不同动物来源转移因子(TF)对肉仔鸡T细胞免疫功能及免疫器官指数影响的比较研究

何孟莲 ， 赵满达 ， 李 芳

(山东畜牧兽医职业学院 ， 山东潍坊261061)

不同动物来源转移因子(TF)对肉仔鸡T细胞免疫功能及免疫器官指数影响的比较研究

何孟莲 ， 赵满达 ， 李 芳

(山东畜牧兽医职业学院 ， 山东潍坊261061)

本研究用不同动物来源转移因子(TF)进行AA+肉仔鸡T细胞免疫功能及免疫器官指数影响的比较研究。采用T细胞体外转化增殖和T细胞体内转化增殖实验，来探讨不同动物来源TF免疫活性和对T细胞的体内和体外转化增殖效果的一致性；给1 d肉仔鸡饮水投服不同动物来源TF，7 d、14 d、21 d采样检测。实验数据分析证明，各实验组TF均对肉仔鸡T细胞体外和体内转化增殖具有促进作用，其中乌骨鸡来源TF作用最强；TF对肉仔鸡免疫器官指数影响实验，实验数据分析证明，TF对肉仔鸡免疫器官具有促生长作用，并表明实验组中乌骨鸡TF对免疫器官促生长作用最强。

TF； 肉仔鸡； T细胞免疫活性； 免疫器官指数

转移因子(TF)具有活化T细胞，促IFN和IL生成，活化巨噬细胞的作用[1]。TF是存在于T细胞内的免疫活性物质[2]。TF分子量小，无热源，无免疫原性，无毒副作用，剂量小，来源广。研究证实，不同动物来源的TF调节对T细胞功能的作用，促受体T细胞激活作用[3-4]。未见有不同动物来源TF对T细胞免疫功能调节效果比较研究的报道。本研究探讨不同动物来源的TF对肉仔鸡T细胞体内外转化增殖作用及免疫器官指数的影响比较研究，筛选出对肉仔鸡免疫调节作用最佳的一种TF。同时，采用T细胞体内外转化增殖试验，来探讨TF对T细胞的体内外转化增殖作用的一致性。

1 材料与方法

1.1 试验动物 非免疫商品AA+肉仔鸡共1 000羽。

1.2 TF的提取及活性检测 TF的提取根据文献[5]制备TF提取物。用蔡氏滤菌器除菌，除菌后TF置于-20 ℃保存备用。TF的活性检测根据文献[6]检测TF的活性。

1.3 不同动物来源TF 对AA+肉仔鸡T细胞体外转化增殖试验

1.3.1 试验AA+肉仔鸡淋巴细胞悬液的制备 7日龄仔鸡心脏采血，加肝素抗凝，根据文献[7]制备淋巴细胞悬液。

1.3.2 淋巴细胞的培养 将淋巴细胞在96孔板中培养(37 ℃ 5% CO2)68 h，吸出50 μL上清液，加入10 μL MTT，继续培养4 h加入100 μL DMSO裂解细胞[8]。

1.3.3 不同动物来源TF对AA+肉仔鸡T细胞转化增殖的影响 试验共设10个组，分别为空白对照组、PHA对照组、猪TF组、肉鸡TF组、肉鸭TF组、乌骨鸡TF组、牛TF组、绵羊TF组、山羊TF组、犬TF组等10个组别，每组重复5孔。根据文献[9-11]检测T淋巴细胞转化增值效果。淋巴细胞转化指数以SI值表示。

1.4 不同动物来源TF对AA+肉仔鸡T细胞体内转化试验(α-乙酸萘酯酶染色方法)

1.4.1 试验分组 非免疫AA+肉仔鸡1 000羽，分10组，分别为空白对照组、PHA对照组、猪TF组、肉鸡TF组、肉鸭TF组、乌骨鸡TF子组、牛TF组、绵羊TF组、山羊TF组、犬TF组等，每组100羽，分栏饲养。试验组3日龄肉仔鸡分别饮水添加1 000单位/100 Kg不同动物来源TF，PHA组50 mg/1 000羽饮水、空白对照组饮水中不添加任何物质。饮水投药的第24、72、120、168、240小时采血涂片，待检。

