脑胶质瘤组织中c-Myc、MDM2的表达及意义

戴清波，郑文明

(三亚市人民医院，海南三亚 572000)

脑胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，约占原发性脑肿瘤的50%，具有早期确诊率低、呈浸润性生长、高侵袭性、高复发率及生存预后差等特性[1]。在我国，脑胶质瘤发病率呈逐年上升趋势，据统计，我国脑胶质瘤发病率约6.2/10万，病死率约3.2/10万[2]。据WHO神经系统分类标准，脑胶质瘤病理分级为Ⅰ～Ⅳ级，其中Ⅰ级和Ⅱ级为低级别胶质瘤，患者预后尚可，其中位生存时间5～8年，而高级别的Ⅲ级间变型星形细胞瘤、Ⅳ级胶质母细胞瘤的中位生存时间分别约3年、14.4个月[3]。手术辅以放化疗及靶向治疗的综合治疗方案，是目前国际上治疗脑胶质瘤的常规手段，但患者的生存质量和预后并不乐观，目前，在基因水平寻找治疗靶点是寻找针对性治疗药物的研究热点。c-Myc基因是常见的原癌基因，c-Myc蛋白可调控核转录因子活性，参与DNA增殖、促进肿瘤细胞异常分化及侵袭迁移等过程[4]。鼠双微体2(MDM2)基因是一种进化保守的原癌基因，是抑癌基因p53的关键负调控因子，在多数肿瘤组织中存在MDM2异常表达现象[5]。2012年1月～2017年12月，我们检测了脑胶质瘤组织中c-Myc、MDM2蛋白表达，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2012年1月～2017年12月我院保存的89例份脑胶质瘤组织石蜡标本，患者男46例、女43例，年龄19～76(45±9.57)岁。根据WHO神经系统分类标准，Ⅰ级6例，Ⅱ级42例，Ⅲ级34例，Ⅳ级7例，其中Ⅰ级和Ⅱ级为低病理分级，Ⅲ级和Ⅳ级为高病理分级。同期，选择因脑外伤入院治疗患者的正常脑组织石蜡标本35例份，患者男20例、女15例，年龄20～69(43±12.57)岁。两组患者的性别比例、年龄等基础资料差异无统计学意义，具有可比性。本研究经伦理委员会审核同意，并获得所有研究对象知情同意。

1.2 脑组织中c-Myc、MDM2蛋白表达检测 采用免疫组化法。石蜡标本(厚度约5 μm)，60 ℃烘烤后，二甲苯脱蜡，梯度乙醇再水化；微波加热进行抗原修复，滴加3%H2O2灭活内源性过氧化物酶；分别滴加c-Myc蛋白和MDM2蛋白的抗原工作液，4 ℃孵育过夜；生物素二抗工作液，室温孵育30～60 min；DAB显色，苏木素复染；中性树胶封片，显微镜下观察。c-Myc、MDM2蛋白均主要定位于细胞质，根据蛋白染色强度和阳性百分比进行半定量评分，染色强度评分：无着色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色为3分。阳性细胞百分比评分：<5%为0分，5～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。计算染色强度评分与阳性细胞百分比评分的乘积，以0～5分为阴性表达，6～12分为阳性表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。计数资料以例或百分比表示，两组或多组间比较采用卡方检验或Fisher精确检验，等级资料相关性分析采用Spearman等级相关检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 c-Myc、MDM2蛋白在脑组织中表达比较 脑胶质瘤、正常脑组织中c-Myc蛋白阳性表达率分别为55.06%(49/89)、8.57%(3/35)，二者比较差异有统计学意义(χ2=22.293，P=0.000)；脑胶质瘤、正常脑组织中MDM2蛋白阳性表达率分别为48.31%(43/89)、2.86%(1/35)，二者比较差异有统计学意义(χ2=22.675，P=0.000)。

2.2 脑胶质瘤组织中c-Myc、MDM2蛋白表达与患者病理分级的关系 c-Myc蛋白在低病理分级(Ⅰ～Ⅱ级)、高病理分级(Ⅲ～Ⅳ级)脑胶质瘤组织中的阳性表达率分别为43.75%(21/48)、68.29%(28/41)，二者比较，差异有统计学意义(χ2=5.838，P=0.020)；MDM2蛋白在低病理分级(Ⅰ～Ⅱ级)、高病理分级(Ⅲ～Ⅳ级)脑胶质瘤组织中的阳性表达率分别为29.17%(14/48)、70.73(29/41)，二者比较，差异有统计学意义(χ2=15.298，P=0.020)。

