原发性皮肤淀粉样变一家系OSMR基因突变研究

张士发 邢雪莎 赵丽萍 王艳红 罗 阳

原发性皮肤淀粉样变(Primary Cutaneous Amyloidosis，PCA)是一种慢性皮肤病，以淀粉样蛋白沉积在既往正常皮肤内为主要表现，无其他器官受累。目前已有研究证实，定位于5p13.1处的抑瘤素M受体(Oncostatin M receptor，OSMR)基因和定位于5q11.2处的IL-31受体A(IL-31RA)基因的突变与PCA相关[1,2]。我们对一PCA家系的OSMR基因进行了检测，进一步证实PCA的致病基因。

1 对象与方法

1.1 病例资料 先证者III6，女，26岁。8年前背部及四肢出现散在褐色粟粒大斑、丘疹，逐渐密集成片，并向四肢屈侧蔓延，伴有明显瘙痒。近2个月病情加重，皮疹逐渐增多，瘙痒明显，影响睡眠，于2013年1月25日来我院就诊。皮肤科情况：背部及四肢伸侧皮肤可见褐色斑及斑丘疹，密集片状分布，对称分布，界限不清，部分融合成串珠状，部分丘疹表面有少量白色薄屑及少量抓痕(图1)。体检：各系统检查未见异常。实验室检查：血、尿常规，肝、肾功能、血脂、血糖、电解质检查，结果均正常。心电图、胸片正常。患者3年前背部皮损病理组织学检查显示：角质层角化过度，棘细胞层略增厚，基底细胞层液化；真皮乳头层可见淀粉样蛋白沉积，有裂隙，其上表皮略薄。真皮浅层少量淋巴细胞小片状浸润及噬黑素细胞(图2、3)。甲紫染色阳性(图4)。临床诊断：原发性皮肤淀粉样变(斑状)。取得先证者及其家系成员知情同意后对其家系进行调查。

2 方法

2.1 DNA提取 取得知情同意后，采集家系23个家系成员外周静脉血各5 mL，EDTA抗凝，大连宝生物有限公司试剂盒(Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0)提取基因组DNA。

图1 后背上部可见褐色斑及斑丘疹，部分融合成串珠状，密集片状对称分布图2 角质层角化过度，角质层角化过度，棘细胞层略增厚(HE，×100)图3 真皮乳头层可见淀粉样蛋白沉积，浅层少量淋巴细胞小片状浸润(HE，×200)图4 甲紫染色真皮乳头可见异染性团块状物质沉积(×200)

表1 OSMR引物序列及退火温度

2.2 PCR扩增 以患者基因组DNA为模板，应用多聚酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR)扩增 OSMR基因各外显子及外显子内含子交接片段。PCR引物序列和退火温度见表1；PCR反应总体积为50 μL，包括2×GC buffer I 25 μL， dNTP(2.5 mmol/L)8 μL，上下游引物(10 pmol/L)各2.5 μL，LA Taq(5U/μL) 0.5 μL，基因组DNA约40 ng，无菌水定容至50 μL。反应条件为：95℃预变性5 min；94℃ 变性30 sec，退火30 sec，72℃延伸1 min，循环35次后总延伸72℃ 10 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，送生工生物工程(上海)(http：//genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgBlat?command=start)股份有限公司测序。测序结果与UCSC数据库基因组序列进行比对分析，分析样本是否存在突变情况，此外，通过人类基因突变数据库(HGMD)(www.genecards.org)确定该位点是否为新的突变位点。

3 结果

3.1 家系调查 先证者家族3代共有25人，患者4例(I1已故)，先证者及先证者母亲、舅舅、外祖父均有类似皮损(图1)，余家系人员无明显类似皮损。先证者父母非近亲婚配，没有其他遗传相关性疾病。该家系代代发病，父母双方正常者，其子女均正常，符合常染色体显性遗传方式(图5)。

图5 PCA家系图：25个家系成员中有4例患者

先证者母亲(II5)，女，56岁，皮疹与先证者相似，主要分布于四肢，为原发性皮肤淀粉样变(斑状)，病史27年。先证者舅舅(II1)，男，60岁。双上肢伸侧及双小腿胫前可见散在分布淡褐色粟粒至绿豆大丘疹，部分融合成串珠样，高于皮肤，系原发性皮肤淀粉样变(苔藓样)，病史33年。先证者外祖父(I1)，已故，有类似皮疹，但病情不详，不能分型。

3.2 基因突变检测 先证者OSMR基因的第15外显子中检测出错义突变c.2081C>T(p.Pro694Leu)(图6)，其家系中的其他2例患者也携带相同的突变位点，而其家系内的正常人未见异常。

4 讨论

PCA是由一种或多种蛋白质与粘多糖结合而成的蛋白复合体沉积于血管壁、纤维组织、黏膜和腺体等基底膜及真皮层所致的慢性皮肤病[1,3]，根据临床表现可分为苔藓样淀粉样变、斑状淀粉样变、原发性限局性结节性皮肤淀粉样变、结节萎缩型皮肤淀粉样变、皮肤异色病样淀粉样变、腰骶骨部皮肤淀粉样变和摩擦性皮肤淀粉样变等[4]。本文3例患者也分属于前2种不同的临床亚型。

图6 PCR扩增，基因测序图，显示c.2081C>T(p.Pro694Leu)错义突变

2010年，Lin等[2]首次将PCA的染色体突变位点定位于5号染色体的OSMR基因及IL-31受体A基因。家族性原发性局限性皮肤淀粉样变(familial primary localized cutaneous amyloidosis， FPLCA)家系中，致病的杂合子错义突变位于OSMR基因，该基因可编码OSM特异性受体β亚基[5]和IL-6受体α[6]。OSMR基因和IL-31RA基因分别编码OSM受体β亚基和IL-31RA，二者可影响Jak/STAT、MAPK和 PI3K/Akt 活性，均属于IL-6型受体[5]，该受体影响角质形成细胞的增殖、分化与凋亡，与FPLCA皮损的形成有关。中国一PLCA家系中先证者OSMR基因的第13位外显子发生杂合1845A>T突变[7]。另有报道29例PCA家系患者IL-31RA 基因上由c.1562C>T点突变所致的致病突变位于OSMR突变中III型纤维蛋白原重复区域[2]。目前已报道的PCA 相关OSMR基因突变，均为位于OSM受体 β亚基细胞外III型纤维蛋白控制区域的错义突变，如p.P694L，p.K697T和p.KD647V位点[1]，以及p.I691T和p.G618A位点[2]。

本家系3例患者显示出家族遗传特征：3代25人中4例患者，男、女各2例，发病年龄18～29岁。遗传方式和家系基因型分析显示，该家系3代均有患者，呈垂直连续遗传，发病与性别无关，夫妻健康者子女不发病，符合常染色体显性遗传方式。该家系3例PCA患者OSMR基因第15号外显子均检测出c.2081位置C >T错义突变，使氨基酸序列第694号脯氨酸转变为亮氨酸，而家系内正常人未检测到该突变，与文献[3,8]报道相同，说明本家系患者OSMR基因的第15外显子错义突变与PCA发病密切相关。也有报道色素异常性皮肤淀粉样变病患者及其家系成员OSMR基因的第14、15外显子和IL-31RA第12外显子未发现突变[9]。一FPCLA家系中所有成员均未发现 OSMR基因突变[10]，提示PCA的不同亚型可能存在遗传学上的突变，但本文2种亚型均显示一种突变。

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