1.4.2 α-乙酸萘酯酶染色方法 根据文献[12]对样品进行染色，并显微镜观察其结果。

1.5 不同动物来源TF对肉仔鸡免疫器官指数影响比较试验

1.5.1 试验动物分组及处理 非免疫AA+肉仔鸡100羽随机分组，对照组、PHA组、乌骨鸡TF组、犬TF组、肉鸭TF组、肉鸡TF组、猪TF组、绵羊TF组、山羊TF组和牛TF组等10组，每组60羽。实验组1日龄肉仔鸡分别饮水添加1 000单位/100Kg不同来源TF，PHA组50mg/1 000羽饮水、对照组饮水中不添加任何物质。

1.5.2 免疫器官指数的计算 于7、14、21日龄鸡放血致死，称取体重，摘取脾脏、胸腺、腔上囊，称取湿重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官鲜重(g)/体重(g)×1 000[13]。1.6 试验数据分析 试验数据用SAS软件进行分析。

2 结果

2.1 不同动物来源TF对肉仔鸡T细胞体外转化增殖实验 每一组 5个孔的数据重复性较高，表明TF对T细胞的体外转化增殖作用稳定。各实验组与空白对照组和PHA对照组比较，数据分析，差异极显著，表明各实验组TF对肉仔鸡T细胞体外转化增殖作用显著；不同动物来源TF对肉仔鸡T细胞体外增殖作用强度不同，乌骨鸡来源TF与其他实验组比较，结果表明，乌骨鸡来源TF对T细胞体外转化增殖作用最强。

表1 不同动物来源TF对肉仔鸡T细胞体外转化增殖试验

注：1.对照组和的试验组比较，*为差异显著，**为差异极显著； 2.乌骨鸡TF组和其他试验组比较，a为差异显著，b为差异极显著

2.2 不同动物来源TF对肉仔鸡T细胞体内转化试验(α-乙酸萘酯酶染色方法) 各试验组数据与空白对照组和PHA对照组比较，差异极显著，试验组TF对肉仔鸡T细胞体内转化增殖具有显著促进作用；不同动物来源TF作用强度不同，乌骨鸡来源TF作用最强。从第24小时的数据可看出，TF的促T细胞的体内转化增殖作用反应迅速，效果明显；从第240小时的数据可看出，TF的促T细胞的体内转化增殖作用持续时间较长，尤其乌骨鸡来源TF即使到了第240小时也能维持较高的活性。

2.3 不同动物来源TF对肉仔鸡免疫器官指数影响比较试验 乌骨鸡TF与其他各试验组比较，与犬TF组7、14、21日龄肉仔鸡胸腺、脾脏及14日龄腔上囊比较，差异极显著。与肉鸭TF组7、14、21日龄肉仔鸡胸腺、脾脏及14、21日龄腔上囊比较，差异极显著；与7日龄腔上囊比较，差异显著。与肉鸡TF

表2 不同动物来源TF对肉仔鸡T细胞体内转化增殖试验

注：1.对照组和试验组比较，*为差异显著，**为差异极显著； 2.乌骨鸡TF组和其他试验组比较，a为差异显著，b为差异极显著

组7、14、21日龄肉仔鸡胸腺、脾脏及14、21日龄腔上囊比较，差异极显著；与7日龄腔上囊比较，差异显著。与猪TF组7、14、21日龄肉仔鸡胸腺、脾脏及14日龄腔上囊比较，差异极显著；与21日龄腔上囊比较，差异显著。与绵羊TF组7、14、21日龄肉仔鸡胸腺、脾脏、腔上囊均比较，差异极显著。与山羊TF组7、14、21日龄肉仔鸡胸腺、脾脏、腔上囊比较，差异极显著。与牛TF组7、14、21日龄肉仔鸡胸腺、脾脏、腔上囊比较，差异极显著。试验证明，不同动物TF中，乌骨鸡TF对肉仔鸡免疫器官的促生长作用最强。

表3 不同动物来源TF对肉仔鸡免疫器官指数影响比较试验

注：1.对照组和试验组比较，*为差异显著，**为差异极显著； 2.乌骨鸡TF组和其他试验组比较，a为差异显著，b为差异极显著

3 讨论

病毒性疾病是目前国内肉鸡行业发展的主要制约因素之一，尤其是近年来，随着我国养禽业的发展，禽病毒性疾病的危害越来越突出。疫苗在预防病毒病起着很重要的作用，但由于多种因素的影响，生产中常见有免疫失败而病毒性疾病的暴发现象，给国内养禽业造成了巨大的经济损失。从改善家禽整体免疫状态入手，采取有效的措施提高家禽免疫细胞对疫苗的免疫应答，增强现有禽用疫苗的免疫效果，降低免疫失败发生概率。因此，研究开发新型免疫调节剂，对养禽业发展成为新的突破点。