2.3 脑胶质瘤组织中c-Myc、MDM2蛋白表达间的关系 脑胶质瘤组织中c-Myc蛋白、MDM2蛋白同为阴性表达9例，同为阳性表达12例，c-Myc蛋白表达阴性、MDM2蛋白表达阳性31例，c-Myc蛋白表达阳性、MDM2蛋白表达阴性37例，Spearman等级检验结果显示，脑胶质瘤组织中c-Myc、MDM2蛋白表达呈正相关(r=0.370,P<0.05)。

3 讨论

脑胶质瘤是一种多基因异常表达的疾病，其发生发展可能与原癌基因活化、抑癌基因失活、凋亡相关基因异常、血管活性因子高表达、相关信号转导通路的激活等相关。c-Myc基因属于原癌基因Myc家族成员，定位于人染色体8q24。c-Myc蛋白是一种转录因子，可与MAX蛋白形成异源二聚体，结合至DNA核心序列，调控目的基因表达，如c-Myc可调节细胞周期蛋白(Cyclin)、乳酸脱氢酶(LDH-A)、转录因子E2F、凋亡相关蛋白Bax表达，进而影响细胞生物学行为[6]。正常生理条件下，c-Myc基因表达受到严格调控，据统计，约70%人类肿瘤组织中存在c-Myc基因过度扩增、异常表达、重排等现象，参与调控肿瘤细胞增殖、代谢、分化及细胞周期等过程[7]。

MDM2与p53形成负反馈环路，可抑制p53基因转录活性，其次，MDM2是泛素蛋白酶的重要组分，且MDM2作为一种特异性针对p53的泛素E3连接酶，可促进p53蛋白泛素化降解，在维持p53蛋白动态平衡中发挥关键作用[8]。MDM2-p53环路在调节DNA修复、细胞周期、细胞凋亡及衰老等生理病理过程中起关键作用。大量研究表明，p53具有作为肿瘤治疗靶标的巨大潜能，通过调控MDM2，可间接调控p53功能，如最具代表性的MDM2抑制剂Nutlin-3a，可竞争性结合MDM2，间接激活p53，并且无细胞毒性[9]，其同系物RG7112已进入Ⅰ期临床试验阶段[10]。有分析结果提示，胶质瘤发生进展可能与MDM2过表达有关。本研究中，免疫组化结果显示，c-Myc、MDM2蛋白在脑胶质瘤组织中的阳性表达率均分别高于正常脑组织，Yi等[11]研究结果亦证实c-Myc可促进胶质瘤形成，同时有研究结果表明，LncRNA ENST00462717及microRNA-610[12]均可通过靶向抑制MDM2基因表达，进而抑制胶质瘤细胞增殖，MDM2能促进胶质瘤细胞增殖，本研究结果进一步证实c-Myc、MDM2在脑胶质瘤形成过程中发挥原癌基因功能。此外，本研究发现c-Myc、MDM2蛋白在高病理分级(Ⅲ～Ⅳ级)脑胶质瘤组织中的阳性表达率较高，提示c-Myc、MDM2蛋白高表达均促进了脑胶质瘤的病情恶性进展。

Spearman等级相关检验结果表明，脑胶质瘤组织中c-Myc与MDM2蛋白表达呈正相关关系，提示二者在脑胶质瘤发生发展过程中具有协同作用。Kim等[13]研究发现，p53突变可抑制c-Myc基因表达，进而诱导胶质瘤发生；还有研究显示c-Myc可间接调控p53基因转录；此外，有研究表明，CT联合c-Myc、MDM2检测有助于非小细胞肺癌病情判断[14]。由此推测，在胶质瘤发生发展过程中，c-Myc、p53及MDM2三者间可能存在间接调控机制。

综上所述，脑胶质瘤组织中c-Myc、MDM2蛋白表达增加，且均与较高病理级别有关;联合检测c-Myc、MDM2可能有助于患者病情预测。