结肠癌相关转录因子-1在胃腺癌中的表达及意义

赵云波,吕红梅

(1.佳木斯大学附属第一医院 普外三科，黑龙江 佳木斯154002;2.黑龙江中医药大学佳木斯学院)



结肠癌相关转录因子-1在胃腺癌中的表达及意义

赵云波1,吕红梅2*

(1.佳木斯大学附属第一医院 普外三科，黑龙江 佳木斯154002;2.黑龙江中医药大学佳木斯学院)

在世界范围内，胃癌是第四大最常见的癌症，也是癌症死亡的第二大原因，近年来我国胃癌发病率逐年增加[1，2]。结肠癌相关转录因子-1(CCAT-1)是一个拥有2628核苷酸分子的长链非编码RNA，新近发现CCAT-1在胃癌组织、癌旁组织中高度表达[3]。目前国内还没有关于正常胃组织、胃癌组织、癌旁组织、幽门螺杆菌阴性和阳性及肿瘤分期患者中CCAT-1表达方面的研究，并且本研究排除新辅助化疗的病人，以消除化疗对CCAT-1表达的潜在影响。

1　资料与方法

1.1一般资料

35例胃腺癌标本(均经术后病理证实并进行回顾，以确定肿瘤分期)取自2013年1月-2014年12月接受手术切除的病人，其中男26例，女9例，年龄24-89岁(平均56.1±8.5岁)，取胃腺癌病人的肿瘤组织和癌旁组织，T2期11例，T3期18例，T4期6例；30例正常胃组织(正常对照组)取自同期患上消化道穿孔行胃大部切除术的病人，其中男11例，女19例，年龄18-39岁(平均24.4±7.2岁)，幽门螺旋杆菌感染阳性12例，阴性18例。

1.2方法

标本取材后，先置于液氮中冷冻1h,快速取出后置于-80 ℃冰箱中保存待测.实时定量PCR试剂盒(南京生兴生物技术有限公司),单链cDNA合成试剂盒(上海硕盟生物科技有限公司)，RNA提取(TRIzol,GibcoBRL)DNA纯化试剂盒(北京博大生物科技有限公司),实时定量PCR仪(Rocher)。引物由美国应用生物系统公司合成，产物长度为176bp。GAPDH作为对照基因。

CCAT-1：5′-TCACTGACAACATCGACTTTGAAG-3′,3′-GGAGAAAACGCTTAGCCATACAG-5′。用TRIzol提取组织总RNA[4]。总RNA提取之后,测得各管内所提总RNA的浓度和纯度[5]。各管均取2μg总RNA,逆转录总反应体系25μl,用M-MLV逆转录酶42 ℃逆转录1h,合成cDNA。PCR反应用美国应用生物系统公司QRT-PCR热循环仪进行。QRT-PCR程序运行40个循环，之后在95℃ 10min的初始孵育。每个循环包括95℃×15s。和60℃×1min。结果进行了分析CCAT-1的相对量(RQ)的表达。

1.3统计学方法

数据应用SSPS18.0软件进行统计学处理,组间统计采用独立样本t检验及单因素方差分析进行比较。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1CCAT-1mRNA在胃腺癌组织、癌旁组织和正常胃组织中的表达

胃腺癌组织、癌旁组织中CCAT-1mRNA水平显著高于正常胃组织,具有统计学差异(见表1)；30例正常胃组织中幽门螺杆菌阴性和阳性患者中CCAT-1mRNA表达无显著差异，见图1；在35例胃腺癌病人的CCAT-1mRNA表达与TNM分期没有达到统计学意义，见图2。

表1　CCAT-1mRNA在胃腺癌、癌旁组织和正常胃组织中的表达水平

图1　胃组织中CCAT-1 mRNA的水平与Hp感染的关系

图2　胃癌组织中CCAT-1 mRNA的水平与分期的关系

3　讨论

胃癌预后同早期诊断、早期治疗、肿瘤分期密切相关，但是在我国，超过80%的患者在诊断时已是中晚期胃癌，病人预后差[6,7]。故生存率的提高取决于密切监测患癌高风险人群和新治疗策略的应用。近年来，全基因组和转录组测序的证据表明，长链非编码RNA(lncRNAs)属于基因组中非编码部分，其非编码部分在肿瘤发生、发展中起到关键作用[8]。lncRNAs在各种癌症中过度表达，能够起到基因样的作用的lncRNAs是结肠癌相关转录-1(CCAT-1)[9]。崔戈发现CCAT-1在结肠癌显著过度表达。最近的一项研究显示，在胃癌组织中，发现在CCAT-1的启动子区域c-MYC直接结合E-box元素，并且当CCAT-1异位表达时，能增加启动子活性和CCAT-1的表达[11]。此外，c-MYC是一种重要的原癌基因,它具有促进细胞增殖和肿瘤血管生成的作用[12],可降低基因组稳定性,并且与细胞分化、凋亡及周期调控密切相关,CCAT-1可能为c-MYC诱导核抗原,是Myc的靶基因,异常表达能促进细胞增殖和迁移[13]。

本研究结果表明，胃癌组织中CCAT-1的表达水平大约是健康胃组织中的12倍(RQ=21.91±5.31和1.58±0.48,P<0.001)，胃癌组织中CCAT-1的表达水平与癌旁组织比较无统计学意义(21.91±5.31、18.22±1.50， P=0.243)。虽然幽门螺杆菌感染的存在被认为是一个胃癌发生、发展的主要危险因素[14]，但本研究显示，正常胃组织中幽门螺杆菌阴性和阳性患者中CCAT-1mRNA表达无显著差异(RQ= 2.22±0.27与1.92±0.47，P=0.061)。因在我们的研究中没有进行癌前病变及早期胃癌组织中CCAT-1表达水平的测定，病人均为中晚期胃癌，故导致本研究结果胃癌病人的CCAT-1mRNA表达与TNM分期没有达到统计学意义(T4-RQ=23.42±2.07，T3-RQ=22.57±3.46，T2-RQ=22.15±2.59，P>0.05)。

我们相信，CCAT-1具有成为一种胃癌生物标志物的潜力，对提高胃癌的早期诊断和动态监测以及靶向分子治疗有重要作用，但需要大规模的研究胃癌的各个阶段CCAT-1的表达水平，并研究CCAT-1参与胃癌癌变的确切分子机制。

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