本试验表明，不同动物来源TF均对T细胞转化增殖作用显著，促免疫器官生长发育作用也显著，TF通过促T细胞转化增殖作用和促免疫器官生长发育，可显著提高肉仔鸡免疫功能。TF对肉仔鸡免疫调节免疫功能的作用强弱与来源动物密切相关，从试验结果得出，乌骨鸡来源TF活性最强，牛来源的TF活性最弱；不同动物来源TF在饮水投服时在24 h内激活体内T细胞，120-168 h左右作用达高峰，过240 h仍然使保持T细胞的激活状态，说明TF激活T细胞作用迅速，被激活的T细胞超过240 h仍然保持较高激活状态。不同动物来源TF对T细胞体内和体外转化增殖试验结果比较，可看出TF对T细胞体内和体外转化增殖作用高度一致。

[1] 崔恒宓,金韶华,毛九德.猪脾转移因子的部分生化和免疫性及其应用[J].畜牧兽医学报,1994,25(4):317-322.

[2] Lawrence,H S.TransferFactor[J].Advan Immunol,1969,2:195-199.[3] 张广英.兽用转移因子的研究[J].中国畜禽传染病,1991,5:58-59.

[4] 李繁,谢明权,林辉环.免疫增强剂促进鸡球虫细胞免疫的研究[J].中国预防兽医学报,2000,22(3):196-199.

[5] 李文学,李海峰,李明哲,等.犬脾脏转移因子的提取与鉴定[J]. 延边大学农学学报,2000 ,22(2):121-126.

[6] 刘玉斌,苟仕金.动物免疫学实验技术[M].西安:吉林科学技术出版社,1989：315-318.

[7] 孔庆波,丛丽媛,李佳，等.犬、猪转移因子对犬淋巴细胞体外转化增殖影响的比较研究[J].畜牧兽医科学，2005,21(6)：26-28.

[8] 金伯泉.细胞和分子免疫学实验技术[M].西安:第四军医大学出版社,2002：90.

[9] 陈志阳,王国华,杨敏.一种简便&快速检测淋巴细胞增殖的方法[J].中国生化药物杂志,2000,21(5):245-247.

[10] 李淑云,刘瑜暄,黄浩,等.应用MTT比色法检测小牛血清支持细胞生长[J].中国生物制品学杂志,1997,10(2):94-97.

[11] 李庆章,刘忠贵. MTT比色分析法检测鸡T淋巴细胞体外增殖反应的研[J].中国兽医杂志,1994,20(9):18-20.

[12] 刘玉斌,苟仕金.动物免疫学实验技术[M].西安:吉林科学技术出版社,1989：234-236.

[13] 刘艳芬,马建升,黄银姬,等.氨酰胺对肉仔鸡免疫器官发育及免疫功能的影响[J].中国兽医学报,2006,26(9):567-569.

Comparison on the function of T-cell-mediated immunity and immune organ index of transfer factor from different species on chicken

HE Meng-lian， ZHAO Man-da， LI Fang

(Shandong Vocational Animal Science and Veterinary College , Weifang 261061, China)

In this study, we investigated the effects of animal transfer factor (TF) of various sources on AA+broiler T cell immune function and immune organ index. One day old AA+ broilers were given TF from different sources in drinking water, and then samples were collected at 7 d, 14 d, and 21d and analyzed. Our results showed that TF in each experimental group had a promoting role in T cell proliferation in vitro and in vivo, and also increased immune organ index. Of which, black bone chicken source TF had the strongest effect.

TF (transfer factor) ; chicken ; T-cell-mediated immunological activity ; immune organ index

ZHAO Man-da

2015-09-11

山东省现代农业技术体系家禽创新团队建设(SDAIT-11-05)

何孟莲(1974- )，女(蒙古族)，讲师，硕士，主要从事动物免疫病理学研究, E-mail：sdmyxymdzhao@163.com

赵满达， E-mail：sdmyxymdzhao@163.com

S858.31

A

0529-6005(2016)11-0032-03