中虽然高表达了Her-2/Neu蛋白，但未见Her-2/Neu基因的扩增，为此本文并未检测Her-2/Neu基因的表达水平。本研究中TMN分期患Her-2/Neu的表达差异有统计学意义(P<0.05)。

β-catenin是在细胞质和细胞膜中的一种单链多肽，具有介导细胞黏附及信号转导双重活性，参与Wnt信号转导及酪氨酸蛋白激酶信号转导途径,在胚胎发育、细胞分化和增生及癌症的发生过程中发挥重要的功能[8-9]。有研究报道，在结肠癌中高表达β-catenin的癌细胞多集中于肿瘤边缘浸润性较强部分[10-11]，这样的表达模式有利于β-catenin参与癌细胞内信号的传导，从而增加癌细胞的侵袭能力。本研究中分化程度、淋巴结转移和侵润深度均可影响β-catenin的表达，说明β-catenin的异常可指示胃癌细胞的侵袭和转移能力。

综上所述，β-catenin、ki-67及Her-2/Neu可反映肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的情况，胃癌术后检测β-catenin、ki-67及Her-2/Neu表达水平，可一定程度反映胃癌的生物学特征，为临床治疗提供指导。

参考文献

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Expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neuin in gastric carcinoma and their influence on infiltration and metastasis of gastrie carcinoma

ChenChao1,YaoLimin2

(1.MedicalCollege,XinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang,Henan464000,China;2.AffiliatedHospitalofXinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang,Henan464000,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression differences of β-catenin,Her-2/Neu and ki-67 in different pathological features of gastric cancer and their role in the occurrence,progression,invasion and metastasis of gastric cancer invasion and metastasis.MethodsThe expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu in 150 gastric cancer tissue samples(observation group) and 70 normal gastric mucosal samples were detected by adopting the immunohistochemistry method,and the relationship between the expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu with the pathological features of gastric cancer was analyzed.ResultsThe β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu positive rate in the observation group was significantly higher than that in the control group (χ2=30.51,63.74,11.38,P<0.01);the differentiation degree affected the expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu expression (χ2=15.82,8.61,8.11,P<0.01)；the lymph node metastasis affected the expression of ki-67 and β-catenin (χ2=6.26,P<0.05;χ2=7.36,P<0.01);the invasion depth affected the expression of β-catenin and ki-67(χ2=11.34，P<0.01)；TMN affected the expression of ki-67 and Her-2/Neu(χ2=10.85,14.24,P<0.01)；the β-catenin and ki-67 expression showed positive correlation.Conclusionβ-catenin,ki-67 and Her-2/Neu may reflect the proliferation,invasion and metastasis situation of tumor cells and their detection conduces to the judgment of prognosis.

[Key words]β-catenin;ki-67 antigen;genes,erbB-2;stomach neoplasms

doi:论著·临床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.18.017

作者简介：陈超(1980-)，讲师，在职硕士研究生，主要从事病理学研究。

[中图分类号]R735.2

[文献标识码]A

[文章编号]1671-8348(2016)18-2504-03

(收稿日期：2015-12-01修回日期：2016-03-16)