环氧二十碳三烯酸抑制剂通过AKT/FoxO1信号通路抑制棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡

张洁，张涛，廖宇峰，王扬淦，万静*

（1武汉大学中南医院心内科，武汉430000；2武汉科技大学信息科学与工程学院，武汉 430065；3湖北医药学院附属国药东风总医院心内科，十堰 442000）

花生四烯酸（arachidonic acid，AA）是一种生物体内含量非常丰富的多不饱和脂肪酸，广泛分布于多个组织器官中[1]。花生四烯酸主要通过环氧化酶（COX）、脂氧化酶（LOX）和细胞色素P450表氧化酶（cytochrome P450）代谢，其中经细胞色素P450表氧化酶途径可代谢生成包括5, 6-EET、 8,9-EET、11,12-EET和14, 15-EET在内的4种不同类型的环氧二十碳三烯酸[2]。EETs可通过细胞膜分泌到细胞外发挥生物学作用，或由可溶性表氧化物水解酶（soluble epoxide hydrolase, sEH）代谢为生物活性明显减弱的二羟基-二十碳三烯酸（dihydrox-yeicosatrienoic acids，DHETs）[3]。研究表明，在心血管系统中，EETs可舒张冠状动脉，促进内皮细胞增殖，抑制炎性反应。14, 15-环氧二十碳-5(Z)-烯酸（14, 15-epoxyeicosa-5(Z)-enoic acid，14, 15-EEZE）是14, 15-EET的结构类似物，也是EETs的选择性拮抗剂，可抑制EETs在心血管系统中的多种保护作用[4]。14, 15-EET已被证实有抗心肌细胞凋亡作用，但是加用其抑制剂14, 15-EEZE后对心肌细胞的作用仍有待研究。细胞磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol-3–kinase/AKT）信号通路参与调节对心肌细胞凋亡的保护作用，已有研究表明该通路在14, 15-EET对心肌细胞的保护作用的机制中扮演重要角色。FoxO1是FoxO家族中的亚族，同样在调节细胞周期及凋亡中发挥重要作用。因此，本实验选用14, 15-EET及其抑制剂14, 15-EEZE，观察两者对棕榈酸（palmitate acid，PA）诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用，同时对细胞AKT和Fox01磷酸化表达进行检测，为进一步研究 14, 15-EET及其抑制剂14, 15-EEZE在心肌细胞凋亡中的作用及机制提供线索。

材料与方法

1 细胞培养与实验分组

H9c2细胞株由武汉大学细胞典藏中心提供，用含15%胎牛血清的高糖DMEM静置孵育在37℃、5%CO2的细胞培养箱中。……