甘草酸二铵对百草枯刺激大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞分泌TGF⁃β1的影响

向沥 方辰 周志兵 张剑锋

广西医科大学第二附属医院全科医学教研室（南宁530007）

前期研究已经证实，转化生长因子（TGF⁃β1）在百草枯导致的急性肺损伤和肺纤维化中起到关键作用，但其作用机制尚不明确。Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）是百草枯致肺损伤的主要靶细胞［1］，AECⅡ在此过程中出现细胞凋亡、线粒体破坏等表现［2］。AECⅡ也是TGF⁃β1分泌的重要来源［3］。我们同期动物实验已经发现，药物甘草酸二铵对急性肺损伤具有保护作用，并能抑制急性肺损伤时TGF⁃β1的过度表达［4］，并因此推测：甘草酸二铵对百草枯中毒时Ⅱ型肺泡上皮细胞具有保护作用。但甘草酸二铵抑制肺损伤时TGF⁃β1表达是否与AECⅡ相关仍未有报道。本实验将通过体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞，构建甘草酸二铵干预百草枯刺激大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤模型，进一步观察甘草酸二铵对百草枯刺激大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞分泌TGF⁃β1的影响，以期了解其具体作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料和试剂 大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（上海沪震实业公司），RPMI Medium 1640培养液、胎牛血清（美国Gibco公司），米非司酮、MTT试剂（美国Sigma公司），青链霉素混合液（100×）（北京索莱宝科技有限公司），百草枯（美国Sigma公司），甘草酸二铵（江苏正大天晴制药有限公司），总RNA抽取试剂盒、逆转录试剂盒（美国Roche公司），大鼠TGF⁃β1 ELISA试剂盒（武汉华美生物工程有限公司），荧光定量PCR仪（美国Applied Bio⁃systems StepOne公司），酶标仪（美国BioTek Instru⁃ments公司）。

1.2 细胞培养及分组 按PQ浓度将AECⅡ分为不同浓度的培养组：200、400、600、800、1 000、1 500、2 000 μmol/L组，了解IC50的PQ浓度。确立以1 000 μmol/L PQ刺激AECⅡ，再重新于96孔板中加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0 mg/mL DG培养2 h，再以对应浓度的DG+1 000 μmol/L PQ培养24 h。……